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Repressing Gene Transcription by Redirecting Cellular Machinery with Chemical Epigenetic Modifiers

Réprimer la Transcription du gène en redirigeant la machinerie cellulaire avec des modificateurs chimiques épigénétiques

Full Text
6,997 Views
10:28 min
September 20, 2018

DOI: 10.3791/58222-v

Anna M. Chiarella1, Tiffany A. Wang2, Kyle V. Butler3, Jian Jin3, Nathaniel A. Hathaway4

1Chemical Biology and Medicinal Chemistry, Center for Integrative Chemical Biology and Drug Discovery, Curriculum in Genetics and Molecular Biology,University of North Carolina, 2College of Arts and Sciences, Chemical Biology and Medicinal Chemistry, Center for Integrative Chemical Biology and Drug Discovery,University of North Carolina, 3Chemical Biology and Drug Discovery, Pharmacological Sciences and Oncological Sciences,Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 4Chemical Biology and Medicinal Chemistry, Center for Integrative Chemical Biology and Drug Discovery, Curriculum in Genetics and Molecular Biology, Lineberger Comprehensive Cancer Center,University of North Carolina

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article describes a method for controlling gene expression by recruiting chromatin-modifying machinery in a gene-specific and reversible manner. This technique addresses key questions in the epigenetics field, particularly regarding gene regulation mechanisms.

Key Study Components

Area of Science

  • Epigenetics
  • Gene Regulation
  • Chromatin Dynamics

Background

  • Regulation of the chromatin environment is crucial for gene expression.
  • The method allows for modulation of chromatin loci with endogenous enzymes.
  • Mouse ESL culture presents challenges for new users.
  • Safety monitoring is essential during the protocol.

Purpose of Study

  • To develop a method for gene expression control.
  • To explore the mechanisms of gene regulation.
  • To establish cause and effect relationships between chromatin regulatory elements.

Methods Used

  • Passaging 18 million 293T HEK cells per 50 cm plate.
  • Monitoring two separate lines of cell culture.
  • Utilizing physiologically relevant endogenous enzymes.
  • Implementing safety protocols during viral infection steps.

Main Results

  • The method enables gene-specific and reversible control of gene expression.
  • Demonstrates the feasibility of using endogenous enzymes for chromatin modulation.
  • Highlights the challenges faced by new users in mouse ESL culture.
  • Emphasizes the importance of safety during experimental procedures.

Conclusions

  • This technique represents a significant advancement in the field of epigenetics.
  • Further demonstration of the method is necessary for broader application.
  • Understanding the chromatin environment is vital for gene expression studies.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this method?
The main advantage is the ability to modulate chromatin loci with physiologically relevant endogenous enzymes.
What challenges do new users face?
New users often struggle with mouse ESL culture, which is inherently difficult without proper training.
Why is safety monitoring important?
Safety monitoring is essential during the viral infection steps to prevent contamination and ensure researcher safety.
How many cells are needed to start the protocol?
The protocol begins with 18 million 293T HEK cells per 50 cm plate.
What is the purpose of this study?
The purpose is to control gene expression and explore the mechanisms of gene regulation.
What are the key areas of science involved?
The key areas include epigenetics, gene regulation, and chromatin dynamics.

Réglementation de l’environnement de la chromatine est un processus essentiel nécessaire pour l’expression des gènes appropriés. Nous décrivons ici une méthode pour contrôler l’expression des gènes par le recrutement de modificateurs de la chromatine machines de façon gène-spécifique et réversible.

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’épigénétique telles que les mécanismes de régulation des gènes et les relations de cause à effet entre les différents éléments de régulation de la chromatine. Le principal avantage de cette technique est que pour la première fois il est possible de moduler un loci de chromatine avec des enzymes endogènes physiologiquement pertinentes. Généralement, les individus nouveaux à cette méthode auront du mal parce que la culture de souris ESL est intrinsèquement difficile pour ceux qui n’ont pas été formés à la technique.

Une autre démonstration de cette méthode est essentielle car les étapes de l’infection virale cellulaire sont difficiles à apprendre. Le chercheur doit mettre à temps deux lignées distinctes de culture cellulaire et il est nécessaire de surveiller avec vigilance la sécurité pendant ces étapes. Pour commencer le protocole, passage 18 millions de cellules HEK 293T par plaque de 50 centimètres.

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