Name: Détection des virus de bioaérosols à l’aide de résine échangeuse d’anions (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-22T14:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: Découvrez une méthode de détection virale dans les bioaérosols utilisant une résine échangeuse d'anions couplée à l'impaction liquide. Cette technique améliore la sensibilité de la détection moléculaire et facilite les études de terrain en santé publique.

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Ce travail a été financé par CDC/NIOSH hautes plaines Intermountain Center for Agricultural Health and Safety (5U54OH008085) et le programme de subventions évaluation découverte Bioscience Colorado (14BGF-16).

1. installation de la chambre aux bioaérosols (voir Figure 2)
<ol><li>
Précharger les impacteurs liquides avec 20 mL de 0,01 M phosphate buffered saline, pH 7,5 (PBS).
	<ol>
<li>Ajouter 0,5 g de résine échangeuse d’anions et suspendre dans du PBS de l’un des impacteurs liquides, avec un autre impacteur liquide agissant comme un contrôle.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Impacteurs liquides de position en parallèle dans la chambre aux bioaérosols, à l’aide de supports de pince avec anses aérosol face le nébuliseur. Remarque : Voir la Figure 2 pour plus de détails.</li>
	<li>Co-implanter un moniteur direct-lire aérosol près des impacteurs liquides pour mesurer la concentration en masse (mg/m3) d’aux bioaérosols.</li>
	<li>Co-implanter instrumentation direct-lecture supplémentaires (air intérieur qualité thermique et moniteur anémomètre) près des impacteurs liquides pour surveiller les variables environnementales, telles que la température, humidité et vent vitesse, au sein de la chambre aux bioaérosols.</li>
	<li>Exécution des ventilateurs axiaux dans les coins de la chambre aux bioaérosols pour faciliter le mélange des aérosols. Remarque : Les ventilateurs axiaux rouler à une vitesse fixe et ne sont pas réglables.</li>
</ol>2. modèle Bioaerosolization expériences (voir Figure 3)
<ol><li>Effectuer la série, 10 fois les dilutions de MS2 phage et grippe vaccin aux concentrations souhaitées dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS). Remarque : Pour démontrer la méthode ici, 103.5 FFU/mL de type A et B virus vaccin souches d’influenza et 105 UFP/mL du bactériophage MS2 sont utilisés. Pour déterminer les titres pour les inoculums, bactériophages sont propagées de Escherichia coli HS (pFamp) R et énumérés comme décrit précédemment20. Le vaccin commercial contient des quantités connues de quatre souches de virus vivants atténués grippe, deux type un virus de la grippe et deux virus de l’influenza de type B, exprimées en unités de discussion fluorescent ou FFU.</li>
	<li>Préparer des inoculums dans le récipient de verre d’un nébuliseur jet 6 collisions en créant des suspensions de désiré concentrations de particules virales dans 100 mL de PBS et installer dans la chambre aux bioaérosols personnalisé.</li>
	<li>Initier des instruments pour mesurer les variables au sein de la chambre aux bioaérosols, comme la température, le % d’humidité relative, la concentration de dioxyde de carbone et par un vent (généré à l’aide d’un ventilateur axial). Utiliser un moniteur de lecture directe aérosol pour suivre la concentration en masse au sein de la chambre aux bioaérosols et pour établir la cohérence au sein et entre les essais.</li>
	<li>Sceller la chambre aux bioaérosols et purger pendant 10 min avec de l’air filtré HEPA.</li>
	<li>Livrer l’air filtré, séché sur le nébuliseur fonctionnant à 6,9 kPa.</li>
	<li>Générer une concentration cible de bioaérosols virale (via nébuliseur) dans chaque chambre aux bioaérosols du procès. Pour cette démonstration, bioaérosols avec une concentration de 5 mg/m3 sont générés.</li>
	<li>Une fois que la concentration massique de cible de l’aérosol a été atteint, cesser de nébulisation.</li>
	<li>Utiliser une pompe de prélèvement d’air pour chaque impacteur liquide qui a été étalonné à un débit de 12,5 L/min. conduite d’étalonnage avec une norme de débit principal avant et après chaque événement d’échantillonnage pour assurer l’uniformité dans volume de prélèvement. Dilution d’alimentation d’air en utilisant une ligne filtre HEPA située près du nébuliseur et maintenez une pression constante dans la chambre.</li>
	<li>Activement, goûter l’atmosphère de chambre aux bioaérosols pour une durée de 40 min pour atteindre un volume d’échantillonnage de 500 L par exemple. Remarque : Échantillonnage pendant 40 min à 12,5 L/min avec deux pompes en parallèle permet d’échantillonnage de 1 000 L des bioaérosols. Ainsi, à la fin de l’expérience, il est prévu que la majorité de l’air présent dans l’hémicycle aux bioaérosols a été échantillonnée et rejetée dans l’environnement via un système de filtre HEPA. Ceci est démontré par la diminution de la concentration de particules. Après expérience, les surfaces sont décontaminés à l’aide de 10 % d’éthanol 70 % et de l’eau de Javel domestique. Les indicateurs sont utilisés dans cette démonstration ; Toutefois, si elle est connue des organismes pathogènes sont utilisés dans ce système, les mesures de biosécurité supplémentaires peuvent être exécutées selon les besoins.</li>
</ol>3. acides nucléiques Extraction et qRT-PCR Detection
<ol><li>
Isoler des acides nucléiques directement à partir de résine échangeuse d’anions et, aux fins de comparaison, le liquide utilisé dans les impacteurs liquides. Dans cet exemple, nous décrivons une procédure d’isolement de RNA, mais un protocole semblable pourrait être utilisé pour les virus à ADN.
	<ol>
<li>Isolement d’acide nucléique dans la résine échangeuse d’anions.<ol>
<li>Transférer la totalité du liquide contenant résine échange anionique de l’impacteur liquid dans un tube conique stérile de 50 mL.</li>
			<li>Laissez la résine s’installer et décanter lentement l’échantillon liquide de la résine échangeuse d’anions. Utiliser un embout de pipette de 1 mL pour retirer tout le liquide restant de la résine échangeuse d’anions.</li>
			<li>Partir d’un kit d’isolation RNA viral, ajouter 560 µL de tampon de lyse virale contenant du transporteur RNA directement à la résine échangeuse d’anions et incuber pendant 10 min à température ambiante avec mélange périodique.</li>
			<li>À l’aide d’une pointe de pipette de 1 mL, transférer le viral lysat (le tampon de lyse virale) à une conique stérile de 1,5 mL tube et aller de l’avant avec de l’ARN d’isolement à l’aide d’un ARN viral nécessaire (voir la Table des matières) conformément aux instructions du fabricant, sauf que l’ARN est élué dans un volume total de 60 µL de tampon d’élution.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Acide nucléique indépendamment des impacteurs liquides.<ol>
<li>Distribuer 140 µL de l’échantillon liquide dans un tube conique stérile de 1,5 mL et effectuer des ARN en utilisant le kit d’isolement viral ARN conformément aux instructions du fabricant, à l’exception d’élution RNA dans un volume total de 60 µL de tampon d’élution. NOTE : 140 µL est le volume d’échantillonnage maximale qui peut être traité avec le kit isolement viral spécifique d’ARN employé ici en une seule étape préparation.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Effectuer qRT-PCR pour la détection de MS2 et influenza de type A et type B comme décrit précédemment23,24. Dans cette démonstration, 5 µL des éluats acide nucléique sont utilisés pour qRT-PCR.</li>
</ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Ce protocole décrit une méthode pour la capture virale sensible de bioaérosols en utilisant des impacteurs liquides mis à jour le. La méthode est optimisée pour la détection et la quantification de la charge virale dans les bioaérosols. La modification précise démontrée ici implique l’ajout de résine échangeuse d’anions à liquide contenue dans un impacteur liquid commun. Cette méthode a été développée pour sa simplicité dans le traitement de l’échantillon en aval, alors que les autres techniques de traitement d’échantill...

Le but de cette méthode est de fournir une plate-forme d’échantillonnage très sensibles aux bioaérosols afin de faciliter la détection moléculaire des virus charge négative de bioaérosols. Micro-organismes, y compris des particules virales, peuvent survivre en bioaérosols pendant de longues périodes de temps1. Bioaérosols peut se déplacer sur des distances relativement longues et maintenir la viabilité et infectiosité, comme en témoigne une épidémie de légionellose qui proviennent de l’industriel situés à une distance de 6 km de personnes touchées de tours de refroidissement et abouti à 18 morts,2. Transmission indirecte du virus aux humains médiées par les bioaérosols peut se produire dans divers milieux et a été démontrée pour les éclosions de norovirus dans les écoles et restaurants3,4. De même, aux bioaérosols transmission du virus peut se produire dans des milieux agricoles telles que dans les élevages de porcs et la volaille, avec cet itinéraire de transmission étant considéré comme un facteur majeur dans la circulation du virus entre les installations de production5, 6 , 7 , 8 , 9.
L’échantillonnage efficace des bioaérosols contenant des virus permet pour l’amélioration des diagnostics rapides et de la protection pour la prévention de l’épidémie, comme indiqué dans les démonstrations dans laquelle H5 grippe A virus ont été détectés de bioaérosols dans l’animal vivant commercialise en Chine et le Aux États-Unis,10,11. Les technologies actuelles de l’échantillonnage aux bioaérosols impliquent un certain nombre de principes de capture des particules différentes et peuvent être classés dans les impacteurs, cyclones, frappe et filtres12. Il n’est pas le champ d’application du présent protocole pour couvrir exhaustivement tous les avantages et les inconvénients de ces plateformes pour prélèvement d’échantillons de virus de bioaérosols ; Cependant, on peut affirmer que la majorité de ces dispositifs d’échantillonnage n’ont pas été optimisée pour la collection de virus et les bactériophages13. En outre, infectiosité des particules virales est souvent négativement affectée, avec des impacteurs liquides censées maintenir l’infectivité virale plus efficacement que l’échantillonnage des périphériques tels que les impacteurs ou filtres solides14. Cependant, un inconvénient de l’impingement liquide est l’effet de dilution de cible, qui se produit parce que les virus sont rassemblés dans des quantités relativement importantes (en général ≥ 20 mL) de liquide dans le récipient de collecte. Un autre inconvénient important implique l’efficacité sous-optimale des impacteurs liquides pour concentrer les particules < 0,5 µM en taille15. Cependant, l’efficacité de ces dispositifs de captage peut être améliorée par immobilisation sur matrices solides, comme l’immobilisation peut améliorer la préservation des acides nucléiques viraux et l’infectivité virale16,17.
Nous avons démontré précédemment que la résine échangeuse d’anions est un outil efficace pour la capture et la concentration de virus à partir de matrices liquides, y compris les bactériophages, virus de l’hépatite A, adénovirus humain et antirotavirus18,19 F-RNA ,,20. Tel que défini par le fabricant, la résine échangeuse d’anions utilisée dans ce travail est une résine d’échangeuse d’anions base solide en polystyrène macroréticulées dans laquelle fonctionnalisées amines quaternaires groupes attraction médiate et capture des anions dans un milieu liquide21 . Par conséquent, la résine échangeuse d’anions devrait capturer les virus avec des charges de surface net négatif, y compris beaucoup de virus entériques, virus de la grippe et autres virus touchant la santé publique et animale.
Le protocole actuel implique l’ajout de résine échangeuse d’anions d’un impacteur liquid. Dans ce système, la résine est une étape de concentration secondaire des particules virales capturé dans le liquide de l’impacteur. Acides nucléiques peut alors être directement éluées par petites quantités, prévoyant un échantillon concentré des analyses moléculaires. Ainsi, le principal avantage de cette méthode est l’amélioration de la sensibilité de détection virale, principalement par le biais de réduction du volume de l’échantillon. En outre, en raison de la capture de non-spécifiques inhérente des virus de charge négative, la méthode est probablement applicable pour la détection d’un grand nombre de virus d’intérêt. Ici, la méthode est démontrée pour les souches vaccinales du virus de l’influenza de type B et de type A et les coliphages FRNA MS2 (MS2). Ces virus sont détectés ultérieurement à l’aide de dosages standard qRT-PCR comme décrit précédemment22. L’utilisateur point final ne devrait pas s’attendre à rencontrer des difficultés dans l’exécution de cette méthode, car les modifications à l’heure actuelle équipement ne constituent pas des perturbations majeures au flux classique de bioaérosols d’échantillonnage et d’analyse.

<table><tbody><tr><td>Escherichia coli bactériophage MS2 (ATCC 15597-B1)</td><td>American Type Culture Collection</td><td>ATCC 15597-B1</td><td></td></tr><tr><td>FluMist Quadrivalent</td><td>AstraZeneca</td><td>Contact fabricant</td><td>Les constituants viraux de ce vaccin sont susceptibles d’être modifiés sur une base annuelle</td></tr><tr><td>CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System</td><td>Bio-Rad</td><td>1855195</td><td></td></tr><tr><td>Amorces et sondes</td><td>Technologies d’ADN intégrées</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>0.2 & micro ; M filtre stérile</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>1 L Bouteilles en pyrex ou équivalent</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Pointes de pipette 1 mL</td><td>S.A</td>. <td>S.O</td><td></td></tr>. <tr><td>Pipette de 1 mL</td><td>S.O</td>. <td>S.O</td><td></td></tr>. <tr><td></td><td></td><td></td> Tubes <td></td></tr><tr><td>PCR</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Auxiliaire de pipette ou équivalent</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>QIAamp Mini Kit d’ARN viral</td><td>Qiagen</td><td>52904</td><td></td></tr><tr><td>Sonde QuantiTect Kit RT-PCR</td><td>Qiagen</td><td>204443</td><td></td></tr><tr><td>Amberlite IRA-900 forme chlorure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>216585-500G</td><td></td></tr><tr><td>Saline tamponnée au phosphate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr><tr><td>Eau (qualité biologie moléculaire)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502-1L</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf DNA LoBind Microcentrifugeuse Tubes</td><td>ThermoFisher</td><td>13-698-791</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 50 mL Tubes coniques à centrifuger&nbsp ;</td><td>ThermoFisher</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Tubes à centrifuger en polypropylène</td><td>ThermoFisher</td><td>05-538-62</td><td></td></tr><tr><td>SuperScript III Platinum Kit qRT-PCR en une étape avec ROX</td><td>ThermoFisher</td><td>11745100</td><td></td></tr><tr><td>SKC Biosampler 20 mL, set de 3 verres</td><td>SKC Inc.</td><td>225-9593</td><td></td></tr><tr><td>Pompes d’échantillonnage Vac-u-Go</td><td>SKC Inc.</td><td>228-9695</td><td></td></tr><tr><td>Nébuliseur Collison (6 jets)</td><td>BGI Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NA Capsule HEPA</td><td>PALL</td><td>12144</td><td></td></tr><tr><td>Q-TRAK Moniteur de qualité de l’air intérieur 8554</td><td>TSI Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ANÉMOMÈTRE thermique à vélomètre NA Alnor AVM440-A</td><td>TSI Inc.</td><td></td><td></td>NA</tr><tr><td>SidePak AM510 moniteur d’aérosols personnel</td><td>TSI Inc.</td><td></td><td></td>Chambre</tr><tr><td>à bioaérosols</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

détection des virus de bioaérosols à l’aide de résine échangeuse d’anions

Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin

Ce protocole illustre une méthode d’échantillonnage personnalisées aux bioaérosols de virus. Dans ce système, résine échangeuse d’anions est couplé avec dispositifs d’échantillonnage atmosphérique impingement liquide pour la concentration efficace des virus charge négative de bioaérosols. La résine sert donc, une étape de concentration supplémentaire du flux de travail d’échantillonnage aux bioaérosols. Extraction des acides nucléiques des particules virales est ensuite exécutée directement à partir de la résine échangeuse d’anions, avec l’échantillon qui en résulte adapté aux analyses moléculaires. De plus, ce protocole décrit une chambre aux bioaérosols sur mesure capable de générer des bioaérosols contenant des virus sous une variété de conditions environnementales et permettant une surveillance continue des variables environnementales comme la température, humidité, Vitesse du vent et la concentration massique en aérosol. Le principal avantage de l’utilisation de ce protocole est une sensibilité accrue de détection virale, telle qu’évaluée par comparaison directe avec un impacteur liquide conventionnel non modifié. D’autres avantages incluent la possibilité de concentrer des divers virus charge négative, le faible coût de résine échangeuse d’anions (~$0.14 par exemple) et la facilité d’utilisation. Les inconvénients incluent l’incapacité du présent protocole pour évaluer l’infectivité des particules virales adsorbés à la résine, et éventuellement la nécessité pour l’optimisation de la mémoire tampon de liquide d’échantillonnage utilisées au sein de l’impacteur.

Figure 1 illustre le principe qui sous-tend la capture axée sur la charge de virus de bioaérosols par l’inclusion de la résine dans les impacteurs base liquide. La figure 2 illustre la configuration de la chambre aux bioaérosols sur mesure. La figure 3 décrit les étapes nécessaires à la mise en place l’expérience aérosolisation et les mesures pour s’assurer le contrôle de la qualité. <strong class="x...

Un anion exchange résines méthode, adaptée au liquide impingement base bioaérosols prélèvement d’échantillons de virus est démontrée. Lorsqu’il est couplé avec la détection moléculaire en aval, la méthode permet une détection facile et sensible des virus de bioaérosols.

Détection des virus de bioaérosols à l’aide de résine échangeuse d’anions

This protocol demonstrates a customized bioaerosol sampling method for viruses. In this system, anion exchange resin is coupled with liquid ...

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés sur le type, le niveau et la distribution des virus dans les bioaérosols qui sont importantes pour la santé publique et vétérinaire. Les principaux avantages de cette méthode sont l’amélioration de la sensibilité de la détection moléculaire des virus à partir de bioaérosols, sa facilité d’utilisation sur le terrain et sa facilité d’utilisation. Créer des suspensions des concentrations expérimentales de particules virales d’intérêt dans des volumes de 100 millilitres de PBS dans les récipients en verre d’un nébuliseur à collision à six jets.Pour configurer la chambre de bioaérosol, préchargez deux impacteurs liquides avec 20 millilitres de PBS de 0,01 molaire, suivis de l’ajout de 0,5 gramme de résine échangeuse d’anions à un seul impacteur. Assemblez l’impacteur. Installez les suspensions à l’intérieur de la chambre.Utilisez des supports de pince pour positionner les impacteurs de liquide en parallèle à l’intérieur de la chambre de bioaérosol, les entrées de l’échantillonneur d’aérosols faisant face au nébuliseur. Placez un instrument à lecture directe près des impacteurs de liquide pour surveiller les variables environnementales et placez un moniteur d’aérosol supplémentaire à lecture directe près des impacteurs de liquide pour mesurer la concentration massique du bioaérosol. Ensuite, faites fonctionner les ventilateurs axiaux dans les coins de la chambre de bioaérosol pour faciliter le mélange de l’aérosol.Lorsque la chambre est prête, démarrez les instruments de mesure des variables à l’intérieur de la chambre de bioaérosol. Utilisez un étalon de débit primaire pour calibrer le système afin de maintenir l’uniformité entre les volumes d’échantillonnage. Scellez la chambre pour une purge de 10 minutes avec de l’air filtré HEPA.Fournir de l’air filtré et séché au nébuliseur à une pression de 6,9 kilopascals pour générer une concentration cible de bioaérosols viraux. Lorsque la concentration massique cible de l’aérosol a été atteinte, arrêtez la nébulisation. Ensuite, utilisez une ligne filtrée HEPA située près du nébuliseur pour fournir de l’air dilué, en prenant soin de maintenir une pression constante à l’intérieur de la chambre et échantillonnez activement l’atmosphère de la chambre de bioaérosol pendant 40 minutes pour atteindre un volume d’échantillonnage de 500 litres par échantillon.L’étalonnage de l’instrument est essentiel pour déterminer la concentration de contaminants atmosphériques. La chaîne d’échantillonnage doit être étalonnée avant et après chaque échantillonnage. Les pré et post-étalonnages doivent être à moins de 5 % l’un de l’autre.Éteignez les pompes à la fin de l’échantillonnage. Pour isoler les acides nucléiques directement de la résine échangeuse d’anions, transférez tout le liquide contenant de la résine échangeuse d’anions des impacteurs de liquide dans des tubes coniques individuels stériles de 50 millilitres. Après avoir laissé la résine se déposer, décantez lentement l’échantillon liquide de la résine échangeuse d’anions, à l’aide d’une pointe de pipette d’un millilitre pour éliminer tout liquide restant de la résine.Ensuite, ajoutez 560 microlitres de tampon de lyse virale contenant de l’ARN porteur d’un kit d’isolement d’ARN viral directement dans la résine échangeuse d’anions, pour une incubation de 10 minutes à température ambiante avec mélange périodique. À la fin de l’incubation, à l’aide d’une pointe de pipette d’un millilitre, transférer le lysat viral dans un tube conique stérile de 1,5 millilitre et procéder à l’isolement de l’ARN selon les instructions du fabricant. Ensuite, effectuez une PCR quantitative en temps réel pour la détection de la bactérie MS2, des phages et des virus de la grippe A et B à l’aide de cinq microlitres d’éluant d’acide nucléique par échantillon.Comme le montrent ces courbes d’amplification représentatives de la qRT-PCR, la détection des virus de la grippe de type A peut être réalisée jusqu’à 3,26 cycles plus tôt lorsque la résine échangeuse d’anions est utilisée, par rapport au test direct du liquide d’impact. Dans une qRT-PCR efficace à 100 %, un gain d’un cycle de seuil correspond à une augmentation de deux fois de la concentration cible, de sorte que les résultats représentatifs indiquent une amélioration de 9,58 fois de la sensibilité de détection. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins de trois heures si elle est exécutée correctement.Lors de cette procédure, il est important de se rappeler que lorsque l’échantillonnage de l’air est effectué sur le terrain, des paramètres tels que l’humidité relative et la température peuvent affecter l’efficacité de la collecte et que les tampons de collecte peuvent devoir être optimisés pour différents virus. Après cette procédure, d’autres méthodes basées sur la culture peuvent être utilisées pour répondre à des questions supplémentaires sur l’infectiosité virale. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs et autres professionnels dans les domaines de l’agriculture et de la santé publique, pour explorer des méthodes alternatives de capture et de concentration virales à partir de bioaérosols pour l’évaluation des risques dans la surveillance des maladies virales.Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de capturer et de concentrer les virus à partir de bioaérosols à l’aide d’impacteurs liquides modifiés, d’extraire les acides nucléiques directement de la résine échangeuse d’anions et de détecter les virus à l’aide de la qRT-PCR. N’oubliez pas que travailler avec des agents pathogènes viraux peut être extrêmement dangereux et que des précautions telles que l’utilisation d’un équipement de protection individuelle et d’un niveau de biosécurité de deux ou plus doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.

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JoVE Journal

Environment

Environnement

Cette méthode décrit l'utilisation de système d'imagerie infrarouge à base de colorants pour la détection du virus H1N1 dans broncho-alvéolaire (LBA) des souris infectées avec une sensibilité élevée. Cette méthodologie peut être effectuée dans un 96 - ou 384 puits de plaque, il faut &lt;volume de 10 ul de matériel d'essai et a le potentiel pour le dépistage simultané de plusieurs agents pathogènes.

Méthode de détection à haut débit pour les virus de la grippe

Source: Schaeffer, J. W., Chandler, et al. Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin. J. Vis. Exp. (2018).This video demonstrates the detection of viruses from bioaerosols using an anion exchange resin. A liquid impinger containing the resin is used to capture viruses from the air. The resin is collected and treated with a virus lysis buffer containing carrier RNA. The lysate is transferred to a microcentrifuge tube for viral RNA isolation, followed by qRT-PCR to amplify...

Anion Exchange Resin–Based Detection of Viruses from Bioaerosols

Source: Klaus, J. P. et al. Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the extraction of viral RNA from surface-bound virions on epithelial cells using silica spin columns. The method includes chemical lysis, RNA stabilization, and membrane-based purification for downstream quantification of virus-cell attachment.

Extraction of Viral RNA from Surface-Bound Virions Using a Silica Spin Column

Nous décrivons un essai rapide, à base moléculaire de la grippe A et B. L'essai détecte la grippe chaque cible dans les 15 minutes en utilisant une amplification isotherme avec des amorces spécifiques de la grippe suivie par la détection de cibles avec des sondes de balises moléculaires. Le dosage et la grippe A B est convivial et nécessaire minimes mains sur le temps d'effectuer.

Rapid Détection moléculaire et différenciation des virus grippaux A et B

test à haut débit d'agents pathogènes à base d'ADN et d'ARN par PCR à l'échelle nanométrique est décrit en utilisant un chien syndromique et le panneau PCR respiratoire équine.

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Détection rapide d’agents pathogènes bactériens à l’origine d’infections des voies respiratoires inférieures grâce à une amplification isotherme médiée par boucle à base de puce microfluidique

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Ici, nous présentons une étude pour évaluer l’efficacité antivirale des revêtements de surface à base de cuivre et d’argent sur les filtres à air. En utilisant une chambre à bioaérosol et un bactériophage Phi6, cette méthode quantifie l’inactivation virale et l’efficacité de filtration mécanique pour des technologies d’air intérieur auto-désinfectantes.

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Découvrez une méthode de détection virale dans les bioaérosols utilisant une résine échangeuse d'anions couplée à l'impaction liquide. Cette technique améliore la sensibilité de la détection moléculaire et facilite les études de terrain en santé publique.

Détection des virus de bioaérosols à l’aide de résine échangeuse d’anions

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