Protocole clinique de produire des dérivés du tissu adipeux stroma vasculaire Fraction pour la régénération du Cartilage potentiels

L’arthrose est l’un des troubles débilitants les plus courants chez les personnes âgées. À l’heure actuelle, il n’existe aucun remède précis pour les causes sous-jacentes de l’arthrose. Ce protocole clinique décrit une procédure innovatrice pour un traitement prometteur, mini-invasif, et alternatif de l’ostéoarthrite humaine de genou en régénérant le cartilage comme le tissu.

L’arthrose est l’un des troubles débilitants les plus courants chez les personnes âgées. À l’heure actuelle, il n’existe aucun remède précis pour les causes soulignant de l’arthrose. Ce protocole clinique est une procédure innovatrice pour un traitement prometteur, mini-invasif, et alternatif de l’ostéoarthrite humaine de genou en régénérant le tissu cartilage-comme.

Amenez le patient dans une salle d’opération avec une hotte biohazard de classe A, et placez-le dans une position de supination. Nettoyez la zone abdominale du patient avec 5% d’iode bêtadine-povidine et drapez le patient en utilisant la technique stérile, exposant la zone propre de l’abdomen pour la liposuccion. Environ cinq centimètres infero-latéralement de l’ombilicus, anesthésient deux emplacements, un sur la gauche et l’autre sur le côté droit de l’ombiic d’incision à faire.

Utilisation de deux millilitres de lidocaïne de 2 % sans épinéphrine avec une aiguille de 1,5 pouce de calibre 25 dans une seringue de cinq millilitres en injectant chaque site au niveau épidermique. Anesthésier le site de l’incision à faire à l’aide de cinq millilitres de solution tumescente et d’une seringue de 10 millilitres et de l’aiguille de calibre 25 de 1,5 pouce. Faire deux incisions de 0,5 centimètres environ cinq centimètres au-dessous de l’ombilicus latéralement en pinçant la peau pour augmenter la profondeur du niveau sous-cutané.

À l’aide d’une lame numéro 11, aider la peau surélevée à pénétrer à travers le niveau sous-cutané, mais pas à pénétrer à travers la paroi abdominale. En utilisant une canule de calibre 60 centimètres, anesthésier le niveau sous-cutané de toute la région du bas-ventre qui doit être liposuccionnée avec 700 à 800 millilitres de la solution tumescente. Après avoir terminé l’infiltration de tout le bas-ventre avec une solution tumescente, préparez un appareil de liposuccion en connectant une canule de 3,0 millimètres reliée à une seringue de 60 millilitres ou 30 millilitres pour la liposuccion manuelle ou une canule de 3,0 millimètres spécialement conçue reliée à un kit de centrifugeuse.

Une seringue système fermé développé par nous-mêmes et approuvé par la FDA CDRH dans le but de maintenir la stérilité connectée à une machine à vide pour la liposuccion assistée sous vide. Effectuer la liposuccion pour obtenir 100 à 110 grammes de tissu adipeux à l’exclusion de la solution tumescente. Lors de l’exécution de la liposuccion, le tissu adipeux sera obtenu avec la solution tumescente mais devrait être séparé et enlevé.

Pour séparer d’abord la solution tumescente par gravité, le tissu adipeux de la trousse de centrifugeuse peut être transféré à une seringue de 60 millilitres et placer la seringue vers le bas. Par exemple, la partie d’ouverture de la seringue se trouve au fond. En attendant cinq à six minutes, le tissu adipeux et la solution tumescente seront séparés.

Retirer le liquide au bas de la seringue en appuyant sur le dessus du piston de seringue. Effectuer les étapes ci-dessus neuf à 11 jusqu’à ce que le total de la 100 grammes à 110 grammes d’aspirate lipidique tissulaire adipeux par genou a été accumulé. Après avoir séparé la solution tumescente par gravité et accumulé 50 grammes à 55 grammes d’aspirate lipidique par chaque système fermé stérile de kit centrifugeuse de 60 millilitres, placez les deux kits de centrifugeuse dans un seau à conteneurs de centrifugeuse et tournez à 1600 G pendant cinq minutes, condensant l’aspirate lipidique et séparant le liquide du tissu adipeux.

Ce processus condense davantage l’aspirate lipidique et peut produire de l’huile grasse dans certains cas. En prenant soin de ne pas trembler, retirez le bouchon de sécurité et le bouchon au bas du kit de centrifugeuse. Retirez le liquide inférieur en poussant lentement vers le bas sur le dessus du piston du kit de centrifugeuse.

Sur la seringue séparée de 60 millilitres, dissoudre 10 milligrammes de collagène, 5 milligrammes collagène spécifique pour le tissu conjonctif, et cinq milligrammes de collagène spécifique pour le tissu adipeux avec 50 millilitres de solution saline normale. Mélanger environ 25 à 30 millilitres d’aspirate lipidique condensée avec de la collagène dissoute, cinq milligrammes de collagène spécifique au tissu conjonctif et cinq milligrammes de collagène spécifiques au tissu adipeux à un rapport d’un à un, volume/volume, en reliant la seringue de 60 millilitres à un kit de centrifugeuse à l’aide d’un connecteur spécialisé. Bien mélanger pour condenser l’aspirate de préparation et la collagène en poussant le contenu entre la seringue de 60 millilitres et le kit de centrifugeuse à l’aide d’une tige ou d’un pousseur.

Transférer le mélange de l’aspirate lipidique et de la collagène vers la seringue de 60 millilitres. Connectez chaque seringue de 60 millilitres contenant le mélange avec l’homogénéiseur tissulaire qui contient des lames. Connectez une seringue vide de 60 millilitres à l’autre extrémité de l’homogénéiseur.

Poussez le mélange à l’autre seringue de 60 millilitres à travers l’homogénéiseur pendant quatre à six fois, ce qui entraîne la coupe et le hachage de l’aspirate lipidique. Transférez l’aspirate lipidique homogénéisé et le mélange collagenous vers le kit centrifugeuse de 60 millilitres à l’aide d’un connecteur spécialisé. Placez les kits de centrifugeuse dans un récipient à placer dans un incubateur préchauffé à 37 degrés Celsius.

Incuber les deux kits de centrifugeuse avec le mélange homogénéisé à 37 degrés Celsius pendant 40 minutes tout en tournant à 45 rpm. Après 40 minutes d’incubation, retirer le contenant de l’incubateur de façon stérile. Retirez ensuite les kits de centrifugeuse et placez-les dans une machine à centrifugeuses.

Centrifugeuse les mélanges à 800 G pendant cinq minutes pour séparer le SVF adipeux dérivé des tissus. Après la centrifugeuse, le supernatant, qui comprend la collagène et le tissu adipeux digéré, est retiré de chaque kit de centrifugeuse en enlevant le bouchon de seringue sur le dessus du piston et en plaçant une seringue de 30 millilitres sur l’ouverture du piston à travers une connexion seringue-serrure. Appuyez lentement sur la partie du canon de la seringue de 30 millilitres pour que le supernatant se remplisse dans la seringue de 30 millilitres.

Appuyez sur le canon de seringue de 30 millilitres jusqu’aux trois à quatre derniers millilitres du fond du kit de centrifugeuse, ne laissant que les trois à quatre derniers millilitres de SVF dérivé des tissus adipeux. Le surnatant est jeté. Retirez la seringue de 30 millilitres du haut du piston et remplissez la seringue d’une solution de sonnerie lactée à 5 %, également connue sous le nom de D5LR.

En attachant la seringue de 30 millilitres remplie de D5LR sur le dessus de l’ouverture du piston, remplissez les kits de centrifugeuse contenant de trois à quatre millilitres de SVF dérivé du tissu adipeux avec D5LR jusqu’à 55 millilitres. Retirez ensuite la seringue de 30 millilitres, plafonnez l’ouverture du piston et centrifugez à nouveau les kits de centrifugeuse à 300 G pendant environ quatre minutes. Répétez les étapes numéro 17 au numéro 21 pour un total de quatre lavages.

Après la quatrième centrifugeuse, afin d’obtenir le SVF final pour injection, retirez le bouchon de sécurité et le bouchon à l’ouverture inférieure du kit de centrifugeuse sans secouer ou tourner le kit de centrifugeuse. Fixez une seringue de 20 millilitres à l’ouverture inférieure du kit centrifugeuse à l’aide d’un connecteur spécialement conçu. Tirez le piston de la seringue de 20 millilitres plusieurs fois d’avant en arrière pour secouer les cellules qui se sont installées sur le fond du kit de centrifugeuse.

Retirez le volume total désiré du SVF contenant à la fois des AST et de l’ECM ainsi que d’autres cellules et tissus. Habituellement environ trois à quatre millilitres de chaque kit de centrifugeuse pour les injections articulaires du genou. Nous avons fait 30 millilitres de sang autologue avec 2,5 millilitres de solution dextrose de citrate d’anticoagulant.

Puis le sang prélevé a été transféré dans les kits de baril de centrifugeuse de 60 millilitres. Il a ensuite été centrifugé à 730 gravité pendant cinq minutes. Et le supernatant a été enlevé et mis dans un nouveau kit de canon centrifugeuse de 60 millilitres.

Le supernatant a été centrifugé à 1350 gravité pendant quatre minutes, obtenant 4,4 millilitres de PRP. Nettoyez le genou du patient avec 5% de bêtadine et drapez-le d’une manière stérile. Palpate l’antérieur du genou pour l’espace articulaires entre les os tibial et fémoral.

Anesthésier le site d’injection superficiellement avec de la lidocaïne diluée, un millilitre de 1% de lidocaïne dilué avec quatre millilitres de solution saline normale, de la peau à juste à l’extérieur de la capsule articulaire. Puis anesthésier l’intérieur de la capsule articulaire avec ropivacaine diluée, un millilitre 0,75% ropivacaine dilué avec trois millilitres de solution saline normale. Mélanger deux millilitres d’HA à la fente de six à huit millilitres de SVF contenue dans une seringue de 20 millilitres à travers une seringue au connecteur de seringue.

En utilisant une seringue pour seringuer le connecteur, ajouter 0,4 millilitres de chlorure de calcium aux trois à quatre millilitres de PRP autologue qui a déjà été préparé et être prêt dans une seringue de cinq millilitres. Dans une seringue de cinq millilitres et de 8 à 10 millilitres de mélange HA-SVF, mélanger 3,5 à 4,5 millilitres de chlorure de calcium PRP dans une seringue de 20 millilitres à travers une seringue et un connecteur de seringue. Injectez immédiatement le mélange, environ 12 à 15 millilitres, lentement dans l’articulation tibiale-fémorale antérieure du genou, à l’aide d’une aiguille de calibre 18 de 38 millimètres avec ou sans le guidage échographique.

Après l’injection, bander le site d’injection avec pression en pliant la gaze de coton 4x4 quatre fois et en plaçant des rubans sur la gaze 4x4 pliée. Demandez au patient de rester immobile pendant 60 minutes pour permettre l’attachement cellulaire. Demandez au patient de limiter les activités pendant au moins une semaine après son congé de la clinique.

Retour à la clinique pour trois injections supplémentaires de PRP activées par chlorure de calcium sur trois semaines. Le patient présentant l’OA de stade trois a reçu le traitement tel que décrit dans la section de protocole. Après la deuxième semaine de l’injection de mélange d’ASV-ECM, la douleur du patient et rom se sont améliorées.

Par la 16ème semaine, la douleur du patient et rom sensiblement amélioré plus de 70% IRM post-traitement, prise après la 16ème semaine, a montré l’épaisseur accrue du tissu cartilage-comme sur le côté médial du genou. Un autre patient présentant l’OA d’étape trois a reçu le traitement tel que décrit dans la section de protocole. Après la deuxième semaine de l’injection de mélange d’ASV-ECM, la douleur du patient et rom se sont améliorées.

Par la 18ème semaine, la douleur et le ROM se sont sensiblement améliorés à 80% MRI répété pris après la 18ème semaine a montré une augmentation de la taille du tissu cartilage-comme sur le côté antérieur-médial du genou. Le troisième patient présentant l’OA de stade trois a reçu le traitement tel que décrit dans la section de protocole. Après la deuxième semaine d’injection de mélange ASV-ECM, la douleur du patient et rom amélioré d’environ 50% Par la 22ème semaine, la douleur et ROM sensiblement amélioré plus de 80% IRM répétée prise après la 22ème semaine a montré une augmentation de la hauteur du tissu cartilage-like sur le côté médial du genou.

Actuellement, aucun traitement curatif n’est disponible pour le traitement de l’œso. Cependant, l’injection percutanée de thérapie de cellules souches avec des ASCs et l’ECM homogénéisé avec HA et PRP analogue activé avec le chlorure de calcium peut fournir une alternative à la thérapie de traitement actuelle du traitement de l’OV du genou.