10 août 2018
Sociabilité chez les animaux inclut une réduction des réactions d’évitement pour les humains (docilité passive) et une augmentation dans les approches actives pour les humains (sociabilité active). Nous décrivons ici les protocoles détaillés pour les trois tests comportementaux (sociabilité active, docilité passive et tests de séjour disponibles) pour mesurer séparément la docilité active et passive des souris.
Cette méthode permet d’évaluer le niveau d’apprivoisement chez chaque souris, et les données seront très utiles pour d’autres études sur l’apprivoisement, telles que la cartographie génétique des gènes liés à l’apprivoisement. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet d’évaluer deux composantes majeures de l’apprivoisement : l’apprivoisement actif et passif, séparément, en utilisant cette méthode. La démonstration de la procédure sera assurée par M. Hiromichi Nagayama, un étudiant diplômé, et Mme Motoko Nihei, une technicienne de mon laboratoire.
Pour commencer, allumez l’appareil photo numérique et démarrez l’enregistrement. Ensuite, à l’aide d’une grande pince à épiler, saisissez doucement la souris par la queue. Transférez la souris de sa cage d’accueil au centre de l’appareil en plein champ.
Après avoir démarré le chronomètre, placez une main dans le coin inférieur gauche de l’appareil. Avec la paume vers le haut, remuez les doigts, lentement et régulièrement. Lentement, déplacez la main vers la souris et arrêtez-vous à 10 centimètres du côté du corps de la souris.
Maintenez cette distance si la souris tente de s’éloigner. Si la souris s’approche de la main, maintenez la main dans la même position et continuez à déplacer les doigts lentement et régulièrement. Retirez la souris avec la main libre si elle tente de grimper sur le bras.
Au bout d’une minute, terminez le test. Après avoir positionné la souris dans l’appareil, placez la main gauche dans l’appareil. Ensuite, déplacez lentement et régulièrement la main vers la souris et touchez doucement la souris du bout des doigts.
Continuez à toucher la souris du bout des doigts jusqu’à ce qu’elle s’éloigne. Lorsque la souris tente de rompre le contact, suivez-la avec la main et relancez le contact. Terminez le test au bout d’une minute.
Immédiatement après la fin du test précédent, utilisez une grande pince à épiler pour soulever la souris par la queue et placez-la doucement sur la paume gauche. Caressez doucement la souris avec le pouce gauche, jusqu’à ce qu’elle quitte la main. Ensuite, replacez la souris sur la paume à l’aide de la pince à épiler.
Après le troisième essai, arrêtez l’enregistrement vidéo et pesez la souris. Après avoir ramené la souris dans sa cage d’origine, notez la quantité d’excréments et d’urine laissée dans le champ libre de l’appareil. Ensuite, essuyez l’appareil et les gants avec une serviette en papier imbibée d’un désinfectant à 0,2 % d’iodophor, et essuyez l’appareil avec l’essuie-tout sec.
Après avoir attribué des touches pour chaque indice de comportement, lancez le logiciel tanaMove. Ensuite, faites glisser et déposez le fichier vidéo à analyser dans la fenêtre. Vérifiez que le fichier est chargé et que les informations qu’il contient.
La boîte CSV est correcte. Cliquez sur le bouton Prêt et entrez les clés attribuées à chaque indice de comportement dans la fenêtre suivante. Ensuite, cliquez sur le bouton Lecture pour démarrer le fichier vidéo et sur Arrêter pour le mettre en pause.
Appuyez sur A lorsque la souris est observée se dirigeant vers ou s’approchant de la main. Appuyez sur R lorsque la souris est observée en train de se déplacer sans se diriger vers la main pendant le test d’apprivoisement actif. Appuyez sur W et maintenez-le enfoncé lorsque le son de la minuterie se fait entendre à 60 secondes pour marquer la fin du test d’apprivoisement actif.
Lorsque la main gauche entre dans le cadre, lancez l’analyse pour le test d’apprivoisement passif. Appuyez sur A lorsque la souris est observée se dirigeant vers la main et sur R lorsque la souris est observée en train de se déplacer sans se diriger vers la main. Ensuite, maintenez enfoncé W lorsque le son de la minuterie se fait entendre à 60 secondes.
Lancez l’analyse de l’apprivoisement passif lorsque la main gauche est observée entrant dans le cadre. Pendant la lecture de la vidéo, appuyez sur A lorsque la souris s’approche de la main et sur R lorsque la souris se déplace sans se diriger vers la main. Une fois de plus, appuyez sur W lorsque la minuterie se fait entendre à 60 secondes.
Après cela, appuyez sur T chaque fois que la souris reste sur la main pendant le test. Une fois le test terminé, cliquez sur Arrêter. Ensuite, cliquez sur le bouton Précédent pour activer une nouvelle fenêtre et entrez un nouveau nom de fichier pour la saisie de données CSV.
Ensuite, cliquez sur le bouton Prêt et entrez les touches appropriées dans la nouvelle fenêtre. Ensuite, cliquez sur le bouton Lecture pour redémarrer la vidéo et lancer l’analyse du test d’apprivoisement actif. Pendant la lecture de la vidéo, appuyez sur T chaque fois que la souris contacte volontairement le gestionnaire.
Lorsque la minuterie sonne à 60 secondes, maintenez la touche W.Pendant le test d’apprivoisement passif, appuyez sur T lorsque la souris permet au manipulateur de toucher son corps. Ensuite, maintenez la touche W enfoncée lorsque la minuterie sonne après 60 secondes. Après cela, cliquez sur le bouton Arrêter, puis sur le bouton Retour avant d’entrer un nom de fichier pour la sortie de données CSV.
Ensuite, cliquez sur le bouton Prêt pour activer une nouvelle fenêtre permettant d’entrer les clés attribuées. Ensuite, cliquez sur Jouer pour commencer le test d’apprivoisement actif. Lorsque la souris est observée en train de sauter, appuyez sur J.Ensuite, appuyez sur W lorsque la minuterie sonne après 60 secondes.
Cliquez sur le bouton Arrêter pour arrêter l’observation vidéo et le minuteur retentit à nouveau à 60 secondes. Ensuite, cliquez sur le bouton Retour et entrez un nom de fichier pour la sortie de données CSV. Ensuite, enregistrez tous les fichiers de données brutes dans le dossier contenant les deux fichiers supplémentaires.
Ouvrez le fichier supplémentaire two et cliquez sur le bouton Résumer. Enfin, enregistrez les résultats dans un fichier séparé pour des analyses plus approfondies. En utilisant l’élevage sélectif, des souris avec un niveau élevé d’apprivoisement actif ont été produites.
Les souris des groupes d’élevage sélectif ont obtenu de meilleurs résultats au test d’apprivoisement actif, présentant des durées de contact avec la main humaine plus longues que les souris témoins. Les souris des deux groupes ne différaient pas significativement en termes de cap, de locomotion ou de durée de saut. Cependant, les souris sélectionnées ont obtenu un score plus élevé au test d’apprivoisement passif.
De plus, les souris sélectionnées sont restées sur une main humaine beaucoup plus longtemps que les souris témoins dans le test de maintien en main. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler d’éviter de manipuler les souris jusqu’à ce que le test d’apprivoisement soit effectué, car l’expérience de manipulation peut affecter considérablement l’apprivoisement de chaque souris.
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Cet article présente des protocoles pour évaluer l'apprivoisement chez les souris, en se concentrant à la fois sur l'apprivoisement actif et passif. Les méthodes décrites visent à fournir une évaluation complète de la manière dont les souris interagissent avec les humains.
L'évaluation de traits comportementaux tels que l'apprivoisement dans des modèles précliniques soutient la validation de cibles en permettant une réduction mécanistique des risques associés aux voies neuropsychiatriques et neurodéveloppementales. La quantification séparée des composantes actives et passives améliore la confiance prédictive dans l'identification de biomarqueurs translationnels et le choix de souches pour le criblage thérapeutique.
La méthode s'intègre aux flux de travail de biologie de la découverte en fournissant des résultats mesurables pour le test d'hypothèses et la clarification des voies en génétique comportementale.