La ligature partielle biliaires chez la souris : un modèle contrôlé de la cholestase Obstructive localisée

L’objectif global de cette intervention chirurgicale est d’observer les effets de la cholestase obstructive localisée. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’hépatologie sur la façon d’identifier les mécanismes de régénération du foie. Le principal avantage de cette technique est qu’il est possible d’établir des comparaisons significatives entre le lobe expérimental ligaturé et le lobe témoin non ligaturé au sein d’un même animal.

La démonstration de la procédure d’aujourd’hui sera le Dr Toshimasa Nakao, post-doctorant du laboratoire de chirurgie de transplantation. Après avoir confirmé une absence de réponse au pincement des orteils chez une souris C57 black 6 anesthésiée âgée de huit à 12 semaines, rasez la région abdominale avec une tondeuse à cheveux et placez l’animal sous un microscope chirurgical. Fixez les membres à la table et utilisez des écouvillons stériles pour désinfecter séquentiellement la zone chirurgicale avec 0,3 à 0,5 millilitre de povidone iodée et 70 % d’éthanol.

Ensuite, faites une incision médiane de la xiphoïde au pubis et utilisez un micro-écarteur pour ouvrir la cavité abdominale. Utilisez une pince à moustiques pour rétracter le xiphoïde vers la tête de la souris et utilisez de l’argile molle pour maintenir la pince et le xiphoïde dans cette position. Hydratez la cavité abdominale avec un à deux millilitres de PBS stérilisé à 37 degrés Celsius et utilisez des cotons-tiges humides pour déplacer doucement l’intestin grêle vers la tête de la souris.

Coupez les ligaments entre l’intestin grêle et le rétropéritoine pour éviter d’endommager les tissus et enveloppez l’intestin grêle et le gros intestin avec une éponge de gaze non tissée humide. Placez le tissu intestinal sur le côté caudal de la cavité abdominale et utilisez une petite éponge de gaze non tissée humide pour rétracter doucement tout le foie vers le xiphoïde afin d’exposer le hile hépatique et le ligament hépatoduodénal. Localisez le hile hépatique, le canal cholédoque sur la face ventrale de la veine porte et les canaux biliaires hépatiques gauche et droit qui s’écoulent dans la confluence biliaire principale au niveau du hile hépatique.

À l’aide d’une suture en nylon 10-0 et du côté émoussé d’une aiguille de suture, ligaturez le lobe du canal biliaire hépatique gauche. Lorsque la suture a été placée, ramenez l’intestin grêle et le gros intestin à leur position anatomique et confirmez une absence de torsion intestinale ou de saignement intra-abdominal. Retirez ensuite la pince à moustiques, fermez séparément les couches musculaires et cutanées avec des sutures continues 4-0 Vicryl et placez la souris sous une lampe chauffante avec surveillance jusqu’à la récupération complète.

La comparaison des biochimies hépatiques sériques entre des souris ligaturées partiellement des voies biliaires et des souris transgéniques ligaturées des voies biliaires complètes pour l’agrégation insoluble des protéines hépatiques révèle des lésions hépatiques ou une cholestase minimes chez les souris ligaturées des voies biliaires partielles et des lésions graves et une accumulation d’enzymes chez les animaux transgéniques ligaturés des voies biliaires complètes. Comme les souris soumises à une ligature partielle des voies biliaires ont développé une cholestase obstructive spécifique du lobe au fil du temps, le lobe ligaturé apparaît légèrement plus pâle 14 jours après la chirurgie par rapport aux lobes non ligaturés qui ont conservé leur couleur brun rougeâtre foncé normale. Le lobe ligaturé présente également une augmentation de la prolifération des voies biliaires et de la fibrose par rapport aux lobes non ligaturés en réponse à la cholestase localisée induite par la ligature.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 10 à 12 minutes si elle est correctement exécutée. Après cette procédure, d’autres méthodes telles que le traçage de la lignée peuvent être utilisées pour répondre à des questions supplémentaires sur le guidage des cellules souches vers les sites de lésions hépatiques et de régénération. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de faire des comparaisons significatives en utilisant la ligature partielle des voies biliaires pour identifier les effets locaux par rapport aux effets systémiques.