Name: Murine colostomie distale, un nouveau modèle de colite détournement chez les souris C57BL/6 (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Découvrez la colostomie distale murine pour étudier la colite de dérivation chez les souris C57BL/6. Ce modèle reproduit les caractéristiques histologiques humaines sans nécessiter d'animaux génétiquement modifiés.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvés par l’autorité vétérinaire (Landesamt für Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit und Fischerei Mecklenburg-Vorpommern, LALLF M-V).
1. préopératoire soins et préparation de l’Animal
<ol><li>À son arrivée à l’animalerie, divise les animaux (C57Bl/6) en groupes de taille similaire, chaque groupe en cage ensemble et maintenir les groupes constante au cours des expériences. Remarque : Utilisez des animaux du même sexe. Les résultats présentés ont été obtenus avec des souris mâles. Remarque : Si les animaux mâles sont utilisés, les groupes de cage à partir ensemble lorsqu’ils sont âgés de 7 semaines afin qu’une hiérarchie peut être établie, ce qui minimise le risque d’un comportement agressif au cours d’expériences.</li>
	<li>Au moins une semaine avant la chirurgie, passer à une énergie élevée (> 14 MJ/kg) et riche en protéines (> 20 %) contenant tous les oligo-éléments et les vitamines d’alimentation (pour plus de détails, voir la liste des matériaux). NOTE : S’assurer toutes les souris peser au moins 25 g lorsque la chirurgie est pratiquée.</li>
	<li>Induire l’anesthésie et analgésie par injection intrapéritonéale de kétamine (i.p. 87 mg/kg) et de xylazine (i.p. de 13 mg/kg). Attendez que la souris tolère une stimulation mécanique, p. ex. orteil pitch, sans réponse motrice.</li>
	<li>Fixez la souris narcotisée avec bandes en position couchée sur une sous-couche de chaleur placée à la réception de l’opération, garantissant le positionnement au cours de l’opération stable et en évitant une très grande perte de chaleur corporelle. Remarque : La sous-couche de chaleur doit avoir une température de 36 ° C à 40 ° C ; la température de la salle d’opération doit être de 21 ° C.</li>
</ol>2. opération de colostomie distale
<ol><li>Se raser les cheveux abdominaux. Avant de commencer la chirurgie, désinfecter le champ de l’opération trois fois avec de l’alcool 70 % et un iodophore. Drapez le champ d’opération afin de garantir des conditions d’asepsie.</li>
	<li>Effectuer une laparotomie médiane de 15 mm par incision des muscles abdominaux et le péritoine le long de la linea alba, minimisant ainsi les pertes sanguines.</li>
	<li>Utiliser deux pinces atraumatiques de DeBakey, retirez avec précaution le caecum, l’iléon terminal et ascendant et côlon transverse de la cavité péritonéale. Remarque : Veillez à limiter strictement la manipulation mécanique de l’intestin pour prévenir les blessures aux structures mésentériques.</li>
	<li>Identifier le pôle caecum, le côlon ascendant et l’intestin grêle (Figures 1 a et 1 b). Remarque : Une identification correcte du côlon ascendant est fondamentale pour la mise en place correcte de la colostomie. Dans les cas où l’anatomie de la région iléo-caecale est ambiguë, la présence de plaques de Peyer identifie l’intestin grêle, et la présence de selles formées caractérise le côlon.</li>
	<li>Utilisez une règle pour déterminer la position de la colostomie future. Il doit être placé 20 mm distal de la valve iléo-caecale pour une colostomie distale.</li>
	<li>Pratiquez une seconde incision de 3 mm de la paroi abdominale dans le quadrant supérieur droit. Tirez sur le segment du côlon précédemment identifiés par cette incision pour former une boucle, en veillant à ne pas fausser la boucle.</li>
	<li>Soigneusement passer une canule de calibre 22 i.v. souple par le biais du mesocolon. Prendre soin de ne pas pour endommager les structures vasculaires mésentériques.</li>
	<li>Retourner l’intestin dans la cavité péritonéale.</li>
	<li>Fixer les deux extrémités du tube flexible pour la peau à l’aide de points simples et une suture résorbable (p. ex., polyglactine 910 ou polyfil 4-0 1/2C).</li>
	<li>Avant de fermer la laparotomie, effectuer la réanimation liquidienne, à l’aide d’une injection intrapéritonéale de solution saline à 0,9 % 0,5 mL.</li>
	<li>Fermer le péritoine et la couche musculaire avec une suture continue à l’aide d’une suture résorbable (p. ex., polyglactine 910 ou polyfil 4-0 1/2C). Fermer la peau avec une suture continue à l’aide d’une suture résorbable (polyglactine 910 ou polyfil 4-0 1/2C).</li>
	<li>Ouvrir la boucle du côlon extériorisés en effectuant une transection sous-total à l’aide de ciseaux fine. Éviter toute blessure du mésentère. Transect pas complètement le côlon.</li>
	<li>Difficulté à chaque ouverture de colostomie à l’aide de trois points de pleine épaisseur unique pour le péritoine et la peau en utilisant un monofil résorbable (p. ex., le polydioxanone ou monofil 6-0 3/8 s). La boucle afférente, qui est une fin-colostomie fonctionnelle, et la boucle efférente, qui est une fistule mucuse, sont clairement séparées à ce stade (Figure 1C). Remarque : Les temps de fonctionnement doit être moins de 20 minutes pour limiter les pertes de fluides et thermiques.</li>
	<li>Après finition chirurgie, désinfecter les instruments utilisant une solution de désinfection aldéhyde dans un bain à ultrasons conformément aux instructions du fabricant.</li>
</ol>3. sham opération (Colotomy)
<ol><li>Effectuez les étapes 1.1. par le biais de 2.4.</li>
	<li>Utilisez une règle pour déterminer la position de la future colotomy. Le colotomy doit être placé à la même distance de la valve iléo-caecale que la colostomie dans le groupe expérimental.</li>
	<li>Ouvrez les deux points au moins deux-tiers sa circonférence à l’aide des ciseaux.</li>
	<li>Fermer la colotomy avec une seule couche, pleine épaisseur interrompu suture utilisant une suture résorbable monofil (p. ex., le polydioxanone, monofil 6-0 3/8 s). Remarque : La durée de fonctionnement doit être moins de 20 minutes pour un chirurgien expérimenté, limitant les pertes de fluides et thermiques.</li>
	<li>Effectuez les étapes 2.10. , 2.11. et 2.14.</li>
</ol>4. postopératoire soins
<ol><li>Retour animaux de leurs cages. Offrent une atmosphère bien tempérée de 37 ° C (par exemple, avec une lampe à infrarouge) jusqu'à ce que les souris sont tout à fait réveillés. Puis, continuez à souris dans un environnement réglementé de température et d’humidité (21 ° C, humidité relative de 30 % ± 10 %). Permettre un accès libre à la nourriture et l’eau potable. Pour faciliter l’absorption de liquide, fournissent des aliments pour animaux imbibées d’eau supplémentaires.</li>
	<li>Commencer l’analgésie postopératoire par l’injection de corps de 0,1 mg/kg poids buprénorphine s.c. lorsque les animaux de la réponse à la stimulation mécanique. Soyez prudent afin d’éviter une dépression respiratoire.</li>
	<li>Supplément eau potable avec 1 mg/mL tramadol pour l’analgésie continue durant la première semaine post-opératoire.</li>
	<li>Pour compenser une diminution apport liquidien due à mobilité réduite, fournir une plateforme de boire solide dans la cage pendant la première semaine post-opératoire.</li>
	<li>Peser les animaux et le score de comportement animal tous les jours pendant la première semaine, tous les deux jours pendant le reste du premier mois et tous les trois jours au cours du deuxième mois en utilisant le score de gravité de la maladie décrit dans Kleinwort et al. 6.</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
<li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1954740">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li>
<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2307/1943592/abstract">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li>
<li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+%28Mus+musculus+L.%29+in+colonies+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li>
<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

Tous les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas des intérêts concurrents.

Le modèle murin de DC présentée dans le présent protocole fiable reproduit les caractéristiques histopathologiques des DC humaine (p. ex., développement de novo des follicules lymphoïdes dans la sous-muqueuse des segments de l’inflammation de l’intestin, crypte raccourcissement et réductions nombre de cellules caliciformes). En dehors de cet avantage, ce modèle est induit par un facteur de déclenchement très similaire et présente une évolution clinique modérée à gravité légère comme c’est le cas chez le...

Ces dernières années, un nombre important d’entités non infectieuses colite différents de maladies inflammatoires de l’intestin classique (DBI ; i.e., ulcéreuse ou colite de Crohn) ont été caractérisés sur le plan clinique et histopathologique chez l’homme. Les mécanismes physiopathologiques menant au développement de ces formes de colite ne sont pas complètement compris partiellement parce que les modèles animaux appropriés sont rares. Colite de détournement est une de ces entités récemment décrites. Bien que le terme a été inventé en 1980 par Glotzer1, la description initiale d’un phénotype similaire a été donnée en 1972 par Morson2. La maladie se développe dans 50 % à 91 % des patients atteints de détourner entérostomie et son intensité clinique varie de3,4. Compte tenu de l’incidence annuelle d’environ 120 000 patients de colostomie dans les États-Unis d’Amérique, cette entité maladie constitue un problème de santé important.
L’objectif général du développement de ce protocole devait fournir un modèle murin de DC qui repose sur un déclencheur de colite similaire à celui observé chez l’humain DC et qui reprend les principales caractéristiques histopathologiques de la maladie humaine. Contrairement aux autres modèles murins de la colite, induction de colite dans notre modèle ne nécessite pas d’animaux génétiquement modifiés (par exemple, les souris transgéniques IL-7, N-cadhérine dominant négatifs souris ou souris- / - de TGFβ), l’application de chimiquement irritant des substances (p. ex., dextran sulfate sodium (DSS) - colite induite ou trinitrobenzène sulfonique (TNBS) - induced colitis), ou le transfert de populations de cellules spécifiques chez les souris déficientes immunitaires (comme dans le transfert dehaute CD45RB modèle de colite) (pour un compte-rendu, voir5). Contrairement aux autres modèles, le système immunitaire intact de notre modèle DC permet d’évaluer le mécanisme immunologique impliqués dans le développement de DC. La limitation de l’inflammation des muqueuses au segment exclus de l’intestin permet d’évaluer sa répercussion sur l’immunité mucosale dans d’autres parties du tractus gastro-intestinal, sur l’homéostasie immunitaire dans les autres compartiments immunitaires du tractus intestinal (par exemple , Mesenteriale ganglions lymphatiques et des patchs de Peyer) et sur l’homéostasie immunitaire de l’organisme tout entier. Enfin, notre modèle constitue un outil approprié pour étudier les mécanismes qui contrôlent les stimuli inflammatoires locales provenant de changements dans l’environnement local normal pour le microbiome local tant que les antigènes alimentaires.

<table><tbody><tr><td>Matériel de fonctionnement</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>heat sous-couche, 6 watts</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol 70 % (avec méthyléthylcéton)</td><td>Pharmacie de l’hôpital universitaire de Greifswald</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Applicateurs en bois, petite tête en coton unilatérale, bâton en bois, longueur 150 mm</td><td>Centramed GmbH, Allemagne</td><td>8308370</td><td>pour la désinfection du champ d’opération</td></tr><tr><td>Ciseaux</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>Pince Atraumatique DeBakey</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>Porte-aiguille</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety i.v. canule 22G</td><td>Braun Melsungen AG, Allemagne</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 violet tressé ; V-5 17 m 1/2c ; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td></td><td></td>VCP994H</tr><tr><td>monofil PDS II 6-0 ; V-18 13 mm 3/8c ; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL (Seringues avec aiguille avec intérieur stérile)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin)</td><td>ANTISEPTICA, Allemagne</td><td>18824-01</td><td>désinfection des instruments chirurgicaux dans le bain à ultrasons</td></tr><tr><td>Médicaments</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>kétamine 10 %, 100 mg/mL (chlorhydrate de kétamine)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 mg/mL (chlorhydrate de xylazine)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>NaCl 0,9 %</td><td>Braun Melsungen AG, Allemagne</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0,3 mg/mL (buprénorphine)</td><td>Bayer, Allemagne</td><td>PZN : 01498870</td><td>0,1 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Tramal Gouttes, 100 mg/mL (chlorhydrate de tramadol)</td><td>Gr&uuml ; nenthal GmbH, Allemagne</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL d’eau potable</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone)&nbsp ;</td><td>Cephasaar GmbH, Allemagne</td><td>PZN : 08844252</td><td>25 mg/kg de poids corporel i.p.</td></tr><tr><td>metronidazole 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG, Allemagne</td><td>PZN : 05543515</td><td>12,5 mg/kg de poids corporel i.p.</em</td></tr><tr><td>>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, Allemagne</td><td>&nbsp ; V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>Boisson Solide Dehyprev Vit BIO, sachets</td><td>TripleATrading, Pays-Bas</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>Équipement</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Allemagne</td><td></td><td>Microscopie</td></tr><tr><td>optique VetScan HM 5&nbsp ;</td><td>Abaxis, USA</td><td>770-9000</td><td>Analyseur d’hématologie vétérinaire de 50 &micro ; l sang EDTA veineux</td></tr><tr><td>Bandelin SONOREX (Bain à ultrasons)</td><td>Bandelin electronics, Allemagne</td><td>RK 100 H</td><td>désinfection des instruments chirurgicaux</td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 software</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Version 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine colostomie distale, un nouveau modèle de colite détournement chez les souris c57bl/6

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Colite de dérivation (DC) est une condition clinique fréquente survenant chez les patients avec des segments d’intestin exclus du flux fécal par suite d’une entérostomie détourner. L’étiologie de cette maladie reste mal définie mais semble différer de celle des maladies classiques inflammatoires de l’intestin comme la maladie de Crohn et la colite ulcéreuse. Recherches visant à décrypter les mécanismes physiopathologiques menant au développement de cette maladie a été gravement entravée par l’absence d’un modèle murin approprié. Ce protocole génère un modèle murin de DC qui facilite l’étude du rôle du système immunitaire et son interaction avec le microbiome dans le développement de DC. Dans ce modèle à l’aide de C57BL/6 animaux, parties distales du côlon sont exclus du flux de matières fécal en créant une colostomie distale, en déclenchant le développement de légère à modérée de l’inflammation dans les segments de l’intestin exclus et en reproduisant les lésions de la marque distinctive de l’homme DC avec une réponse inflammatoire systémique modérée. Contrairement au modèle de rat, il existe un grand nombre de modèles murins génétiquement modifié sur le fond de C57BL/6. La combinaison de ces animaux avec notre modèle permet les rôles possibles de différentes cytokines, chimiokines ou récepteurs de molécules bioactives (p. ex., interleukine (IL) -17 ; Il-10, chemokine CXCL13, récepteurs de chimiokines CXCR5 et CCR7 et le récepteur de la sphingosine-1-phosphate 4) à évaluer dans la pathogenèse de la DC. La disponibilité de souches congéniques de souris C57BL/6 antécédents facilite grandement les expériences de transfert afin d’établir les rôles de types cellulaires distincts impliqués dans l’étiologie du DC. Enfin, le modèle offre la possibilité d’évaluer l’influence des interventions locales (p. ex., modification du microbiome local ou un traitement anti-inflammatoire local) sur l’immunité mucosale dans les segments concernés et non concernés de l’intestin et le sur homéostasie immunitaire systémique.

La chirurgie est bien tolérée tant expérimental (colostomie) et groupes d’imposture (colotomy). La mortalité péri-opératoire ne doit pas dépasser 10 % lorsque la chirurgie et périopératoires sont correctement gérées. Dans la première semaine post-opératoire, perte de poids significative est vu dans les deux groupes expérimentaux et sham. Animaux du groupe fictif atteindre leur nadir poids habituellement vers le quatrième jour postopératoire, mais il se produit un jour plus tard dans le gr...

Colostomie distale murin fournit un modèle murin pour la colite détournement humaine, une colite lymphocytaire principalement dans le segment du côlon exclus du flux de matières fécal.

Murine colostomie distale, un nouveau modèle de colite détournement chez les souris C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

L’objectif global de ce protocole est de faciliter l’étude du rôle du système immunitaire et de son interaction avec le microbiome dans le développement de la colite de diversion. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés concernant la colite de dérivation qui se produit dans les deux segments exclus du flux fécal et affecte jusqu’à 90 % des patients atteints d’entérostomie de dérivation. Le principal avantage de cette technique est qu’elle ne nécessite pas d’animaux génétiquement modifiés, l’utilisation de substances chimiquement irritantes ou le transfert de populations cellulaires spécifiques à des souris immunodéficientes pour induire la colite.À votre arrivée à l’animalerie, divisez les souris en groupes de taille similaire. Mettez chaque groupe en cage ensemble et gardez les groupes constants tout au long des expériences. Au moins une semaine avant l’opération, passez à un aliment riche en énergie et en protéines contenant tous les oligo-éléments et vitamines essentiels.Pour vous préparer à la chirurgie après avoir anesthésié l’animal conformément au protocole textuel, utilisez du ruban adhésif pour stabiliser l’animal en position couchée sur un coussin chauffant afin d’éviter la perte de chaleur corporelle. Ensuite, vérifiez que la souris tolère une stimulation mécanique, par exemple un pincement des orteils, sans réponse motrice.Avant de commencer l’opération, désinfectez le champ d’opération trois fois avec de l’alcool à 70 % et un iota 4. Drapez le champ d’opération pour garantir des conditions aseptiques. Effectuez une laparotomie moyenne de 15 mm en incisant les muscles abdominaux et le péritoine le long de la ligne blanche, minimisant ainsi la perte de sang.Ensuite, à l’aide de deux pinces atraumatiques de Debakey, tirez avec précaution le caïcum, l’iléon terminal et le côlon descendant et transversal de la cavité péritonéale. Attention à limiter les manipulations mécaniques de l’intestin afin d’éviter de blesser les structures mésentériques et de maintenir la profusion optimale de l’intestin. Ensuite, identifiez le pôle cæcal, le côlon ascendant et l’intestin grêle.Si l’anatomie de la région iléo-caecale est ambiguë, la présence de plaques de Peyer identifie l’intestin grêle et la présence de formes ature caractérise le côlon. Utilisez une règle pour déterminer la position de la future colostomie. Il doit être placé à 20 mm distal de la valve iléo-caecale pour une colostomie distale.Faites une deuxième incision de 3 mm dans la paroi abdominale dans le quadrant supérieur droit. Ensuite, tirez le segment du côlon précédemment identifié à travers cette incision pour former une boucle, en prenant soin de ne pas déformer la boucle. Passez soigneusement une canule IV flexible de calibre 22 à travers le mésocôlon, en prenant soin de ne pas endommager les structures vasculaires mésentériques.Ensuite, retournez l’intestin dans la cavité péritonéale. À l’aide de points simples et d’une suture résorbable, fixez les deux extrémités du tube flexible à la peau. Avant de fermer la laparotomie, effectuez une réanimation liquidienne à l’aide d’une injection intra-péritonéale de 0,5 mL de solution saline à 0,9 %.Fermez le péritoine et la couche musculaire avec une suture résorbable continue. Ensuite, fermez la peau de la même manière. À l’aide de ciseaux fins, ouvrez l’anse du côlon extériorisée en effectuant une transection subtotale.Évitez toute blessure au mésentère et ne transectez pas complètement le côlon. À l’aide d’une suture résorbable monofil, fixez chaque ouverture de colostomie à l’aide de trois points de suture d’une seule épaisseur sur le péritoine et la peau. L’anse afférente, qui est une colostomie terminale fonctionnelle, et l’anse efférente, qui est une fistule muqueuse, sont clairement séparées à ce stade.Pour réaliser une colotomie, après avoir identifié le pôle cæcal, le côlon ascendant et l’intestin grêle comme démontré pour la colostomie distale, utilisez une règle pour déterminer la future position de la colotomie qui doit être positionnée à la même distance de la valve iléo-caecale que la colostomie. À l’aide de ciseaux fins, ouvrez le côlon sur au moins les deux tiers de sa circonférence. À l’aide d’une suture résorbable monofil, fermez la colotomie avec une suture interrompue de pleine épaisseur avant de procéder à la réanimation liquidienne et de fermer le péritoine et la peau comme précédemment.Après la procédure, remettez les animaux dans leurs cages et placez-les sous une lampe infrarouge à 37 degrés Celsius jusqu’à ce qu’ils soient complètement réveillés avant de les remettre dans un environnement à température et humidité contrôlées. Lorsque les animaux montrent une réponse à la stimulation mécanique, commencer l’analgésie postopératoire, en injectant 0,1 mg par kg de poids corporel, buprénorphine SC. Vérifiez soigneusement s’il y a des signes de dépression respiratoire. Compléter l’eau de boisson avec 1 mg par mL de tramadol pour une analgésie continue au cours de la première semaine postopératoire.Pour compenser la diminution de l’apport hydrique due à la mobilité réduite, fournissez un coussin de boisson solide dans la cage pendant la première semaine postopératoire. Enfin, pesez les animaux et notez le comportement des animaux tous les jours pendant la première semaine, tous les deux jours pendant le reste du premier mois et tous les trois jours pendant le deuxième mois. La chirurgie est bien tolérée à la fois dans les groupes expérimentaux et simulés.La perte de poids est plus prononcée dans le groupe expérimental, atteignant 21,7 % du poids corporel initial. En revanche, les animaux factices, perdent 10,8 % de leur poids corporel initial. La mortalité totale au cours des 60 premiers jours postopératoires est d’environ 40 % dans le groupe de colostomie et d’environ 10 % dans le groupe fictif.La plupart des décès sont survenus au cours de la première semaine postopératoire, les causes de décès étant indiquées dans cette figure. La colostomie distale chez la souris entraîne le développement d’une colite principalement lymphoïde, reproduisant les caractéristiques histologiques caractéristiques de la DC humaine. La longueur de la crypte porteuse de cellules caliciformes est réduite après 30 jours dans les segments intestinaux exclus.Le nombre absolu de cellules caliciformes est également considérablement réduit dans les cryptes du segment intestinal exclu après 14 jours postopératoires. La lésion caractéristique de la DC, le développement de follicules lymphoïdes dans la muqueuse, nécessite une durée plus longue de déviation des selles. Bien qu’une augmentation du nombre de follicules lymphoïdes puisse être observée dès deux semaines, les différences deviennent significatives après deux mois.Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de réaliser une colostomie distale murine. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins de 20 minutes si elle est correctement exécutée. Ce modèle peut être combiné avec d’autres modèles génétiquement modifiés ou des expériences de transfert dans des souches de souris congéniques, afin d’aborder le rôle des médiateurs inflammatoires de populations cellulaires spécifiques et la pathogenèse de la colite de diversion.

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Research

Recherche

JoVE Journal

Medicine

Médecine

Dextran sulfate de sodium (DSS) administré dans l'eau potable est un modèle murin établie blessures inflammatoires de colite aiguë. Ce protocole décrit la méthode pour le traitement de DSS et la préparation des tissus.

Modélisation colite murin en utilisant du sulfate de sodium Dextran (DSS)

Nous démontrons un protocole dans lequel l'administration de l'agent génotoxique azoxyméthane (AOM), suivie de trois cycles de sodium pro-inflammatoire du sulfate de dextran (DSS) rapidement et génère constamment des tumeurs du côlon chez des souris présentant des similitudes morphologiques et moléculaires à celles observées dans la colite humaine associée à un cancer.

Modélisation colite cancer associé avec azoxyméthane (OMA) et de sodium Sulfate de Dextran (DSS)

Dans cette vidéo, nous décrivons une intervention chirurgicale visant à générer une boucle proximale du côlon de souris ou un segment pcLoop, suivie d’une injection intraluminale de marqueurs fluorescents dans le segment afin d’étudier la perméabilité épithéliale intestinale.

Génération d’un modèle de boucle du côlon proximal chez la souris : procédure chirurgicale permettant de générer une boucle du côlon proximal et de mesurer la perméabilité intestinale par détection de marqueurs fluorescents dans le sérum après injection intraluminale

Cette vidéo présente une technique permettant de générer un modèle murin de colite induit par des produits chimiques, une maladie inflammatoire de l’intestin. La souris est autorisée à consommer une solution de sulfate de sodium de dextran (DSS) pendant une durée adéquate. Lors de la consommation, le DSS endommage la barrière de mucus et de la couche épithéliale dans le côlon, permettant aux microbes intestinaux de pénétrer dans les tissus sous-jacents - où ils sont détectés par les cellules...

Technique pour générer un modèle murin de colite induite par le sulfate de dextran sodique

Citrobacter rodentium infection constitue un modèle précieux pour l'étude des infections bactériennes entériques ainsi que l'hôte réponses immunitaires et la colite chez la souris. Ce protocole décrit la mesure du intégrité de la barrière, la charge de pathogènes et les dommages histologiques permettant la caractérisation approfondie des contributions pathogène et de l'hôte à la colite infectieuse murin.

La<em&gt; Citrobacter rodentium</emModèle de souris&gt;: Étudier Contributions des agents pathogènes et l&#39;hôte de la colite infectieuse

Au cours des dernières années, de nouveaux endoscopes génération ont émergé comme aides à la recherche de diagnostic importants pour évaluer la colite murine et les tumeurs colorectales. Nous présentons ici un protocole détaillé pour l'évaluation endoscopique de tumeurs colorectales et inflammation chez des souris, ainsi que d'un système de pointage roman qui utilise des identificateurs décimaux pour documenter la sévérité de la colite endoscopique et tumeurs colorectales.

La coloscopie flexible chez la souris pour évaluer la sévérité de la colite et de tumeurs colorectales l&#39;aide d&#39;un système validé endoscopique de notation

Un protocole pour l'établissement d'un modèle de souris génétiquement modifiée de cancer colorectal par une infection segmentaire adeno-cre et sa surveillance par coloscopie à haute résolution est présentée.

Un modèle de souris génétiquement modifiée de cancer colorectal sporadique

Occlusions intestinales sont une obstruction partielle ou complète de l’intestin qui peut causer des douleurs abdominales, nausées, vomissements et empêchant le passage des selles. Cette procédure de création intestinales partielles obsructions chez la souris est fiable en étudiant les mécanismes qui sous-tendent la croissance des cellules pathologiques et la mort dans l’intestin.

Un modèle de souris d’une Obstruction intestinale partielle

Une fuite anastomotique ou une panne après la chirurgie est une cause majeure de mortalité et de morbidité postopératoire. Notre intervention chirurgicale pour la création d’une anastomose du côlon est une méthode fiable et reproductible pour étudier les mécanismes de guérison des anastomoses.

Création de l’anastomose du côlon chez la souris

Le protocole présenté décrit un déplacement chirurgical facile de l'appendice (patch caecal) dans une souris suivie de l'induction du cancer colorectal associé à la maladie intestinale inflammatoire. Ce modèle d'appendicectomie de murine permet d'investigation du rôle biologique de l'appendice dans la pathogénie de la maladie gastro-intestinale humaine.

Modèle d'appendicectomie de Murine de cancer colorectal associé de colite chronique par localisation précise du patch caecal

Nous décrivons un modèle murin d’iléus postopératoire généré par manipulation intestinale. La fonction du transit gastro-intestinal, les changements pathologiques et l’activation des cellules immunitaires ont été évalués 24 h après la chirurgie.

Modèle postopératoire d’iléus murin

Découvrez la colostomie distale murine pour étudier la colite de dérivation chez les souris C57BL/6. Ce modèle reproduit les caractéristiques histologiques humaines sans nécessiter d'animaux génétiquement modifiés.

Murine colostomie distale, un nouveau modèle de colite détournement chez les souris C57BL/6

Explorer plus de vidéos