Name: Préparer un 68Ga-étiqueté Arginine Glycine Aspartate (RGD)-peptide de l’angiogenèse (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Apprenez à préparer des peptides RGD marqués au Gallium-68 pour l'imagerie oncologique et l'évaluation biologique. Cette méthode systématique simplifie le développement de radiotraceurs peptidiques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ce travail a été soutenu par une recherche nucléaire et le programme de développement de la subvention de la fondation de recherche National de Corée (NRF) financée par le gouvernement coréen (n° 2017M2A2A6A02019904).

Toutes les expériences animales ont été menées en conformité avec les directives pour le soin et l’utilisation de la recherche animaux sous protocoles approuvés par l’Institut de radiologie de Corée et Sciences médicales Animal Studies Committee. Tous les réactifs et solvants ont été achetés et utilisés sans davantage de purification. NOTA-RGD-peptides ont été préparés selon les méthodes de littérature15.
Attention : 68Ga émet positrons et rayons gamma. Toutes les expériences, y compris le contact direct ou indirect avec des substances radioactives, doivent être réalisés par formé et autorisé uniquement au personnel. Lors de la manipulation de matières radioactives, équipement de protection adéquat, blindage, badge dosimètre radiation et anneaux et un radiamètre devraient être utilisés.
1. radiolabeling RGD-peptides avec 68GaCl3
Remarque : 68Ga (t1/2 = 68 min, β+ = 89 % et ce = 11 %) provenaient de la 68Ga / générateur de Ge de68.
<ol><li>Éluer les 68GaCl3 du générateur avec 4 mL de 0,05 M HCl.</li>
	<li>Purge à l’azote à 80 ° C pendant 30 min à sec 68GaCl3 (333 kBq, 1 mL) dans un flacon de 5 mL réaction.</li>
	<li>Ajouter une solution de peptide RGD (100 µg) en acétate de sodium 1 M (100 µL, pH 5-6) dans le flacon de réaction contenant 68GaCl3 à l’étape 1.2.</li>
	<li>Faire chauffer le mélange réactionnel à 80 ° C pendant 5 min. Puis, refroidir à température ambiante.</li>
	<li>Purifier le produit brut avec la chromatographie liquide haute performance (HPLC). Utilisez le système suivant : une colonne de C-18, un débit de 0,5 mL/min, une pente gradient d’acétonitrile de 1.17%/min (5 % - 40 % en 30 min) et de composants d’élution : A = 0,1 % d’acide trifluoroacétique (TFA) dans l’acétonitrile, B = 0,1 % TFA dans l’eau. Remarque : L’HPLC est équipé d’un détecteur à barrettes photodiode et un détecteur de radioactivité. Les 68Ga-RGD-peptide a été recueilli à un temps de rétention de 12,5 min (Figure 2).</li>
	<li>Purifier la résultante 68Ga-RGD-peptide en utilisant un système d’extraction en phase solide.<ol>
<li>Passer la solution à travers une cartouche de phase inverse C18 et laver avec 2 mL de solution saline.</li>
		<li>Éluer 68Ga-RGD-peptide 0,7 ml d’éthanol à 95 %. Enlever le solvant à 80 ° C sous azote gazeux pendant 20 min et reconstituer avec la solution saline tamponnée au phosphate (PBS) avant utilisation.</li>
		<li>Filtrer le produit radiomarqué à travers un filtre stérile de 0,22 µm et formuler dans 1 mL de solution saline stérile.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Vérifier le rendement radiochimique par radio-couche mince, chromatographie (TLC).<ol>
<li>Spot 1 µL sur une plaque de chromatographie sur couche mince instantanée (technologique, 10 cm de longueur). Mettre la plaque dans une chambre contenant l’éluant (acide citrique en solution aqueuse 0,1 M, pH 5.0) jusqu'à 9 cm loin de l’endroit. Remarque : Le facteur de rétention de 68Ga-RGD-peptide est 0 et le facteur de rétention pour n’ayant pas réagi 68Ga3 + est 1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Calculer l’activité spécifique finale du rapport de la radioactivité correspondant à la non-radioactivité comme MBq/nmol. Remarque : Après l’injection de 100 µL de la formulé 68Ga-RGD-peptide à l’HPLC, le montant de la composante non radioactif a été calculé à partir de la courbe d’étalonnage standard non radioactif Ga-RGD-peptide.</li>
</ol>2. incorporation de cellulaire in Vitro
Remarque : Les cellules de glioblastome humain de gliomes malins (U87MG) Uppsala 87 ont été cultivés dans les médias de l’aigle modifié de Dulbecco (DMEM), additionné de 10 % fœtale bovine sérique et 1 % la pénicilline-streptomycine. Cellules sont cultivées dans des plats de 150 mm à 37 ° C en atmosphère humidifiée de 5 % de CO2. Les cellules ont été récoltées ou divisés par trypsinisation : trypsine 0,25 % (p/v) et acide éthylènediaminetétraacétique 0,02 % (p/v) (EDTA) dans du PBS à 37 ° C pendant 3 à 5 min.
<ol><li>Cellules U87MG semences en plaques 6 puits à une densité de 1 x 106 cellules/puitsent.</li>
	<li>Incuber les cellules avec 68Ga-RGD-peptide (111 kBq) à 37 ° C pendant 30, 60, 90 et 120 min. préparation des échantillons en trois exemplaires.</li>
	<li>Laver les cellules 2 x 2 ml de PBS et récolte par trypsinisation. Utilisez la trypsine 0,25 % (p/v) et l’acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) de 0,02 % (p/v) dans du PBS à 37 ° C pendant 3 à 5 min.</li>
	<li>Recueillir la suspension cellulaire (500 µL) et la mesure dans un compteur-γ.</li>
	<li>Calculer la pourcentage absorption du composé par les cellules en % (chiffres dans la numération de cellules/total).</li>
</ol>3. in Vitro sérum stabilité
<ol><li>Ajouter 500 µL de sérum de souris fraîchement préparés, 500 µL de sérum humain et 500 µL de PBS. Incuber le mélange à 37 ° C pendant 2 h.</li>
	<li>Évaluer par technologique à des intervalles de temps spécifiés (30, 60, 90 et 120 min). Repérer la quantité de 1-2 µL du mélange sur la plaque technologique (phase mobile : acide citrique 0,1 M). Développer la plaque comme au point 1.7. NOTE : 68Ga3 + devrait se déplacer avec le front de solvant, tandis que le précurseur marqué restera à l’origine.</li>
</ol>4. la détermination du caractère lipophile
<ol><li>Ajouter 68Ga-RGD-peptide (3,7 MBq, 3,7 µL) au système octanol-PBS (1:1, v/v, total 1 mL).</li>
	<li>Mélanger les flacons vigoureusement pendant 5 min à température ambiante et centrifuger à 10 000 x g pendant 5 min à température ambiante.</li>
	<li>Prélever 100 µL de chaque couche et mesurer la radioactivité avec un compteur-γ. La valeur signalée log P est basée sur la moyenne des trois échantillons.</li>
</ol>5. tumeur modèle
Remarque : Souris nude de souris BALB/c (6-8 semaines ancienne, femelle, n = 23) ont été utilisées pour cette étude. Les souris ont été utilisés par la suite pour les études de PET (n = 3) et de biodistribution (n = 20) lorsque le volume de la tumeur a atteint 200 à 300 mm3 (1-2 semaines après l’implantation).
<ol><li>Charger des cellules tumorales dans 28 G, 1/2 pouce seringues à insuline.</li>
	<li>Injecter des cellules U87MG (5 x 106) dans 100 µL de PBS dans la région du bras gauche.</li>
	<li>Anesthésier la souris à l’isoflurane 2 % dans les gaz d’oxygène au cours de l’injection de cellules.<ol>
<li>Veiller à ce que la souris a été anesthésiée par la perte de la pédale retrait réflexe suivant pincer avec une pince entre les orteils du pied postérieur droit. Ne laissez pas un animal sans surveillance jusqu'à ce qu’il a repris connaissance suffisante pour maintenir le décubitus sternal.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. in Vivo la Quantification des αvβ3 PET à l’aide de l’intégrine
<ol><li>Anesthésier les souris à l’isoflurane 2 % d’oxygène.<ol>
<li>Veiller à ce que la souris a été anesthésiée par la perte de la pédale retrait réflexe suivant pincer avec une pince entre les orteils du pied postérieur droit. Ne laissez pas un animal sans surveillance jusqu'à ce qu’il a repris connaissance suffisante pour maintenir le décubitus sternal.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Placez la tête dans le centre du portique de PET.</li>
	<li>Administrer par voie intraveineuse le 68solution Ga-RGD-peptide (7,4 MBq, 200 µL) à la xénogreffe souris modèle via la veine caudale pendant 1 min.</li>
	<li>Dans le même temps, effectuer un PET scan en mode liste (analyse dynamique) pour 150 min. NOTE : Les données brutes de PET ont été reconstruites en un laps de temps défini par l’utilisateur (c'est-à-dire, toutes les 30 minutes). Après le PET scan, un balayage de micro-la tomodensitométrie (CT) (50 kVp de rayons x, 0,16 mA) a été réalisée pour la correction d’atténuation.</li>
</ol>7. la Biodistribution Ex Vivo
<ol><li>Injecter des 68Ga-RGD-peptide (0.37 MBq, 200 µL) dans la veine caudale de la modèle de xénogreffe de souris. Anesthésier la souris à l’isoflurane 2 % dans les gaz d’oxygène pendant les injections. Remarque : Souris Nudes BALB/c, tel que décrit à l’article 5, ont été divisés en quatre groupes et sacrifiés à des moments différents (n = 5 par groupe).</li>
	<li>Réveiller les souris immédiatement après l’administration de 68Ga-RGD-peptide et les sacrifier à 30, 60, 90 et 120 min après l’injection avec l’euthanasie de dioxyde de carbone. Remarque : Les tissus d’intérêt ont été tirées. Cibles choisies étaient de sang, muscles, coeur, poumon, foie, rate, estomac, intestin, reins, OS et tumeur.</li>
	<li>Peser le tissu et mesurer la radioactivité avec un compteur-γ. NOTE : Les résultats étaient exprimés comme la pourcentage de dose injectée par gramme de tissu (ID/g %).</li>
</ol>

<ol><li>Friedlander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definition+of+Two+Angiogenic+Pathways+by+Distinct+alpha+v+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Definition of Two Angiogenic Pathways by Distinct alpha v integrins.</a> Science. 270 (5241), 1500-1502 (1995).</li>
<li>Janssen, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Targeting+with+Radiolabeled+alpha+v+beta+3+Integrin+Binding+Peptides+in+a+Nude+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Tumor Targeting with Radiolabeled alpha v beta 3 Integrin Binding Peptides in a Nude Mouse Model.</a> Cancer Research. 62, 6146-6151 (2002).</li>
<li>Kok, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+functional+evaluation+of+RGD-modified+proteins+as+%CE%B1v%CE%B23+integrin+directed+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation and functional evaluation of RGD-modified proteins as αvβ3 integrin directed therapeutics.</a> Bioconjugate Chemistry. 13 (1), 128-135 (2002).</li>
<li>Garanger, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+multifunctional+molecular+conjugate+vector+for+targeting%2C+imaging%2C+and+therapy+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">New multifunctional molecular conjugate vector for targeting, imaging, and therapy of tumors.</a> Molecular Therapy. 12 (6), 1168-1175 (2005).</li>
<li>Dijkgraaf, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+integrin+expression+in+tumours+with+68Ga-labelled+mono-%2C+di-+and+tetrameric+RGD+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">PET imaging of αvβ3 integrin expression in tumours with 68Ga-labelled mono-, di- and tetrameric RGD peptides.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 38 (1), 128-137 (2011).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+cyclic+RGD+dimers+with+Gly3and+PEG4linkers%3A+Promising+agents+for+tumor+integrin+%CE%B1v%CE%B23+PET+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled cyclic RGD dimers with Gly3and PEG4linkers: Promising agents for tumor integrin αvβ3 PET imaging.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 36 (6), 947-957 (2009).</li>
<li>Li, Z. B., Chen, K., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+multimeric+RGD+peptides+for+microPET+imaging+of+integrin+%CE%B1v%CE%B23expression%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled multimeric RGD peptides for microPET imaging of integrin αvβ3expression.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 35 (6), 1100-1108 (2008).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isomerism+and+solution+dynamics+of+90Y-labeled+DTPA-biomolecule+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Isomerism and solution dynamics of 90Y-labeled DTPA-biomolecule conjugates.</a> Bioconjugate Chemistry. 12 (1), 84-91 (2001).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycosylated+RGD-containing+peptides%3A+tracer+for+tumor+targeting+and+angiogenesis+imaging+with+improved+biokinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Glycosylated RGD-containing peptides: tracer for tumor targeting and angiogenesis imaging with improved biokinetics.</a> Journal of Nuclear Medicine. 42 (2), 326-336 (2001).</li>
<li>Sivolapenko, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+metastatic+melanoma+utilising+a+technetium-99m+labelled+RGD-containing+synthetic+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Euroean+Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Imaging of metastatic melanoma utilising a technetium-99m labelled RGD-containing synthetic peptide.</a> Euroean Journal of Nuclear Medicine. 25 (10), 1383-1389 (1998).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+Imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+Integrin+Expression+Using+18+F-labeled+RGD-containing+Glycopeptide+and+Positron+Emission+Tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Noninvasive Imaging of αvβ3 Integrin Expression Using 18 F-labeled RGD-containing Glycopeptide and Positron Emission Tomography.</a> Cancer Research. 61, 1781-1785 (2001).</li>
<li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilities+of+trivalent+metal+ion+complexes+of+the+tetraacetate+derivatives+of+12-%2C+13-+and+14-membered+tetraazamacrocycles%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Stabilities of trivalent metal ion complexes of the tetraacetate derivatives of 12-, 13- and 14-membered tetraazamacrocycles.</a> Inorganica Chimica Acta. 190 (1), 37-46 (1991).</li>
<li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilities+of+the+Fe%28III%29%2C+Ga%28III%29+and+In%28III%29+chelates+of+N%2CN%E2%80%B2%2CN%E2%80%B3-triazacyclononanetriacetic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Stabilities of the Fe(III), Ga(III) and In(III) chelates of N,N′,N″-triazacyclononanetriacetic acid.</a> Inorganica Chimica Acta. 181 (2), 273-280 (1991).</li>
<li>Shetty, D., Lee, Y. S., Jeong, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+radiopharmaceuticals+for+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled radiopharmaceuticals for positron emission tomography.</a> Nuclear Medicine Molecular Imaging. 44 (4), 233-240 (2010).</li>
<li>Shin, U. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+Preliminary+Evaluation+of+68Ga-NOTA-Biphenyl-c%28RGDyK%29+for+the+Quantification+of+Integrin+%CE%B1v%CE%B23%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+Korean+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Synthesis and Preliminary Evaluation of 68Ga-NOTA-Biphenyl-c(RGDyK) for the Quantification of Integrin αvβ3.</a> Bulletin of the Korean Chemical Society. 38 (12), 1415-1418 (2017).</li>
<li>Cai, W., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodality+Molecular+Imaging+of+Tumor+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multimodality Molecular Imaging of Tumor Angiogenesis.</a> Journal of Nuclear Medicine. 49, suppl2 113-128 (2008).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Dans la présente étude, nous avons introduit un protocole visant à préparer un radiopeptide visant α, βv3 intégrine et son évaluation biologique. Développement des médicaments traditionnels implique une procédure compliquée. Elle nécessite une grande quantité de documents de référence et une durée d’évaluation relativement longue. Bien que la méthodologie proposée ne peut pas remplacer le processus d’évaluation délicate, ce système peut servir à des fins de dépistage. Le projet de système permettrai...

L’angiogenèse est un processus biologique qui se caractérise par le développement de nouveaux vaisseaux sanguins. Parmi les nombreux facteurs angiogénétique, α, βv3 intégrine est associé à caractère invasif, parce que l’Integra est fortement exprimée dans les vaisseaux de tumeur angiogénique mais est absent dans les tissus normaux1.
Radioactifs-liaison aux récepteurs des peptides avec le domaine d’aspartate (RGD) glycine arginine, qui présente une forte affinité vers3 d’intégrines αvβ, sont considérées comme prometteuses angiogenèse imaging agents2,3 , 4 , 5 , 6 , 7. plusieurs radiopharmaceutiques ont été créés pour animal de compagnie et de ses propriétés biologiques ont été validées dans divers modèles animaux8,9,10,11. En ce qui concerne un radionucléide, 68Ga a plusieurs avantages par rapport aux autres radioisotopes. Tout d’abord, il a une grande accessibilité pour les utilisateurs et est économiquement avantageuse car un cyclotron n’est pas nécessaire. Deuxièmement, 68Ga axée sur les produits radiopharmaceutiques produisent une résolution spatiale élevée par rapport à la tomographie d’émission monophotonique (SPECT), ce qui permet une quantification plus précise. Enfin, la demi-vie de 67,71 minutes de 68Ga peut suffire pour la préparation de petits peptides ou protéines.
Pour produire un complexe stable avec 68Ga, chélateurs beaucoup ont été développés. Les chélateurs représentatifs sont l’acide 1,4,8,11-tetraazacyclotetradecanetetraacetic (TETA), 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tétraacétique (DOTA), acide 1,4,7-1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-triacétique (NOTA), diéthylènetriaminepentaacétique acide (DTPA) et N, N'-di(2-hydroxybenzyl) éthylènediamine-N, N'-acide diacétique (HBED). NOTA a été signalé pour former un complexe très stable avec 68Ga (journal stabilité constante 30,98)12,13,14.
Le but de cette étude est de fournir un protocole concis pour l’élaboration d’une nouvelle radiopeptide (Figure 1). À titre d’exemple, nous préparons 68Ga-étiqueté RGD-peptides et des méthodes actuelles d’évaluation biologique de ces analogues dans un modèle de xénogreffe.

<table><tbody><tr><td>68Ga/68Ge générateur</td><td>ITG</td> <td>Company-10</td> <td>mCi&nbsp ;</td></tr><tr><td>Solution de chlorure d’hydrogène</td><td>Sigma-aldrich</td><td>84429</td><td></td></tr><tr><td>Acétate</td><td>de sodium Sigma-aldrich</td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>C18 cartouche en phase inverse</td><td>Waters</td><td>WAT020515</td><td></td></tr><tr><td>0.22-&mu ; m filtre stérile</td><td>Milllipore</td><td>SLGV033RS</td><td></td></tr><tr><td>Scanner Radio-TLC</td><td>Bioscan</td><td>AR2000</td><td></td></tr><tr><td>Papier ITLC</td><td>Agilent</td><td>SGI001</td><td></td></tr><tr><td>Acide citrique</td><td>Sigma-aldrich</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>Système HPLC</td><td>Waters-Waters</td><td></td> <td>1525 contenant pompe binaire, réseau de photodiodes (Waters 2998), détecteur de radioactivité (Raytest, Gabi)</td></tr><tr><td>Acétonitrile</td><td>J.T. Baker</td><td>14-650-359</td><td></td></tr><tr><td>Acide trifluoroacétique</td><td>Sigma-aldrich</td><td>302031</td><td></td></tr><tr><td>Eagle media modifié de Dulbecco&nbsp ;</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>sérum fœtal bovin</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>flacons T175</td><td>Corning</td><td>CLS431080</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA (0,25 %)</td><td>Thermo fisher scientifique</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>pénicilline-streptomycine</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>15240112</td><td></td></tr><tr><td>&gamma ;-counter</td><td>Perkin Elmer-1480</td><td></td> <td>Wizard 3</td></tr><tr><td>Seringue Insunlin</td><td>Becton Dickinson</td><td>326105</td><td></td></tr><tr><td>Pompe à résonance</td><td>Harvard Appareil</td><td>70-4500</td><td></td></tr><tr><td>micro-PET/CT</td><td>Siemens Inveon</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

préparer un 68ga-étiqueté arginine glycine aspartate (rgd)-peptide de l’angiogenèse

Preparing a 68Ga-labeled Arginine Glycine Aspartate (RGD)-peptide for Angiogenesis

L’intégrine αvβ3 est une molécule d’adhésion hétérodimérique impliqués dans l’angiogenèse et la migration des cellules tumorales. L’intégrine est surexprimé dans les cellules endothéliales tumorales angiogénique, où il porte généralement une faible concentration. Cette expression précise de αvβ3 rend un biomarqueur valide pour anti-angiogéniques et drogues d’imagerie. Comme une modalité d’imagerie fonctionnelle, par émission de positrons (TEP) fournit des informations sur biochimiques et physiologiques changent in vivo, grâce à sa haute sensibilité unique à l’échelle de nanomolaires. Par conséquent, basé sur radiometal preps ont reçu beaucoup d’attention pour la quantification non invasif de l’angiogenèse tumorale. Cet article fournit un protocole systémique pour préparer un nouveau peptide radiometal marqué pour l’évaluation de l’angiogenèse. Ce protocole contient des informations sur la fiabilité de radiochimie, la lipophilie, apport des cellules, sérum stabilité et propriétés pharmacocinétiques. Les 68Ga-RGD-peptide est l’un des ligands PET représentatifs vers α, βv3 intégrine. Ici, nous introduisons un protocole visant à préparer un 68Ga-RGD-peptide et l’évaluation de son efficacité biologique.

La chélation de 68GaCl3 avec le NOTA-RGD-peptide était simple, et le rendement radiolabeling était de 99 %. Impuretés de réaction ont été correctement supprimées, comme illustré à la Figure 2. La pureté radiochimique de 68Ga-RGD-peptide était supérieure à 99 %, et l’activité spécifique à la fin de la synthèse est 90-130 MBq/nmol (Figure 3).
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-page=...

L’intégrine αvβ3 est un type de protéine qui est fortement exprimée sur les cellules endothéliales activées subissant l’angiogenèse. Ainsi, évaluer l’intégrité de l’intégrine est d’un grand intérêt en oncologie. Ici, nous présentons une méthode pour préparer les 68marqués au Ga radiopeptides et une méthode pour évaluer son efficacité biologique.

Préparer un 68Ga-étiqueté Arginine Glycine Aspartate (RGD)-peptide de l’angiogenèse

The &#945;v&#946;3 integrin is a heterodimeric adhesion molecule involved in tumor cell migration and angiogenesis. The integrin is overexpressed in ...

Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans la préparation du Gallium 68 étiqueté RGD-Peptide et la méthode pour l’évaluation biologique de ses analogues. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’un protocole systémique simple pour le développement d’un nouveau peptide étiqueté radiométéral. Ki-Hye Jung, post-doc de notre institut, fera la démonstration de la procédure.Commencez par utiliser 0,5 acide chlorhydrique molaire pour élétauter le trichlorure de gallium radiolabeled d’un générateur de germanium de gallium radiolabeled. Purgez le composé en flacon de réaction de cinq millilitres avec du gaz azoté à 80 degrés Celsius. Suivi de l’ajout de 100 microgrammes d’acétate d’arginine glycine ou peptide RGD dans un acétate de sodium molaire au composé séché.Chauffer le mélange de réaction à 80 degrés Celsius pendant cinq minutes avant de laisser refroidir le mélange à température ambiante. Pour purifier le produit brut avec une chromatographie liquide haute performance, ajoutez la solution à une colonne C18 et passez la solution à travers une cartouche en phase inverse C18. Lavez la cartouche avec deux millilitres de solution saline et élisez le pep

preparing-68ga-labeled-arginine-glycine-aspartate-rgd-peptide-for

Research

Recherche

JoVE Journal

Medicine

Médecine

Adulte normale vascularisé tissus de mammifères qui manque de l'angiogenèse physiologique et qui n'a pas été exposé à une intervention chirurgicale est utilisée pour étudier: (i) l'initiation et le développement de l'angiogenèse après administration intrapéritonéale d'agents de test, et (ii) la modification de l'angiogenèse après l'administration systémique de certains agents de test.

Assay Rat angiogenèse Mésentère

Pour démontrer l'imagerie moléculaire du cancer MR avec un petit peptide agent de contraste IRM spécifique aux protéines de plasma coagulé dans le stroma de la tumeur dans un modèle de cancer de la prostate de la souris ciblé.

M. imagerie moléculaire du cancer de la prostate avec un agent de contraste ciblé Petit moléculaire CLT1 Peptide

Une procédure pour l'isolement de EOB-DTPA et complexation ultérieure avec Ga naturel (III) et 68 Ga est présenté ici, ainsi que d' une analyse approfondie de tous les composés et les enquêtes sur l' efficacité de l' étiquetage, de la stabilité in vitro et l'octanol / eau coefficient du complexe radiomarqué de distribution.

Enquêtes sur le complexe Ga (III) de EOB-DTPA et son<sup&gt; 68</sup&gt; Ga radiomarqué analogique

Nous présentons un protocole pour la synthèse d’hydrogels fonctionnalisés par RGD en tant que dispositifs pour l’administration de cellules et de médicaments. La procédure implique une cycloaddition d’alcyne-azoture catalysée par le cuivre (CuAAC) entre de l’acide polyacrylique modifié par des alcynes (PAA) et un dérivé de l’azoture de RGD. Les hydrogels sont formés à l’aide de la polycondensation assistée par micro-ondes et leurs propriétés physicochimiques sont étudiées.

La Synthèse des RGD-fonctionnalisé hydrogels comme un outil pour les applications thérapeutiques

Un protocole pour la synthèse de guanidines modification alkyle basés sur l'utilisation des précurseurs correspondants est présentée.

Modification et fonctionnalisation du groupe Guanidine par Précurseurs sur mesure

Un protocole pour la synthèse d’un 1, 2-dithiolane modifiée peptide et la caractérisation des structures supramoléculaires résultant de la peptide auto-assemblage.

Synthèse et caractérisation de 1, 2-Dithiolane modifiée Peptides auto-assemblage

Les techniques de génération d’une bibliothèque de peptides courts pouvant activer les mastocytes via le récepteur MRGPRX2 sont décrites. Les techniques associées sont faciles, peu coûteuses et peuvent être étendues à d’autres récepteurs cellulaires.

Criblage des peptides qui activent MRGPRX2 à l’aide de cellules HEK modifiées

TGT surface est une plate-forme innovante pour étudier la diaphonie facteur de croissance-intégrine. La conception flexible de la sonde, la spécificité du ligand d’adhérence et la modulation précise des conditions de stimulation permettent des évaluations quantitatives robustes de l’interaction EGFR-intégrine. Les résultats mettent en évidence l’EGFR en tant que mécanisme de réglage de la mécanique de l’intégrine«mécano-organisateur », influençant l’assemblage de l’adhérence focale et...

Sondes d’attache de jauge de tension pour quantifier la mécanique et l’adhérence de l’intégrine médiée par le facteur de croissance

Cette étude a développé une méthode non invasive et en temps réel pour évaluer la distribution du ligand de mort programmée 1 dans l’ensemble du corps, basée sur l’imagerie tomographique par émission de positons de l’antagoniste du D-dodécapeptide [68Ga]. Cette technique présente des avantages par rapport à l’immunohistochimie conventionnelle et améliore l’efficacité de l’identification des patients appropriés qui bénéficieront d’un traitement par blocage des points de contrôle immunitaires.

Développement d’un traceur PET de peptide D marqué au gallium 68pour l’imagerie de l’expression programmée du ligand 1 de la mort

Cette recherche décrit le processus automatisé de production de [68Ga]Ga-3BP-3940 avec le synthétiseur GAIA V2, pour l’imagerie TEP de la protéine d’activation des fibroblastes. Les résultats des tests de contrôle de la qualité effectués sur trois lots d’essai sont également présentés.

Préparation automatisée de [68Ga]Ga-3BP-3940 sur un module de synthèse pour l’imagerie TEP du microenvironnement tumoral

Apprenez à préparer des peptides RGD marqués au Gallium-68 pour l'imagerie oncologique et l'évaluation biologique. Cette méthode systématique simplifie le développement de radiotraceurs peptidiques.

Préparer un ⁶⁸Ga-étiqueté Arginine Glycine Aspartate (RGD)-peptide de l’angiogenèse

Explorer plus de vidéos