Techniques chirurgicales pour le Placement de cathéter et néphrectomie 5/6 dans les modèles murins de la dialyse péritonéale

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la dialyse péritonéale sur les altérations péritonéales ou systémiques en réponse à l’exposition à des liquides, dans des conditions urémiques ou non urémiques. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle permet d’injecter de grandes quantités de liquide par voie intrapéritonéale sur une longue période de traitement et qu’elle permet l’utilisation d’animaux génétiquement modifiés. L’implication de cette technique s’étend à la thérapie et au diagnostic de la détérioration péritonéale structurelle et fonctionnelle, car elle facilite les tests thérapeutiques stratégiques potentiels et l’évaluation des biomarqueurs.

Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous avons anticipé la nécessité d’utiliser des souris génétiquement modifiées pour démarrer les signaux moléculaires impliqués dans les lésions péritonéales. Pour la mise en place du cathéter, après avoir rasé les flancs et le dos droits de chaque animal, confirmez l’absence de réponse au pincement des orteils et appliquez une pommade sur les yeux de l’animal. Ensuite, placez le premier animal sur son flanc gauche sur la table d’opération et désinfectez la peau exposée avec une solution de gluconate de chlorhexidine à 1 %.

Utilisez des ciseaux émoussés pour faire une incision cutanée de 0,5 centimètre sur le flanc droit du corps. Ensuite, séparez soigneusement la peau de la couche musculaire adjacente jusqu’à ce que la peau recouvrant tout le dos de l’animal soit bien séparée. Faites une incision d’un millimètre de diamètre dans la couche musculaire à travers l’incision cutanée et insérez l’extrémité du cathéter et le premier anneau en plastique dans l’incision musculaire.

Suturez fermement la paroi péritonéale autour du cathéter avec la suture non résorbable 5-0 ou 6-0, avec un anneau en plastique à l’intérieur de la cavité péritonéale et l’autre entre le muscle et la peau. Les sutures doivent être préparées avant que l’incision ne soit pratiquée et le muscle ne doit pas être relâché tant que le cathéter n’est pas inséré. Sinon, comme l’incision est très petite, il pourrait être difficile de la retrouver.

Insérez le port d’accès dans l’espace sous-cutané vers la queue de la souris et fermez la plaie avec une deuxième suture. Ensuite, retournez l’animal dans sa cage après une décubitus sternal complet. Quatre à sept jours plus tard, pour commencer le traitement de dialyse péritonéale, chargez d’abord une seringue avec deux millilitres de liquide de dialyse péritonéale et désinfectez la peau entourant l’orifice avec une solution de gluconate de chlorhexidine à 1 %.

Ensuite, utilisez une main pour retenir l’animal par la queue et l’orifice d’accès, et injectez le liquide dans l’orifice avec l’autre main à l’aide d’une aiguille biseautée. Pour une néphrectomie 5/6 et la mise en place d’un cathéter, après avoir préparé les animaux pour la chirurgie, comme démontré, faites une incision cutanée de 0,5 centimètre sur le côté gauche de l’animal, près du bas des côtes. Ouvrez une petite incision dans le muscle pour extraire le rein gauche du péritoine, puis retirez la capsule et la glande surrénale.

Utilisez un cautériseur pour brûler et couper les extrémités du rein et ramener le rein dans la cavité péritonéale. Ensuite, fermez les plaies musculaires et cutanées avec des sutures insolubles 5-0 ou 6-0 et remettez l’animal dans sa cage lorsqu’il est complètement rétabli. Le lendemain, faites une incision cutanée de 0,5 centimètre sur le côté droit de l’animal et séparez la peau à l’arrière de l’animal du muscle, comme démontré.

Faites une incision de 0,3 à 0,4 centimètre dans le muscle et extrayez le rein droit de la cavité péritonéale. Retirez la capsule et la glande surrénale et utilisez une suture 5-0 ou 6-0 non résorbable pour ligaturer la veine rénale, l’artère et l’uretère. Retirez maintenant complètement le rein et insérez le cathéter de manière à ce que le muscle soit maintenu entre les deux anneaux en plastique, comme démontré, avant de refermer la plaie musculaire.

Introduire le port d’accès dans l’espace sous-cutané et fermer la peau, comme démontré. Ensuite, retournez l’animal dans sa cage avec surveillance jusqu’à ce qu’il se rétablisse complètement, et laissez l’animal récupérer pendant au moins 10 jours avant d’administrer le liquide hyperosmotique, comme démontré. Les tissus péritonéaux péritaux de souris obtenus dans la zone la plus éloignée du cathéter présentent une augmentation de l’épaisseur et du recrutement cellulaire pendant la dialyse, qui est encore aggravée chez les animaux néphrectomisés.

Les cellules épithéliales du thymus présentent également une morphologie altérée en raison de la dégradation de l’union intercellulaire induite par la dialyse péritonéale. Des échantillons de sérum provenant de souris néphrectomisées indiquent qu’une néphrectomie 5/6 induit un état urémique, augmentant les niveaux d’azote uréique au cours de l’expérience, par rapport à la ligne de base. De plus, lorsque les reins sont pleinement fonctionnels, les niveaux d’azote uréique restent similaires à l’état basal, même chez les souris exposées au liquide de dialyse péritonéale.

Ces techniques peuvent être complétées en cinq à sept minutes. Sans néphrectomie, 15 à 20 minutes. Pour la cautérisation du rein gauche, 20 à 25 minutes.

Pour l’ablation du rein et la mise en place du cathéter, si sa méthodologie est correctement exécutée. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la dialyse péritonéale pour explorer les options thérapeutiques de préservation péritonéale chez les patients rénaux soumis à un traitement par dialyse péritonéale.