Name: Métabolisme de cartographie : Surveiller l’activité de la Lactate déshydrogénase directement dans le tissu (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: Apprenez à cartographier l'activité de la lactate déshydrogénase directement dans les tissus. Cette méthode permet de visualiser la distribution spatiale des enzymes métaboliques et d'étudier les processus biologiques in situ.

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HAC était le savant Milton E. Cassel de la Rita Allen Foundation (http://www.ritaallenfoundation.org). Ce travail a été financé par des dons au HAC de National Institute de R01 de Sciences médicales générales GM081686, R01 AR070245, National Institute of (médecine générale) Sciences R01 GM0866465, l’Eli, Edythe large Centre de médecine régénérative & Stem Cell Research Collines de rose et Hal Gaba awards), Health Center/UCLA ILEC NIH Grant UL1TR000124, la leucémie Lymphoma Society, Impact l’Iris Cantor féminines octroie de la Jonsson Comprehensive Cancer Center à WEL et HAC. Recherche rapporté dans cette publication a été financée par le National Cancer Institute de la National Institutes of Health, sous attribution numéro P50CA092131. Les bailleurs de fonds n’avaient aucun rôle dans la conception de l’étude, la collecte de données et analyse, décision de publier ou préparation du manuscrit. HAC est membre de l’Eli & Edythe large Centre de médecine régénérative & Stem Cell Research, l’Institut de biologie moléculaire de UCLA et le programme interministériel de bioinformatique de UCLA.

Toutes les expériences décrites ont été approuvées par le Comité de protection de l’Animal à l’Université de Californie à Los Angeles.
1. générer des diapositives de peau de souris congelées
<ol><li>Euthanasier souris conformément à la politique de l’institution. Remarque : Suivez la politique institutionnelle pour vêtements de protection. Tous les protocoles impliquant des animaux doivent être approuvés par le Comité institutionnel de protection Animal.</li>
	<li>Enlever les poils de la souris avec une tondeuse de poils.</li>
	<li>Faire des incisions dans la peau à l’aide de ciseaux. À l’aide de pince, soulever la peau de la souris. À l’aide de ciseaux, coupez la section de la peau.</li>
	<li>Remplir le cryomold avec gel réactif composé (voir Table des matières).</li>
	<li>Place les sections de peau en cryomolds rempli à l’aide de pinces à bec. Orienter la peau des tranches de tissu vont générer une coupe transversale de la peau de l’épiderme au derme, hypoderme et musculaire (Figure 2). Remarque : si possible, montage expérimental et contrôle de la souris ensemble dans la même cryomold afin qu’ils puissent être sectionnés sur la même lame et traitées ensemble. Prendre soin de ne pas pour créer de bulles.</li>
	<li>Placer des cryomold sur la surface plane d’un bloc de glace carbonique dans un bac à glaçons et laisser geler. Continuer à observer l’orientation de la peau. Ajuster si nécessaire. Remarque : Porter des gants cryogéniques lors de la manipulation de glace sèche.</li>
	<li>Transfert cryomolds dans un congélateur-80 ° C pour le stockage. Les échantillons peuvent être maintenues dans le congélateur pendant environ 3 mois, sans perte significative de l’activité enzymatique. Ne laissez pas les coupes congelées de sécher.</li>
	<li>À l’aide d’un cryostat à-20 ° C, tranche de tissu pour créer des sections 7-10 µm d’épaisseur pour la meilleure peau morphologie21.</li>
</ol>2. préparation des diapositives pour la coloration
<ol><li>Mettre en place l’ensemble des diapositives à tester. Inclure une diapositive de contrôle sur lesquels NAD sera retenu et contrôle une autre diapositive sur laquelle le substrat, le lactate, seront retenus. Comprend une lame de contrôle positif d’un bloc de tissus congelés précédemment étudié.</li>
	<li>Brièvement Difficulté diapositives contenant des sections de la peau avec 4 % de formol pendant 5 min par pipetage 1 mL de 4 % de formol dans la diapositive, ou lors du traitement de plusieurs diapositives, en trempant les diapositives dans un récipient contenant 4 % de formol. Remarque : La fixation assurera que la peau ne pas décoller de la glisse pendant les suivantes procédures et préserver la morphologie de la peau. ATTENTION : Formol est un agent cancérigène et dangereux ; porter des gants, ne le laissez pas toucher votre peau et effectuez cette étape sous une hotte chimique.</li>
	<li>Lavez-les diapositives au moins 1 phosphate mL tampon saline, pH 7,4, par glissière soit par la pipette ou trempage.</li>
</ol>3. préparer la Solution de coloration
<ol><li>Réactifs ensemble vortex pour l’activité de la lactate déshydrogénase coloration (50 mM Tris pH 7,4, 750 µM NADP, 80 µM phénazine méthosulfate (PMS), chlorure de nitrotetrazolium bleu 600 µM et 30 mM de lactate) dans un tube de taille appropriée selon la quantité de coloration solution nécessaire. Note : 1 mL est suffisante pour recouvrir entièrement une diapositive.</li>
	<li>Préparer une deuxième solution où tous les réactifs sont présents sauf NAD. Préparer une solution de troisième dans lequel tous les réactifs sont présents sauf lactate.</li>
</ol>4. Incuber les lames dans la Solution de coloration
<ol><li>Pipette de doucement la solution colorante ou des solutions de contrôle sur les lames préparées couvrant l’article dans son intégralité (1 mL est suffisant pour une diapositive). Si plusieurs diapositives sont traités ensemble, tremper toutes les diapositives dans la solution colorante en même temps (Assurez-vous que le conteneur a suffisamment de solution pour recouvrir entièrement la section de tissu).</li>
	<li>Incuber les lames dans un environnement humidifié à 37 ° C dans l’obscurité. Si la solution de coloration est sur le dessus de la lame, placez la dans un environnement humidifié pour éviter l’évaporation.</li>
</ol>5. surveiller les diapositives
<ol><li>Surveiller la conversion de la solution colorante du clair au bleu par inspection visuelle. Lorsque les échantillons ont atteint le niveau souhaité de bleu, arrêter la réaction en enlevant la solution colorante. Remarque : Pour les peaux, 10 min est suffisant. Le temps dépendra de l’orgue et l’activité enzymatique.</li>
	<li>Rincer les lames avec une solution saline tamponnée au phosphate de pipetage (1 mL est suffisant pour chaque diapositive) ou trempage. Remarque : Tous les échantillons qui seront comparés les uns aux autres doivent être maintenues dans la solution colorante pour le même laps de temps.</li>
</ol>6. contre-coloration et monter
<ol><li>Pipette contre-colorant sur les diapositives lorsque les diapositives ont atteint un niveau approprié de bleu. Remarque : Les colorants qui transforment les noyaux rouges ou verts fournira bon contraste avec le bleu, créé par le formazan precipitant.</li>
	<li>Monter avec des solutions aqueuses ou montage moyenne22non aqueux. Il suffit d’une à trois baisses (40-50 µL) du milieu de montage selon la taille de la lamelle couvre-objet.</li>
</ol>7. l’image diapositives et quantifier
<ol><li>Image glisse sous un microscope optique. Prendre des photographies d’expérimentales et des échantillons de contrôle et tous les contrôles négatifs à 10 X, 20 X et 40 X grossissement.</li>
	<li>Déterminer l’intensité des taches bleues dans différentes régions avec analyse d’images.</li>
</ol>

<ol><li>Boonacker, E., Van Noorden, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzyme+cytochemical+techniques+for+metabolic+mapping+in+living+cells%2C+with+special+reference+to+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Enzyme cytochemical techniques for metabolic mapping in living cells, with special reference to proteolysis.</a> J Histochem Cytochem. 49, 1473-1486 (2001).</li>
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<li>Flores, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactate+dehydrogenase+activity+drives+hair+follicle+stem+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Lactate dehydrogenase activity drives hair follicle stem cell activation.</a> Nat Cell Biol. , (2017).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryosectioning+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Cryosectioning tissues.</a> CSH Protoc. 2008, pdb prot4991 (2008).</li>
<li>Espada, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-aqueous+permanent+mounting+for+immunofluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Non-aqueous permanent mounting for immunofluorescence microscopy.</a> Histochem Cell Biol. 123, 329-334 (2005).</li>
<li>Hisada, R., Yagi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1-Methoxy-5-methylphenazinium+methyl+sulfate.+A+photochemically+stable+electron+mediator+between+NADH+and+various+electron+acceptors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem%22%5BJournal%5D)">1-Methoxy-5-methylphenazinium methyl sulfate. A photochemically stable electron mediator between NADH and various electron acceptors.</a> J Biochem. 82, 1469-1473 (1977).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont aucun intérêt concurrentes de divulguer.

La méthode décrite ici peut être utilisée pour surveiller l’activité de la lactate déshydrogénase ou d’autres enzymes métaboliques qui génèrent le NADH ou le NADPH, dans différents types de cellules dans un tissu ou dans les différentes parties d’un tissu au fil du temps. Lactate déshydrogénase est une enzyme importante pour comprendre la biologie des cellules souches et de tumeurs, et la possibilité de surveiller l’activité de la lactate déshydrogénase dans des cellules individuelles est susceptible de fournir des rense...

Comprendre les emplacements au sein des tissus dans lesquels enzymes ont une activité élevée ou faible est indispensable pour la physiologie et le développement de la compréhension. Niveaux de transcription ou de la protéine sont souvent utilisés comme substituts à l’activité enzymatique. Alors que ces études peuvent être informatifs, ils ne fournissent pas d’informations qui peuvent être essentielles pour la détermination de l’activité de l’enzyme, comme les modifications post-traductionnelles, la présence de complexes protéiques, ou la localisation subcellulaire de l’enzyme. Lorsque l’activité enzymatique est mesurée directement, il est souvent contrôlé dans les lysats de protéines homogénéisé qui n’est plus contiennent des informations sur des cellules individuelles dans le mélange ou la distribution spatiale des cellules ayant une activité au sein d’un tissu haute ou basse.
Ici, nous fournissons un protocole détaillé pour cartographier la distribution spatiale de l’activité enzymatique dans un échantillon de tissu. La méthodologie est basée sur des études antérieures montrant que les sels de tétrazolium peuvent être utilisés pour localiser l’activité des déshydrogénases, réductases et oxydases en tissus congelés1. Avec ces méthodes, un formazan insolubles dans l’eau se forme lorsque les protons sont transférés à un tétrazolium sel2,3. Glucose-6-phosphate déshydrogénase génère NADPH et un proton et a été détecté avec activité de tétrazolium. Glucose-6-phosphate déshydrogénase a été contrôlé dans les hépatocytes flet européen4, dans les poumons de5 des cellules alvéolaires de type 2 et les néphrons du rein5. Sels de tétrazolium ont également été utilisés pour surveiller l’activité de la transcétolase en tissus congelés6. Une approche similaire a été récemment utilisée pour surveiller l’activité des déshydrogénases multiples dans le même tissu sur diapositives adjacentes7.
Nous décrivons ici une méthode pour utiliser les sels de tétrazolium pour surveiller la distribution spatiale de l’activité de la lactate déshydrogénase (Figure 1). Lactate déshydrogénase peut convertir pyruvate généré par la glycolyse de lactate et la réaction inverse. Activité de la lactate déshydrogénase est par conséquent un facteur déterminant de l’entrée du pyruvate dans le cycle des acides tricarboxyliques contre sa sécrétion comme le lactate. Les taux de lactate dans le sang sont souvent utilisés pour diagnostiquer un éventail de maladies, y compris le cancer8,9,10, car il peut indiquer que la maladie ou blessure a des cellules endommagées et l’enzyme a été libéré.
Il existe quatre gènes de lactate déshydrogénase : LDHA, LDHB, LDHC et LDHD11. LDHA et LDHB seraient apparus de duplication d’un début de gène LDHA12. LDH est active comme un tétramère et LDHA et LDHB peuvent former des HOMOTETRAMERES et heterotetramers entre eux. LDHA est rapporté avoir une affinité plus élevée pour le pyruvate, tandis que LDHB est rapporté pour avoir une affinité plus élevée pour le lactate et préférentiellement convertir lactate et pyruvate13. Le promoteur LDHA contient des sites de liaison pour la transcription facteurs HIF1α, cMYC et FOXM111. En outre, comme de nombreuses autres enzymes glycolytiques14,15, LDH peut être modifié par des modifications post-traductionnelles. Récepteur de facteur de croissance fibroblastique 1 peut phosphoryler LDHA à Y10, qui favorise la formation de tétramère, ou Y83, qui favorise la NADH substrat liaison16. LDHA peut également être acétylées17. Pour ces raisons, une compréhension complète de l’activité LDH exige une surveillance non seulement le taux de protéines LDH, mais aussi bien l’activité de l’enzyme.
Outre la méthode que nous présentons ici, les autres approches ont été utilisées pour surveiller l’activité de la lactate déshydrogénase. Activité de la lactate déshydrogénase peut être surveillée par spectrophotométrie en protéines homogénéisé lysat. La génération du NADH lactate est convertie en pyruvate peut être mesurée selon l’absorbance à 340 nm, tandis que la disparition du NADH peut être surveillée comme le pyruvate est converti en lactate18. Activité de la lactate déshydrogénase a également été suivie avec l’imagerie par résonance magnétique (IRM). 13 C-pyruvate peut être administré et la conversion du pyruvate de lactate peut être surveillée comme le ratio de [1 -13C] lactate / [1 -13C] pyruvate. Élevé des ratios de [1 -13C] lactate / [1 -13C] pyruvate ont été observés dans le cancer des tissus19. Alors que les approches axées sur le MRI peuvent fournir des informations sur l’activité de la lactate déshydrogénase dans des conditions normales et les tissus de la maladie, les méthodes n’ont pas la résolution nécessaire pour déterminer le niveau d’activité dans certaines cellules. La méthodologie proposée ici peut fournir des informations sur l’activité de la lactate déshydrogénase dans les zones de tissus et même dans des cellules individuelles.
À l’aide de tests d’activité sur place , nous avons constaté que l’activité de la lactate déshydrogénase est élevée dans les cellules souches de souris peau20le follicule pileux. Nous avons également utilisé la méthode pour surveiller l’activité de la lactate déshydrogénase dans les cellules souches embryonnaires cultivées et trouvé que l’activité est plus élevée dans les cellules souches que la couche de conducteur. Enfin, surveiller l’activité de la lactate déshydrogénase dans les aortes de souris fraîche et observé une coloration dans les cellules musculaires lisses. Nous décrivons ici un protocole détaillé pour surveiller l’activité de la lactate déshydrogénase dans la peau de souris congelées.

<table><tbody><tr>Instruments <td></td><td></td><td>chirurgicaux</td><td>Pour le prélèvement de la peau de souris euthanasiées</td></tr><tr><td>Tissue-tek cryomold 25 mm x 20 mm x 5 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9511236</td><td>Pour la congélation de la peau</td></tr><tr><td>de souris Tissue-Tek O.C.T. COMPOUND</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9638938</td><td>Pour le montage de cryomoules</td></tr><tr><td>Seau à glace</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-210-106</td><td></td></tr><tr><td>Glace sèche</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lame d’adhérence en polysine</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-78</td><td></td></tr><tr><td>4 % de formol</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-245-684</td><td>Dilluté dans de l’eau</td></tr><tr><td>solution saline tamponnée au phosphate, pH 7,4</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>vortex</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Base Tris</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-245-684</td><td></td></tr><tr><td>NAD</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N7004</td><td></td></tr><tr><td>Méthosulfate de phénazine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9625</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de bleu de nitrotétrazolium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N6876</td><td></td></tr><tr><td>Lithium L-lactate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2250</td><td>Substrat</td></tr><tr><td>37&deg ; C incubateur (ou incubateur de culture tissulaire)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Brésilien ! Contre-coloration</td><td>Anatech</td><td>861</td><td>Contre-coloration</td></tr><tr><td>Médium de montage</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-5000&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Plaquettes de protection pour lames</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544D</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td></td><td></td><td></td> optique</tr></tbody></table>

métabolisme de cartographie : surveiller l’activité de la lactate déshydrogénase directement dans le tissu

Mapping Metabolism: Monitoring Lactate Dehydrogenase Activity Directly in Tissue

Cartographie de l’activité enzymatique dans le temps et l’espace est essentiel pour comprendre les bases moléculaires du comportement de cellules dans les tissus normaux et la maladie. Essais in situ de l’activité métabolique peuvent fournir des informations sur la distribution spatiale de l’activité métabolique dans un mouchoir en papier. Ici, nous fournissons un protocole détaillé pour surveiller l’activité de l’enzyme lactate déshydrogénase directement dans les échantillons de tissus. Déshydrogénase de lactate est un déterminant important de la question de savoir si glucose consommé sera converti en énergie par la glycolyse aérobie ou anaérobie. Une solution contenant du lactate et NAD est fournie pour une section de tissus congelés. Cellules avec haute lactate déshydrogénases convertira le lactate fourni en pyruvate, tandis que simultanément conversion fourni nicotinamide adénine dinucléotide (NAD) à NADH et un proton, qui peut être détecté, basée sur la réduction des nitrotetrazolium bleu en formazan, qui est visualisé comme un précipité bleu. Les auteurs décrivent un protocole détaillé pour surveiller l’activité de la lactate déshydrogénase dans la peau de souris. Application de ce protocole, nous avons constaté que l’activité de la lactate déshydrogénase est riche en cellules souches quiescentes follicule pileux dans la peau. Elle applique le protocole aux cellules souches embryonnaires de souris cultivées ont révélé une coloration plus élevée dans les cellules souches embryonnaires cultivées que les fibroblastes embryonnaires de souris. Analyse d’aorte fraîchement isolés de souris a révélé une coloration dans les cellules musculaires lisses perpendiculaire à l’aorte. La méthodologie fournie peut être utilisée pour mapper spatialement l’activité des enzymes qui génèrent un proton dans le tissu congelé ou fraîche.

Nous avons déjà rapporté les résultats des tests d’activité sur place dans la peau de souris20. Comme illustré à la Figure 3, nous avons observé des niveaux élevés d’activité de la lactate déshydrogénase dans les cellules souches du follicule pileux à la base du follicule pileux lorsque les procédures décrites ci-dessus ont été suivies. Ces conclusions ont été corroborées par cellule à fluorescence activé tri de peau pour les ...

Les auteurs décrivent un protocole pour cartographier la distribution spatiale de l’activité enzymatique d’une enzyme qui génèrent nicotinatmide adénine dinucléotide phosphate (NAD(P)H) + H + directement dans les échantillons de tissus.

Métabolisme de cartographie : Surveiller l’activité de la Lactate déshydrogénase directement dans le tissu

Mapping enzymatic activity in space and time is critical for understanding the molecular basis of cell behavior in normal tissue and disease. In situ ...

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biologie, telles que l’activité des enzymes à différents endroits dans les tissus. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet au chercheur de détecter l’activité enzymatique directement dans les échantillons de tissus. Pour commencer cette procédure, retirez les poils de la souris à l’aide d’une tondeuse à poils d’animaux.Faites une incision sur la peau du dos à l’aide de ciseaux. Ensuite, soulevez la peau et coupez-la. Ensuite, remplissez le Cryomold avec un composé de réactif de congélation.À l’aide d’une pince à bec effilé, placez les sections de peau dans le cryomoule du terrain. Orientez les sections de peau de manière à ce que la section transversale de la peau de l’épiderme au derme, à l’hypoderme et au muscle soit visible. Si possible, montez les souris expérimentales et témoins ensemble dans le même cryomoule, afin qu’elles puissent être sectionnées sur la même lame et traitées ensemble.Veillez à ne pas créer de bulles. Placez le Cryomold sur une surface plane d’un bloc de glace carbonique dans un seau à glace. Pour le stockage, transférez le Cryomold dans un congélateur à moins

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Cette vidéo décrit un test colorimétrique pour la mesure du lactate dans les lysats cellulaires à l’aide de l’enzyme lactate déshydrogénase. Cette enzyme convertit le lactate en pyruvate, ainsi que la conversion du NAD en NADH qui réagit avec les colorants au tétrazolium et donne un produit coloré qui peut être mesuré spectrophotométriquement pour quantifier le lactate.

Dosage colorimétrique pour la quantification du lactate dans les échantillons d’essai

Cette vidéo montre le dosage de la lactate déshydrogénase et de la LDH pour mesurer l’effet cytotoxique d’une substance testée et son effet sur l’intégrité de la membrane dans des coupes de poumon humaines coupées avec précision. Le test fournit une mesure quantitative de la mort ou des dommages cellulaires dans l’échantillon.

Évaluation de la cytotoxicité et de l’intégrité membranaire dans des coupes pulmonaires via un dosage de la lactate déshydrogénase

La polarisation nucléaire dynamique avec dissolution ultérieure de l’échantillon a permis d’étudier en temps réel le métabolisme dans les systèmes biologiques. Le [1-13-C]pyruvate hyperpolarisé a été utilisé pour étudier in vitro l’activité de la lactate déshydrogénase dans une lignée cellulaire de carcinome de la prostate.

hyperpolarisé 13 C Metabolic Magnetic Resonance Spectroscopy and Imaging

Nous présentons ici un protocole qui permet de visualiser et de quantifier l’activité des déshydrogénases dans les cellules et tissus et sa cinétique, la fonction et la localisation sous-cellulaire au microscope.

La cartographie métabolique : Cytochimie enzymatique Quantitative et histochimie pour déterminer l’activité des déshydrogénases dans les cellules et tissus

Un protocole simple et bien validé pour mesurer l’activité de séquestration autophagique en vrac dans des cellules de mammifères est décrit ici. La méthode est basée sur la quantification de la proportion de la lactate déshydrogénase (LDH) dans les fractions de cellules sédimentables par rapport aux niveaux LDH cellulaires totales.

Le test de fixation du Lactate déshydrogénase — Une méthode Simple et fiable pour déterminer l’activité de séquestration autophagique en vrac dans des cellules de mammifères

Ici, nous partageons des méthodes pour mesurer la consommation d’oxygène mitochondriale, un concept définissant d’Energétique nutritionnelle et fuite de protons, la principale cause d’inefficacité dans la production mitochondriale de l’ATP. Ces résultats peuvent représentent 30 % de l’énergie perdue dans l’utilisation des nutriments pour aider à évaluer la fonction mitochondriale.

Mesure d’oxygéne mitochondries du foie et la cinétique de fuite Proton pour estimer la Respiration mitochondriale chez les vaches laitières Holstein

Ici, nous présentons une compilation de tests pour mesurer directement la fonction mitochondriale dans les cellules de mammifères indépendamment de leur capacité à consommer de l’oxygène moléculaire.

Tests indépendants de l’oxygène pour mesurer la fonction mitochondriale chez les mammifères

Nous présentons ici un protocole pour visualiser le transport des monocarboxylates, du glucose et de l’ATP dans les cellules gliales et les neurones à l’aide de capteurs basés sur le transfert d’énergie par résonance de Förster génétiquement codés dans une préparation cérébrale ex-vivo de larves de drosophile .

Visualisation des monocarboxylates et d’autres métabolites pertinents dans le cerveau larvaire de la drosophile ex vivo à l’aide de capteurs génétiquement codés

Ici, nous décrivons en détail les méthodes d’extraction des macrophages de la moelle osseuse, de la rate et du cœur infarctus, puis d’évaluation du flux métabolique dans les cellules vivantes.

Analyse du flux métabolique ex vivo dans les macrophages spléniques et cardiaques et les monocytes de la moelle osseuse

Ce protocole intègre un système de bioréacteur sur mesure avec une spectroscopie RMN ¹³C hyperpolarisée pour mesurer le métabolisme des pyruvates en temps réel dans les cellules vivantes, améliorant ainsi la reproductibilité et la précision cinétique pour les études métaboliques et les applications de criblage de médicaments.

Détection métabolique en temps réel dans des cellules vivantes à l’aide de la RMN 13C hyperpolarisée

Apprenez à cartographier l'activité de la lactate déshydrogénase directement dans les tissus. Cette méthode permet de visualiser la distribution spatiale des enzymes métaboliques et d'étudier les processus biologiques in situ.

Métabolisme de cartographie : Surveiller l’activité de la Lactate déshydrogénase directement dans le tissu

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