Name: Un pH de Novel In Vitro Live-imagerie phagocytose médiée par dosage de l’Astrocyte utilisant Synaptosomes indicateur conjugué (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-05T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Apprenez une méthode d'imagerie en direct in vitro pour mesurer la phagocytose des astrocytes et des microglies à l'aide de synaptosomes conjugués à un indicateur de pH. Cette technique permet d'analyser les cinétiques d'englobement et de dégradation en temps réel.

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Les auteurs remercient Jung Joo-Yeon pour sa prise en charge expérimentale au cours de la purification de synaptosomes et Jungjoo Park pour les images de synaptosomes bénéficiant d’une orientation du PS. En outre, nous remercions tous les membres en laboratoire de Chung pour discussion utile. Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale de la recherche de subvention de Corée (NRF) financée par le gouvernement coréen (MSIP) (FRO-2016M3C7A1905391 et 2016R1C1B3006969-NRF) (W.-S. C).

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<li>Allen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+glypicans+4+and+6+promote+formation+of+excitatory+synapses+via+GluA1+AMPA+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Astrocyte glypicans 4 and 6 promote formation of excitatory synapses via GluA1 AMPA receptors.</a> Nature. 486 (7403), 410-414 (2012).</li>
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<li>Jones, R. S., Minogue, A. M., Connor, T. J., Lynch, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid-beta-induced+astrocytic+phagocytosis+is+mediated+by+CD36%2C+CD47+and+RAGE%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Amyloid-beta-induced astrocytic phagocytosis is mediated by CD36, CD47 and RAGE.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 8 (1), 301-311 (2013).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TREM2+lipid+sensing+sustains+the+microglial+response+in+an+Alzheimer%27s+disease+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">TREM2 lipid sensing sustains the microglial response in an Alzheimer's disease model.</a> Cell. 160 (6), 1061-1071 (2015).</li>
<li>Sekar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schizophrenia+risk+from+complex+variation+of+complement+component+4%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Schizophrenia risk from complex variation of complement component 4.</a> Nature. 530 (7589), 177-183 (2016).</li>
<li>Hong, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complement+and+microglia+mediate+early+synapse+loss+in+Alzheimer+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Complement and microglia mediate early synapse loss in Alzheimer mouse models.</a> Science. 352 (6286), 712-716 (2016).</li>
<li>Chung, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+allele-dependent+role+for+APOE+in+controlling+the+rate+of+synapse+pruning+by+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Novel allele-dependent role for APOE in controlling the rate of synapse pruning by astrocytes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (36), 10186-10191 (2016).</li>
<li>Purice, M. D., Speese, S. D., Logan, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+glial+clearance+of+degenerating+axons+in+aged+Drosophila+is+due+to+reduced+PI3K%2FDraper+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Delayed glial clearance of degenerating axons in aged Drosophila is due to reduced PI3K/Draper activity.</a> Nat Commun. 7, 12871(2016).</li>
<li>Loov, C., Mitchell, C. H., Simonsson, M., Erlandsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slow+degradation+in+phagocytic+astrocytes+can+be+enhanced+by+lysosomal+acidification%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Slow degradation in phagocytic astrocytes can be enhanced by lysosomal acidification.</a> Glia. , (2015).</li>
<li>Xiao, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+astrocytic+lysosome+biogenesis+facilitates+Abeta+clearance+and+attenuates+amyloid+plaque+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhancing astrocytic lysosome biogenesis facilitates Abeta clearance and attenuates amyloid plaque pathogenesis.</a> J Neurosci. 34 (29), 9607-9620 (2014).</li>
<li>Lu, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axon+degeneration+induces+glial+responses+through+Draper-TRAF4-JNK+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Axon degeneration induces glial responses through Draper-TRAF4-JNK signalling.</a> Nat Commun. 8, 14355(2017).</li>
<li>Dunkley, P. R., Jarvie, P. E., Robinson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+Percoll+gradient+procedure+for+preparation+of+synaptosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A rapid Percoll gradient procedure for preparation of synaptosomes.</a> Nat Protoc. 3 (11), 1718-1728 (2008).</li>
<li>Stigliani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia+re-sealed+particles+freshly+prepared+from+adult+rat+brain+are+competent+for+exocytotic+release+of+glutamate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Glia re-sealed particles freshly prepared from adult rat brain are competent for exocytotic release of glutamate.</a> J Neurochem. 96 (3), 656-668 (2006).</li>
<li>Foo, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+method+for+the+purification+and+culture+of+rodent+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Development of a method for the purification and culture of rodent astrocytes.</a> Neuron. 71 (5), 799-811 (2011).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li>
<li>Cahoy, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transcriptome+database+for+astrocytes%2C+neurons%2C+and+oligodendrocytes%3A+a+new+resource+for+understanding+brain+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A transcriptome database for astrocytes, neurons, and oligodendrocytes: a new resource for understanding brain development and function.</a> J Neurosci. 28 (1), 264-278 (2008).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Dans cet article, nous présentons des méthodes pour une longue durée d’imagerie live in vitro phagocytose analyse en utilisant des cellules gliales purifiées et synaptosomes conjugué indicateur de pH. Nous montrons que par rapport à la microglie, astrocytes possèdent la capacité de dégradation et d’une durée différente lors de la phagocytose des synaptosomes. En outre, nos résultats suggèrent que les facteurs astrocyte-sécrétée, qui contiennent des molécules ponts comme GAS6, des protéines et MEGE8, sont essenti...

Les cellules gliales, qui font référence à des cellules non excitables dans le cerveau, sont le type de cellule majeur dans le système nerveux central (CNS). Auparavant, les cellules gliales étaient considérées comme des cellules de soutien simples qui principalement jouent un rôle passif dans le maintien de la survie neuronale et propriétés synaptiques basales. Cependant, des preuves nouvelles a révélé que les cellules gliales jouent un rôle plus actif dans divers aspects de la neurobiologie, comme le maintien de l’homéostasie du cerveau, médiation synapse formation1,2,3 et synapse élimination de4,5et moduler la plasticité synaptique6,7. Les cellules gliales dans le SNC comprennent les astrocytes, la microglie et les oligodendrocytes. Parmi ces cellules, les astrocytes et les cellules microgliales auraient dû être divulgués à jouer un rôle phagocytaire en engloutissant des synapses4,5, de cellules apoptotiques8, débris neural9et protéines pathogènes, comme la bêta-amyloïde plaques de10,11. Dans le développement du cerveau, astrocytes éliminent des synapses dans le noyau géniculé latéral (dLGN) dorsal à MERTK - et MEGF10-dependent phagocytose4. De même, la microglie également éliminer C1q-enduite synapses au cours des stades de développement par le biais de la cascade de complément classique5. Fait intéressant, il a été suggéré que des défauts d’élagage synapse peuvent être l’un des initiateurs de plusieurs troubles neurologiques. Par exemple, il a été démontré que des mutations dans le composant de complément 4 (C4), qui augmente l’élagage synapse médiée par le complément de la microglie, sont fortement associées à la prévalence de la schizophrénie chez les humains,12. Une étude récente a également montré que la voie classique de complément est hyperactivé dans les étapes de l’initiation de AD et induit la perte précoce de synapse dans cette maladie13.
Par rapport à la phagocytose médiée par les cellules microgliales, si phagocytose médiée par les astrocytes contribue à l’initiation et la progression de divers troubles neurologiques est moins claire. Cependant, une étude récente suggère que les facteurs qui modifient le taux d’élagage de la synapse normale par les astrocytes peuvent perturber l’homéostasie du cerveau et contribuer à AD susceptibilité et pathologie14. Le taux d’élagage de la synapse par les astrocytes est fortement contrôlé par isomères de l’ApoE , possédant un allèle protecteur pour AD (ApoE2) fortement améliorer la vitesse et un allèle risque d’Alzheimer (ApoE4) abaisser significativement le taux. En outre, des souris transgéniques exprimant le gène ApoE4 accumulent beaucoup plus C1q synaptique que contrôle ou ApoE2 souris14. Ces données suggèrent qui réduisaient la phagocytose médiée par les astrocytes au début du cerveau peut provoquer l’accumulation de débris sénescentes C1q-enduite synapses/synaptique qui active la phagocytose médiée par le complément des microglies, dégénérescence synaptique au volant . La capacité phagocytaire altération des astrocytes chez les porteurs du gène ApoE4 peut aussi contribuer à l’accumulation incontrôlée des plaques bêta-amyloïdes dans le cerveau touchées par AD.
En outre, il a été démontré que les cellules gliales du cerveau âgé de Drosophila perdent leur capacité phagocytaire due à une diminution traduction de Draper, un homologue de Megf10 qui utilisent des astrocytes pour phagocytants des synapses. Rétablissement des taux de Draper a sauvé la capacité phagocytaire des cellules gliales, qui a éliminé efficacement les débris axonale endommagées du cerveau âgé dans une mesure similaire que celle du cerveau jeune, indiquant que vieillissement induit par des altérations dans la capacité phagocytaire des les astrocytes peuvent contribuer à la perturbation de l’homéostasie du cerveau15.
Selon ces nouveaux résultats, modulant la capacité phagocytaire des astrocytes peut être une stratégie thérapeutique séduisante pour prévenir et traiter divers troubles neurologiques. À cet égard, plusieurs tentatives d’améliorer la capacité phagocytaire des astrocytes, par exemple, en induisant une acidification des lysosomes avec nanoparticules acides16 et surexprimant le facteur de transcription EB (TFEB), qui peut améliorer ont été lysosome biogenèse17. Malgré ces tentatives, on ignore encore comment les astrocytes et les cellules microgliales diffèrent dans leur cinétique phagocytaire et savoir si nous devrions augmenter ou diminuer leurs capacités phagocytaires dans diverses maladies.
Dans cet article, nous présentons un roman in vitro test pour détecter la capacité phagocytaire des astrocytes en temps réel. Les données montrent différentes cinétiques de dégradation et d’une durée dans les astrocytes et les cellules microgliales. Conditionné par l’astrocyte moyen (ACM), qui contient des facteurs sécrétés d’astrocytes, est essentiel pour phagocytose efficace d’astrocytes et de cellules microgliales. En outre, Megf10, un récepteur phagocytaire dans les astrocytes et un homologue de DEC-1 et Draper, joue un rôle crucial dans la phagocytose médiée par les astrocytes8,18.

<table><tbody><tr><td><fort>Purification des synaptosomes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE soins de santé sciences de la vie</td><td>17-0891-01</td><td></td></tr><tr><td>Démarrage rapide Bradford Protein Assay Kit 2</td><td>BIO-RAD</td><td>5000202</td><td></td></tr><tr><td> Conjugaison de l’indicateur de pH</fort></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>solution de sulfoxyde de diméthyle (DMSO)</td><td>LPS</td><td></td><td></td>DMSO100</tr><tr><td>sondes Molecula</td><td>P36600</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Immunopanning</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10X Earle' s solution saline équilibrée (EBSS)</td><td>Sigma</td><td>E7510</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine</td><td>Bovogen</td><td>BSA025</td><td></td></tr><tr><td>Désoxyrébonucase 1 (DNase)</td><td>Worthington</td><td>IS002007</td><td></td></tr><tr><td>(DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11960-044</td><td></td></tr><tr><td>(dPBS)</td><td>Welgene</td><td>LB001-02</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Griffonia Simplicifolia Lectin(BSL-1)</td><td>Vector</td><td>Labs L-1100</td><td></td></tr><tr><td>IgG+IgM(H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-005-044</td><td></td></tr><tr><td>IgM anti-souris de chèvre (&mu ;-chain)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-005-020</td><td></td></tr><tr><td>Facteur de croissance épidermique se liant à l’héparine</td><td>Sigma</td><td>E4643</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps HepaCAM humain</td><td>R& D systems</td><td>MAB4108</td><td></td></tr><tr><td>Integrine bêta 5 anticorps monoclonal (KN52)</td><td>eBioscience</td><td>14-0497-82</td><td></td></tr><tr><td>L-cystéine</td><td>Sigma</td><td>C7880</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamate</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>N-acetly-L-cyteine (NAC)</td><td>Sigma</td><td>A8199</td><td></td></tr><tr><td>Milieu neurobasal</td><td>Gibco</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>O4 hybridoma supernatant(IgM de souris)</td><td>Bansal et al.23</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Papain</td><td>Worthington</td><td>Is003126</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline/streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Pluristrainer 20 &mu ; m</td><td>PluriSelect</td><td>43-50020-03</td><td></td></tr><tr><td>Poly-D-lysine</td><td>Sigma</td><td>P6407</td><td></td></tr><tr><td>Progestérone</td><td>Sigma</td><td>P8783</td><td></td></tr><tr><td>Dichlorhydrate de putrescine</td><td>Sigma</td><td>P5780</td><td></td></tr><tr><td>Anti-souris purifié CD45</td><td>BD Pharmingen</td><td>550539</td><td></td></tr><tr><td>Souris purifiée anti-rat CD45</td><td>BD Pharmingen</td><td>554875</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium</td><td>Gibco</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>Sélénite de sodium</td><td>Sigma</td><td>S5261</td><td></td></tr><tr><td>Transferrine</td><td>Sigma</td><td>T1147</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Sigma</td><td>T9935</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur de trypsine</td><td>Worthington</td><td>LS003086</td><td></td></tr><tr><td>Tube ultra-transparent (Tube, Thinwall, Ultra-Clear)</td><td>Beckman Coulter</td><td>344059</td><td></td></tr> Appareils centrifuges <tr><td>Collect IP-ACM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Macrosep Advance avec membrane Omega (10k)</td>Appareils centrifuges <td>PALL</td><td>MAP010C37</td><td></td></tr><tr><td>Macrosep Advance avec membrane Omega (30k)</td><td></td><td></td>Essai d’imagerie en direct PALL MAP030C37<td></td></tr><tr><td>Phagocytosis</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Juli stage</td><td>NanoEntek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Time Series Analyzer V3 plugins</td><td>https://imagej.nih.gov/ij/plugins/time-series.html</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

un ph de novel in vitro live-imagerie phagocytose médiée par dosage de l’astrocyte utilisant synaptosomes indicateur conjugué

A Novel In Vitro Live-imaging Assay of Astrocyte-mediated Phagocytosis Using pH Indicator-conjugated Synaptosomes

Les astrocytes sont le type de grandes cellules dans le cerveau et contacter directement les synapses et les vaisseaux sanguins. Bien que les cellules microgliales ont été considérés comme les principales cellules immunitaires et seulement les phagocytes dans le cerveau, les études récentes ont montré que les astrocytes participent également dans divers processus phagocytaires, telles que l’élimination de synapse développement et apurement des plaques de bêta-amyloïde dans la maladie d’Alzheimer (ma). Malgré ces résultats, l’efficacité d’une durée d’astrocyte et la dégradation de leurs cibles ne sont pas claires comparé à celui des cellules microgliales. Ce manque d’information est principalement en raison de l’absence d’un système de test dans lequel la cinétique de l’astrocyte et la microglie-médiée par phagocytose sont facilement comparables. Pour atteindre cet objectif, nous avons développé à long terme d’imagerie live in vitro phagocytose des tests afin d’évaluer la capacité phagocytaire des astrocytes purifiées et la microglie. Dans ce test, détection en temps réel d’enlisement et d’avilissement est possible à l’aide de synaptosomes conjugué indicateur pH, qui émettent une fluorescence rouge vif dans les organites acides, tels que les lysosomes. Notre nouveau dosage fournit la détection simple et efficace de phagocytose par le biais d’images en direct. En outre, cet essai in vitro phagocytose avec utilisable comme une plate-forme de dépistage pour identifier les produits chimiques et des composés qui peuvent renforcer ou inhiber la capacité phagocytaire des astrocytes. Comme l’ont démontré des dysfonctionnement synaptique de l’élagage et l’accumulation de protéine pathogène provoque des troubles mentaux ou maladies neurodégénératives, produits chimiques et composés qui modulent la capacité phagocytaire des cellules gliales devraient être utiles dans le traitement de diverses troubles neurologiques.

Dans cet essai de la phagocytose dans vitro avec imagerie vivre à long terme, nous avons utilisé des synaptosomes des homogénats de cerveau de souris adultes, qui ont été séparés dans la solution dégradée entre solution dégradé de 23 % et 10 % dégradé par ultracentrifugation ( La figure 3). Après la préparation, synaptosomes exposés PS dans leur membrane externe (Figure 4), ce qui laisse croire qu’ils ont perdu leur fonc...

Ce protocole présente un test in vitro d’imagerie live phagocytose pour mesurer la capacité phagocytaire des astrocytes. La microglie et les astrocytes purifiée de rat sont utilisées avec synaptosomes conjugué indicateur de pH. Cette méthode peut détecter la cinétique de dégradation et d’une durée de temps réel et fournit une plate-forme de dépistage approprié pour identifier les facteurs modulant la phagocytose astrocyte.

Un pH de Novel In Vitro Live-imagerie phagocytose médiée par dosage de l’Astrocyte utilisant Synaptosomes indicateur conjugué

Astrocytes are the major cell type in the brain and directly contact synapses and blood vessels. Although microglial cells have been considered the major ...

L’objectif global de cette expérience est de détecter la cinétique d’engloutissement et de dégradation en temps réel des cellules gliales, telles que les astrocytes et les microglies, grâce à l’imagerie en direct in vitro de la phagocytose des synaptosomes conjugués à des indicateurs de pH. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des neurosciences, telles que la façon dont la phagocytose des cellules gliales est régulée dans les cerveaux sains et malades. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet de surveiller et d’analyser efficacement la cinétique phagocytaire en temps réel des cellules gliales grâce à l’imagerie en direct de cellules cultivées in vitro.Cette méthode peut également être utilisée pour dépister les facteurs et les composés qui régulent la capacité d’engloutissement et de dégradation des cellules gliales. Commencez par centrifuger les échantillons de synaptosomes décongelés pendant trois à quatre minutes à 21 092 g et quatre degrés Celsius. Après avoir aspiré les surnageants, remettez les granulés en suspension dans 200 microlitres de carbonate de sodium à 0,1 molaire par tube, en ajoutant deux microlitres d’indicat

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Source : Funes, S., et. al., Cellules de type microglie humaine : différenciation à partir de cellules souches pluripotentes induites et test de phagocytose in vitro sur cellules vivantes à l’aide de synaptosomes humains. J. Vis. Exp. (2022)Cette vidéo présente un test permettant d’étudier la capacité phagocytaire des cellules microgliales à l’aide de synaptosomes marqués à un colorant fluorescent sensibles au pH.

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Évaluation Retinal microglial phagocytaire Fonction<em&gt; In Vivo</em&gt; L&#39;utilisation d&#39;un test basé sur la cytométrie de flux

Ici nous décrivons une méthode in vitro de live-imaging pour visualiser le transport intracellulaire des organelles et le trafic des protéines de membrane de plasma dans les astrocytes murines. Ce protocole présente également une méthodologie d'analyse d'image pour déterminer les itinéraires et la cinétique du transport de marchandises.

Visualisation et analyse du transport intracellulaire d'organites et d'autres cargaisons dans les astrocytes

Les maladies neurodégénératives sont associées à des fonctions microgliales dérégulées. Cet article décrit un test in vitro de phagocytose des cellules de neuroblastome par les macrophages iPSC. Les lectures de microscopie quantitative sont décrites à la fois pour l’imagerie time-lapse sur cellules vivantes et l’imagerie à haut contenu à cellules fixes.

Essai d’imagerie quantitative in vitro pour la phagocytose des cellules mortes du neuroblastome par iPSC-Macrophages

Ce protocole décrit le processus de différenciation des cellules souches pluripotentes induites par l’homme (CSPi) en cellules de type microglie pour l’expérimentation in vitro . Nous incluons également une procédure détaillée pour générer des synaptosomes humains à partir de motoneurones inférieurs dérivés de l’iPSC qui peuvent être utilisés comme substrat pour des tests de phagocytose in vitro utilisant des systèmes d’imagerie de cellules vivantes.

Cellules humaines de type microglie : différenciation à partir de cellules souches pluripotentes induites et dosage in vitro de la phagocytose sur cellules vivantes à l’aide de synaptosomes humains

Nous présentons ici deux protocoles pour quantifier l’engloutissement microglial des synapses vGLUT1-positives et des synaptosomes bruts marqués en rouge pHRodo à l’aide de la cytométrie en flux.

Quantification de l’engloutissement microglial du matériel synaptique à l’aide de la cytométrie en flux

Apprenez une méthode d'imagerie en direct in vitro pour mesurer la phagocytose des astrocytes et des microglies à l'aide de synaptosomes conjugués à un indicateur de pH. Cette technique permet d'analyser les cinétiques d'englobement et de dégradation en temps réel.

Un pH de Novel In Vitro Live-imagerie phagocytose médiée par dosage de l’Astrocyte utilisant Synaptosomes indicateur conjugué

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