Une nouvelle utilisation d’échographie en trois dimensions de haute fréquence pour la caractérisation de grossesse précoce chez la souris

L'objectif général de cette procédure d'imagerie par échographie est de détecter, surveiller et caractériser la grossesse précoce chez la souris. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biologie de la reproduction murine et à établir la croissance, le développement et la viabilité des grossesses précoces chez la souris. Le principal avantage de cette technique est que ces grossesses peuvent être caractérisées et phénotypées in vivo, sans interruption de la gestation, permettant ainsi une collecte longitudinale de données.

En général, les personnes novices dans cette méthode éprouvent des difficultés à obtenir toutes les images dans un même plan. Cela est dû aux petits mouvements progressifs nécessaires de la sonde échographique. Commencez par préparer l'appareil d'échographie.

Activez le transducteur, puis fixez le support moteur 3-D au transducteur. Ensuite, reliez la sonde au collier du transducteur. Placez maintenant la souris en position dorsale sur la plateforme de surveillance.

Lui administrer un anesthésique par cône nasal et fixer délicatement toutes ses pattes aux capteurs de surveillance de la fréquence cardiaque sur la plateforme. Ensuite, appliquer environ un ou deux millilitres de gel de transmission pour échographie sur l'abdomen. Puis positionner la sonde échographique sur la partie inférieure de l'abdomen à l'aide de la platine motorisée manuelle.

À l’aide de l’échographie, localisez la vessie, qui doit apparaître comme un cercle sombre rempli de nourriture juste au-dessus de l’orifice vaginal. Une fois la vessie localisée, déplacez très lentement la sonde vers le haut pour visualiser l’utérus gravide, qui doit présenter une forme cylindrique avec des zones rondes correspondant aux sites de gestation. Cela peut être décrit comme des perles enfilées sur une chaîne.

Procédez maintenant à l'imagerie en 2D. Une fois l'utérus gravide identifié, commencez au site gestationnel le plus proche de la vessie et déplacez-vous lentement et séquentiellement en direction céphalique pour déterminer l'emplacement de tous les sites gestationnels. Enregistrez l'image.

Si le rein, la rate ou le foie sont visibles, alors l'exploration est trop céphalique. Repositionnez la sonde plus près de la vessie et enregistrez l'image. Ensuite, réalisez l'exploration du corne utérine controlatérale de la même manière.

Geler l'image lorsque le cadre échographique est centré sur la grossesse ou le site d'implantation, puis enregistrer l'image pour analyse. Utiliser ultérieurement ou immédiatement les images enregistrées pour mesurer les positions d'implantation en prenant comme repère la réaction de décidualisation hyperéchogène. Cliquer manuellement sur l'outil de mesure, puis cliquer sur l'emplacement d'un site d'implantation.

Ensuite, faites glisser le curseur jusqu'au site d'implantation suivant et cliquez à nouveau pour tracer une ligne. Le logiciel indique alors la longueur de la ligne. Une fois que tous les sites d'implantation ont été mesurés, utilisez la même technique pour mesurer la taille de la vésicule gestationnelle et la taille du bourgeon embryonnaire.

Après l'acquisition d'images en 2-D, positionnez la sonde dans une zone située approximativement au point médian de l'image 3-D souhaitée. Par exemple, si l'on réalise une imagerie en 3-D d'une pomme, placez la sonde au niveau du cœur. Une fois la sonde correctement positionnée, effectuez une acquisition 3-D.

La platine motorisée 3D parcourra cette distance le long de l'utérus en une série d'étapes ou d'images. Pendant l'acquisition de l'analyse, veillez à ce que les structures visées soient entièrement capturées. Après avoir recueilli l'analyse, chargez-la pour le traitement d'image.

Choisissez les méthodes parallèle et rotationnelle pour le traitement, ce qui chargera toutes les images 3D dans une seule boîte 3D. Ensuite, sélectionnez une taille de pas de 0,08 millimètre, puis commencez à une extrémité du bloc d'image et parcourez toutes les images pour vous familiariser avec les données. Ensuite, commencez à une extrémité de la pile et tracez manuellement le contour d'un objet d'intérêt.

Ensuite, passez à l'image suivante et tracez manuellement le contour de l'objet à nouveau. Poursuivez ce processus jusqu'à ce que toutes les images aient été annotées manuellement. Une fois terminé, cliquez sur « terminer » pour obtenir une image en 3-D et le calcul du volume de l'objet.

Pour l'image, choisissez entre une superposition en treillis ou en surface pleine. Ensuite, décidez de conserver ou d'éliminer les informations de l'image environnante afin d'améliorer la clarté. L'échographie à haute fréquence peut détecter le développement d'un site d'implantation dès 5,5 jours après la conception.

En utilisant l'endomètre décidualisé plus clair et hyperéchogène comme marqueur des sites d'implantation, le nombre de sites d'implantation et leur espacement seront quantifiés à 6,5 jours après la conception. Lorsque la gestation progresse jusqu'à 7,5 jours après la conception, un sac gestationnel plus sombre, hypoéchogène, ainsi qu'un bourgeon embryonnaire deviennent clairement identifiables. Des reconstructions tridimensionnelles de l'utérus de souris à 6,5 jours après la conception ont été réalisées selon deux formats : en treillis et en superposition pleine.

À 7,5 jours post-conception, l'analyse en 3D était tout aussi révélatrice. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment obtenir des images échographiques précises en 2D et en 3D, afin de caractériser une grossesse sans interruption. Le temps total nécessaire à l'acquisition échographique, en 2D comme en 3D, est d'environ 10 à 20 minutes entre les mains d'un utilisateur expérimenté.

Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de garder les mouvements petits et progressifs. Cette technique a permis aux chercheurs d'explorer les phénotypes de grossesse normaux et anormaux chez la souris.