Name: Une plate-forme intégrée pour la cartographie de la Genome-wide, des États de la chromatine, à l’aide de la puce séquençage haut-débit dans les tissus de la tumeur (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 41 s
Description: Découvrez une méthode de ChIP-séquençage haut-débit optimisée pour cartographier les états chromatiniens dans les tissus tumoraux. Cette technique permet d'analyser simultanément plusieurs modifications histoniques et échantillons.

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Nous remercions Marcus Coyle, Curtis Gumbs, noyau SMF au MDACC pour le soutien de séquençage. Le travail décrit dans cet article a été soutenu par des subventions de la subvention du NIH (CA016672) à base de SMF et NCI récompenses (1K99CA160578 et R00CA160578) K. R.

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<li>Hnisz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+proto-oncogenes+by+disruption+of+chromosome+neighborhoods%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Activation of proto-oncogenes by disruption of chromosome neighborhoods.</a> Science. 351 (6280), 1454-1458 (2016).</li>
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<li>Stergachis, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+fate+and+cellular+maturity+encoded+in+human+regulatory+DNA+landscapes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Developmental fate and cellular maturity encoded in human regulatory DNA landscapes.</a> Cell. 154 (4), 888-903 (2013).</li>
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<li>Feng, J., Liu, T., Qin, B., Zhang, Y., Liu, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+ChIP-seq+enrichment+using+MACS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Identifying ChIP-seq enrichment using MACS.</a> Nat Protoc. 7 (9), 1728-1740 (2012).</li>
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<li>Liu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broad+chromosomal+domains+of+histone+modification+patterns+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Broad chromosomal domains of histone modification patterns in C. elegans.</a> Genome Res. 21 (2), 227-236 (2011).</li>
<li>Egelhofer, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+assessment+of+histone-modification+antibody+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">An assessment of histone-modification antibody quality.</a> Nat Struct Mol Biol. 18 (1), 91-93 (2011).</li>
<li>Rai, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+Roles+of+RNF2+in+Melanoma+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Dual Roles of RNF2 in Melanoma Progression.</a> Cancer Discov. , (2015).</li>
<li>Cotney, J. L., Noonan, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+immunoprecipitation+with+fixed+animal+tissues+and+preparation+for+high-throughput+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Chromatin immunoprecipitation with fixed animal tissues and preparation for high-throughput sequencing.</a> Cold Spring Harb Protoc. (2), 191-199 (2015).</li>
<li>Cejas, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+immunoprecipitation+from+fixed+clinical+tissues+reveals+tumor-specific+enhancer+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Chromatin immunoprecipitation from fixed clinical tissues reveals tumor-specific enhancer profiles.</a> Nat Med. 22 (6), 685-691 (2016).</li>
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Auteurs ne déclarent aucun conflit.

Ce protocole décrit un module complet et détaillé de ChIP-seq haut débit pour la cartographie du génome des États de la chromatine dans les lignées de cellules et tissus tumoraux humains. Dans n’importe quel protocole de ChIP-seq, une des étapes plus importantes est la spécificité de l’anticorps. Ici, cette méthode illustre l’immunoprécipitation des conditions pour les décrit six modifications d’histone, qui sont de qualité ChIP et ont été déjà validés dans notre et d’autres laboratoires42,</...

La majorité des génomes de mammifères (98-99 %) est constituée de séquences non codantes, et ces régions nocoding contiennent des éléments régulateurs connus pour participer au contrôle de l’expression des gènes et la chromatine organisation1,2. Dans une cellule normale, l’assembly spécifique de l’ADN génomique dans la structure de la chromatine compactée est critique pour l’organisation spatiale, le règlement et le calendrier précis de divers processus liés à l’ADN3,4,5. Dans une cellule cancéreuse Toutefois, des modifications de la chromatine par des mécanismes épigénétiques aberrants peuvent conduire à une mauvaise organisation de la structure de la chromatine, notamment l’accès aux éléments de régulation, systèmes de bouclage chromosomiques et gene expression patterns6, 7,8,9,10.
Malgré des progrès récents, nous avons limité la compréhension des altérations épigénétiques qui sont associés à la progression tumorale ou de la réponse thérapeutique. L’épigénome consiste en un tableau des modifications, y compris les marques histone et la méthylation de l’ADN, qui composent un état dynamique (dénommé État de la chromatine) qui empiète sur les réseaux de l’expression génique et autres processus essentiels pour le maintien identité cellulaire. Récemment, altérations de rehausseurs ont été présentées dans plusieurs tumeurs malignes en étudiant H3K27Ac profils11. Bien que ces études permettent de mieux comprendre la corrélation entre les marques épigénétiques isolés, plus de 100 modifications épigénétiques ont été identifiés12,,13 , sans une compréhension claire de leurs rôles biologiques et interdépendance. En outre, il y a un nombre encore plus grand des modèles combinatoires possibles de ces histones et les modifications de l’ADN, et c’est ces modèles combinatoires - modifications non individuels - qui dictent les États épigénétiques14. Par conséquent, il y a un besoin énorme d’identifier les altérations dans ces États de la chromatine au cours de la progression du cancer ou des réponses à la thérapie. Connaissance approfondie de l’épigénome altérations dans les cancers a été en retard en partie en raison de la technique (par exemple la génération de données à grande échelle de petite quantité de cellules cliniques de matériel/single) et analytique (par exemple des algorithmes pour définir défis de combinatoire d’États). Par conséquent, il est besoin critique de Méthodes robustes de haut-débit pour profiler le grand nombre de marques modification histone de matériel clinique et easy-to-implement approches informatiques pour prédire la combinatoire qui facilitera détermination des États épigénétiques associé à différentes étapes de la tumorigenèse et de résistance thérapeutique. Données supplémentaires, de récentes épigénome profilage études15,16,17,18,19,20,21, 22,23 dans les tissus normaux et les lignées cellulaires peuvent être intégrées aux profils de la chromatine des tumeurs pour plus amples aperçus épigénome contribution à la biologie de la tumeur.
Profilage de la chromatine est devenu un puissant outil pour identifier les profils de liaison globale des divers chromatine modifications15,24. Ces dernières années, ChIP-seq est devenu le « gold standard » pour l’étude des interactions ADN-protéines sur une échelle mondiale25,26,27. Pour toute expérience de ChIP-seq, il y a des étapes critiques nécessaires à son succès, y compris la dissociation et le traitement de tissus, de constatation dans des conditions optimales sonication, déterminer la concentration en anticorps optimal pour les précipitations, préparation de la bibliothèque, traitement des données après séquençage et analyse en aval. Chacune de ces étapes contiennent des points de contrôle clés contrôle de la qualité et ensemble, sont indispensable pour bien identifier les cibles potentielles pour la validation fonctionnelle. Grâce à l’innovation dans ces étapes, plusieurs études antérieures ont élaboré des méthodes pour effectuer une puce ou un ChIP-Seq de petite quantité de tissus28,29,30,31,32 . De plus, certaines études ont suggéré des protocoles pour les expériences de puce haut débit suivies par PCR basée quantification33,34. Enfin, certaines plates-formes d’analyse disponibles publiquement pour ChIP-Seq données sont maintenant disponibles comme Easeq35 et36de la galaxie. Cependant, une plate-forme intégrée pour effectuer des ChIP-Seq dans un mode haut-débit en combinaison avec un pipeline calcul pour effectuer la marque unique ainsi que des analyses d’état de la chromatine a fait défaut.
Ce protocole décrit un workflow de ChIP-seq complète et global pour la cartographie du génome des États de la chromatine dans les tissus de la tumeur et de lignées cellulaires, avec facile à suivre les lignes directrices qui englobe toutes les étapes nécessaires pour une expérience réussie. En adoptant une méthode de haut débit, déjà décrite par Blecher-Gonen et al. 37, ce protocole peut être effectué sur des dizaines d’échantillons en parallèle et a été appliqué avec succès sur des lignées de cellules cancéreuses et tumeurs humaines telles que le mélanome, côlon, prostate et glioblastome multiforme. Nous démontrons la méthodologie pour six modifications d’histone de base qui représentent des composantes clés du paysage réglementaire épigénétique dans les lignées de cellules de mélanome humain et des échantillons de tumeur. Ces modifications incluent H3K27ac (exhausteurs), H3K4me1 (exhausteurs actives et posés), H3K4me3 (promoteurs), H3K79me2 (transcrit les régions), H3K27me3 (polycomb répression) et H3K9me3 (hétérochromatique répression). Ces marques utilisable seul ou en combinaison pour identifier des États de chromatine fonctionnellement distinctes représentant les domaines répressifs et actives.

<table><tbody><tr><td>Anticorps H3K4me1 de qualité ChIP</td><td>Abcam</td><td>ab8895</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps H3K27ac de qualité ChIP</td><td></td><td>Abcam ab4729</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps H3K4me3 de qualité ChIP</td><td>Abcam</td><td>ab8580</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps H3K79me2 de qualité ChIP</td><td>Abcam</td><td>ab3594</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps H3K27me3 de qualité ChIP</td><td>Abcam</td><td>ab6002</td><td></td></tr><tr><td>H3K9me3 de qualité ChIP anticorps</td><td>Abcam</td><td>ab8898</td><td></td></tr><tr><td>1M Tris HCl, pH 8.0</td><td>Teknova</td><td>T1080</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8898</td><td></td></tr><tr><td>Désoxycholate de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30970</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Sigma - Life Sciences</td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>74255</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-100ML</td><td></td></tr><tr><td>LiCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>746460</td><td></td></tr><tr><td>NP-40</td><td>Calbiochem</td><td>492016-100ML</td><td></td></tr><tr><td>1 % TWEEN-20</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP337-500</td><td></td></tr><tr><td>BSA - Sigma sans IgG</td><td>- Life Sciences</td><td>A2058-5G</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibo</td><td>14025092</td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS C tube</td><td>GentleMACS</td><td>120-008-466</td><td>tube de dissociation</td></tr><tr><td>16 % Formaldéhyde</td><td>Peierce</td><td>28906</td><td></td></tr><tr><td>miniInhibiteur de protéase&nbsp ;</td><td>Roche Diagnostics</td><td>11836153001</td><td>comprimés inhibiteurs de protéase</td></tr><tr><td>Dynabeads Protein G&nbsp ;</td><td>Invitrogen</td><td>10009D</td><td></td></tr><tr><td>Bioruptor Tubes NGS 0,65 mL</td><td>Diagenode</td><td>C30010011</td><td>tubes de sonication</td></tr><tr><td>DynaMag - 96 Side Skirted</td><td>Invitrogen</td><td>120.27</td><td>Pied magnétique à 96 puits</td></tr><tr><td>TE buffer</td><td>Promega</td><td>V6231</td><td></td></tr><tr><td>RNase A</td><td>Invitrogen</td><td>12091021</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>Invitrogen</td><td>100005393</td><td></td></tr><tr><td>Perles AMPure XP Perles</td><td>paramagnétiques</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63882</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Qubit ds Kit de dosage à haute sensibilité de l’ADN</td><td>Invitrogen</td><td>Q32854</td><td>Réactifs à ADN haute sensibilité</td></tr><tr><td>NEBNext Ultra II Kit de préparation de la bibliothèque d’ADN</td><td>New England BioLabs</td><td>E7645L</td><td>Kit de préparation de la bibliothèque</td></tr><tr><td>d’ADN Eau</td> <td>sans nucléasesAmbion</td><td>AM9932</td><td></td></tr><tr><td>Haute sensibilité D1000 ScreenTape</td><td>Agilent Technologies</td><td>5067-5584</td><td>Réactifs d’ADN haute</td></tr><tr><td>sensibilité D1000 Haute sensibilité</td><td>Agilent Technologies</td><td>5067-5585</td><td>réactifs d’ADN haute sensibilité</td></tr><tr><td>Oligos Multiplex (Amorces d’index- Set 1)</td><td>New England BioLabs</td><td>E7335L</td><td>Oligos multiplexes&nbsp ;</td></tr><tr><td>Oligos multiplex (amorces d’indice- Set 2)</td><td>New England BioLabs</td><td>E7500L</td><td>Oligos multiplexes&nbsp ;</td></tr><tr><td>TapeStation 4200</td><td>Agilent Technologies</td> G2991AA <td>instrument d’électrophérogramme d’ADN à haute sensibilité</td><td></td></tr><tr><td>Bioruptor Pico sonication device&nbsp ;</td><td>Diagenode</td><td>B01060001</td><td>disruputeur à bain-marie</td></tr><tr><td>Mélangeur</td><td>Nutator</td><td>421105</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad C1000 Thermocycleur Touch</td><td>Bio-Rad</td><td>1851196</td><td>PCR Thermocycleur</td></tr> à <tr><td>bain d’eau</td><td>Fisher Scientific</td><td>2322</td><td></td></tr><tr><td>Pipette multicanaux</td><td>Denville</td><td>1003123</td><td></td></tr><tr><td>Tube Revolver</td><td>Thermo-Scientific</td><td></td><td></td>88881001</tr><tr><td>Plaque à jupe 96 puits</td><td>Eppendorf</td><td>47744-110</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse Allegra X-12R&nbsp ;</td><td>Centrifugeuse de paillasse</td> <td>Beckman Coulter</td><td>A99464</td></tr><tr><td>Centrifugeuse de table Eppendorf 5424</td><td>Centrifugeuse de</td><td>table</td><td>Eppendorf</td> 22620461</tr><tr><td>Bandes de tubes optiques (8x bande)</td><td>Agilent Technologies</td><td>401428</td><td></td></tr><tr><td>Capuchons de bandes de tubes optiques (8x bande)</td><td>Agilent Technologies</td><td>401425</td><td></td></tr><tr><td>pointes de chargement, 10 pqt</td><td>Agilent Technologies</td><td>5067-5599</td><td></td></tr><tr><td>IKA MS3 vortex</td><td>IKA</td><td>3617000</td><td>vortex</td></tr></tbody></table>

une plate-forme intégrée pour la cartographie de la genome-wide, des États de la chromatine, à l’aide de la puce séquençage haut-débit dans les tissus de la tumeur

An Integrated Platform for Genome-wide Mapping of Chromatin States Using High-throughput ChIP-sequencing in Tumor Tissues

Histone modifications constituent une composante majeure de l’épigénome et jouent un rôle réglementaire important dans la détermination de l’État transcriptionnel de loci associés. En outre, la présence de modifications spécifiques a été utilisée pour déterminer la position et l’identité non codantes des éléments fonctionnels comme améliorateurs. Ces dernières années, immunoprécipitation de la chromatine suivie de séquençage de la génération suivant (ChIP-seq) est devenu un outil puissant pour déterminer les profils de génome des modifications des histones individuelles. Cependant, il est devenu plus en plus évident que les modèles combinatoires de modifications de la chromatine, appelées États de chromatine, déterminent l’identité et la nature du locus génomique associé. Par conséquent, les workflows consistant en des méthodologies (HT) haut débit robustes pour le profilage d’un certain nombre de marques de modification des histones, mais aussi des pipelines d’analyses informatiques capables de manipulation des myriades de ChIP-Seq profilage datasets, sont nécessaires pour détermination complète des États épigénomique en grand nombre d’échantillons. Le HT-ChIP-Seq workflow présenté ici se compose de deux modules : 1) un protocole expérimental pour le profilage de plusieurs modifications d’histone de petites quantités d’échantillons de tumeurs et de lignées cellulaires dans un format 96 puits ; et 2) un pipeline d’analyse de données informatiques qui combine des outils existants pour calculer les modèles d’état de la chromatine combinatoires et les occupation marque individuelle. Ensemble, ces deux modules de facilitent le traitement facile des centaines d’échantillons de ChIP-Seq de manière rapide et efficace. Le flux de travail présentée ici est utilisée pour dériver des modèles d’état de la chromatine de 6 profils de marque histone dans les tumeurs de mélanome et de lignées cellulaires. Dans l’ensemble, nous présentons un workflow de ChIP-seq complète qui peut être appliqué à des dizaines d’échantillons de tumeurs humaines et des lignées de cellules cancéreuses pour déterminer épigénomique aberrations dans diverses tumeurs malignes.

Ce protocole permet l’immunoprécipitation de tissus tumoraux congelés et des lignées de cellules qui peuvent être effectuées sur des dizaines d’échantillons en parallèle à l’aide d’une méthode de haut-débit (Figure 1 a). Des fragments de chromatine devraient se situer entre ~ 200-1000 bits/s pour l’immunoprécipitation optimale. Nous avons noté que le temps nécessaire pour atteindre la même longueur de cisaillement est différent pour différent...

Nous décrivons ici un protocole de puce-séquençage haut débit optimisé et pipeline analyses calcul pour la détermination de modèles État pangénomique chromatine de lignées de cellules et tissus tumoraux congelés.

Une plate-forme intégrée pour la cartographie de la Genome-wide, des États de la chromatine, à l’aide de la puce séquençage haut-débit dans les tissus de la tumeur

Histone modifications constitute a major component of the epigenome and play important regulatory roles in determining the transcriptional status of ...

L’objectif global de ce protocole est d’identifier de manière impartiale les modèles d’état combinatoire de la chromatine dans les tissus tumoraux et les lignées cellulaires cancéreuses. Cette méthode pourrait aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’épigénétique du cancer, telles que la façon dont un état de modification des histones stériles pourrait contribuer à la genèse tumorale. Le principal avantage de cette technique est que plusieurs modifications d’histones, ainsi que plusieurs échantillons, peuvent être traités à la fois simultanément et efficacement.Tout d’abord, dissociez manuellement 50 milligrammes de tissu de mélanome et deux millilitres de solution saline équilibrée de Hank ou HBSS, à l’aide d’une lame de rasoir stérile. Hachez le tissu en morceaux de trois ou quatre millimètres pendant environ cinq minutes dans une boîte de culture de tissus stérile. Transférez la solution tissulaire dans un tube dissociateur et ajoutez un autre huitième millilitre de HBSS.Dissocier davantage le tissu, à l’aide d’un dissociateur, jusqu’à homogénéisation. Ensuite, réticulez le tissu, en ajoutant 200 microlitres de formaldéhyde à 16 % pour trois millilitres de HBSS

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La méthode Salut-C permet l'identification sans parti pris, l'ensemble du génome des interactions chromatine (1). Salut-C couples ligature de proximité et le séquençage massivement parallèle. Les données obtenues peuvent être utilisées pour étudier l'architecture génomique à plusieurs échelles: premiers résultats identifié des caractéristiques telles que les territoires chromosomiques, la ségrégation de la chromatine ouverte et fermée, et la structure de la chromatine à l'échelle mégabase.

Salut-C: une méthode d&#39;étude de l&#39;architecture tridimensionnelle des génomes.

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La combinaison de l'immunoprécipitation de la chromatine et le séquençage ultra-haut débit (chip-seq) permet d'identifier et de cartographier les interactions protéine-ADN dans une lignée de tissu ou de cellule donné. Décrit est de savoir comment générer un modèle de puce de haute qualité pour le séquençage ultérieur, en utilisant l'expérience avec le facteur de transcription TCF7L2 comme un exemple.

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Nous décrivons ici une plate-forme qui permet la détection de test des comètes de dommages à l'ADN avec un débit sans précédent. Les motifs de dispositif de cellules de mammifères dans une puce et permet le traitement parallèle de 96 échantillons. L'approche facilite l'analyse des lésions de l'ADN au niveau de base, les dommages à l'ADN induits exposition et réparation de l'ADN cinétique.

CometChip: Une plate-forme à haut débit de 96 puits pour la mesure de dommages de l&#39;ADN dans les cellules humaines Microarrayed

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La détermination précise des emplacements liant les protéines dans l’ensemble du génome est importante pour comprendre la régulation des gènes. Ici nous décrivons une méthode génomique de cartographie qui traite l’ADN chromatin-immunoprécipité avec la digestion d’exonuclease (ChIP-exo) suivie du séquençage à haut débit. Cette méthode détecte les interactions protéine-ADN avec une résolution cartographique proche de la paire de base et un rapport signal-bruit élevé chez les neurones mammifères.

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Cet article décrit un protocole ChIP-Seq semi-automatisé et micro-mis à l’échelle des régions d’ADN associées à une modification spécifique des histones (H3K27ac) à l’aide d’une plate-forme de manipulation de liquide ChIP, suivi d’une préparation de bibliothèque à l’aide de la marquage. La procédure comprend une évaluation du contrôle à des fins de qualité et de quantité et peut être adoptée pour d’autres modifications d’histones ou facteurs de transcription.

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ATAC-seq est une méthode de séquençage de l’ADN qui utilise la transposase mutante hyperactive, Tn5, pour cartographier les changements dans l’accessibilité de la chromatine médiés par des facteurs de transcription. ATAC-seq permet la découverte des mécanismes moléculaires sous-jacents aux altérations phénotypiques dans les cellules cancéreuses. Ce protocole décrit les procédures d’optimisation pour ATAC-seq dans les types de cellules épithéliales, y compris les cellules cancéreuses.

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Un protocole optimisé de clivage sous cibles et de libération utilisant la nucléase suivi du séquençage de nouvelle génération (CUT&amp;RUN-seq) est décrit pour les lignées cellulaires neuroendocrines de petits cancers du poumon. Il permet une cartographie génomique de diverses modifications des histones et des sites de liaison du facteur de transcription (par exemple E2F7) afin d’étudier la dérégulation épigénétique et transcriptionnelle en pathobiologie des SCLC.

Cartographie génomique des modifications des histones et des sites de liaison des facteurs de transcription dans les lignées cellulaires neuroendocrines de petits cancers du poumon grâce à CUT&amp;RUN

Découvrez une méthode de ChIP-séquençage haut-débit optimisée pour cartographier les états chromatiniens dans les tissus tumoraux. Cette technique permet d'analyser simultanément plusieurs modifications histoniques et échantillons.

Une plate-forme intégrée pour la cartographie de la Genome-wide, des États de la chromatine, à l’aide de la puce séquençage haut-débit dans les tissus de la tumeur (Vidéo) | JoVE Journal

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