Mesure de température de corps de souris avec le thermomètre à infrarouge pendant Passive systémique anaphylaxie et évaluation d’allergie alimentaire
14 septembre 2018
Nous présentons ici une nouvelle méthode pour mesurer avec précision les écarts de température du corps dans l’anaphylaxie systémique passive (PSA) et des modèles de souris allergie alimentaire à l’aide d’un thermomètre infrarouge. Cette procédure a été fidèlement reproduite dans les précédents résultats de PSA.
Cette méthodologie aide à répondre aux questions clés dans le domaine de l’allergie et de l’immunologie, en particulier celles qui sont concernant les phénotypes qui peuvent être associés à des changements de température corporelle. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle est peu coûteuse, non invasive, et ne nécessite pas d’anesthésie. Les implications de cette technique permettent aux chercheurs de réduire le stress et la douleur des souris lors de la mesure de la température tout en éliminant les effets de l’anesthésie, et /ou de visualiser les phénotypes comportementaux.
Pour mesurer la température corporelle de la souris après l’anesthésie, confirmer la sedation par taux respiratoire ou immobilité et saisir la souris par la nuque avec un index et le pouce et la queue avec un doigt rose. Tout en tenant la souris parallèle à la surface du banc de laboratoire, placez un capteur thermomètre infrarouge sous le bas-ventre avec la surface plane extérieure du thermomètre à deux à cinq millimètres de la surface de l’abdomen entre les deux mamelons supérieurs. Ensuite, apressez la gâchette du thermomètre pour mesurer la température de l’animal, en prenant soin de maintenir la souris et le thermomètre stable.
Pour mesurer la température corporelle de la souris sans anesthésie, ramasser la souris au milieu de la queue et exposer l’abdomen. Laissez la souris s’accrocher à une surface de bord droit avec ses scies avant et maintenez la gâchette pour mesurer la température. Alternativement, laissez la souris s’accrocher au bord droit supérieur du thermomètre et faire reposer la souris sur la surface plane extérieure du thermomètre avec son abdomen juste au-dessus du capteur infrarouge pendant la mesure de température.
Pour une sensibilisation systémique passive à l’anaphylaxie, utilisez une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 26 pour injecter 200 microlitres d’anti-dinitrophenol fraîchement préparé, ou DNP, IgE dans PBS, dans le péritoine de chaque animal receveur juste latéralement à la ligne médiane entre les mamelons les plus inférieurs et les deuxièmes plus inférieurs. 24 heures après l’injection, mesurez la température corporelle de chaque animal receveur comme démontré, et chargez une seringue d’un millilitre munie d’une aiguille de calibre 30 avec 100 microlitres d’albumine de sérum humain DNP fraîchement préparée. Pour induire une anaphylaxie systémique passive, insérez l’aiguille sur le côté médial de l’œil à un angle peu profond visant derrière l’œil, et injectez tout le volume de solution par voie intraveineuse dans le sinus veineux rétro-orbital.
Placez ensuite la souris seule dans une cage de récupération avec surveillance jusqu’à ce que la charge complète, et de mesurer la température corporelle et l’activité toutes les 10 minutes pendant 70 minutes. Les souris sensibilisées IgE démontrent une baisse de température maximale de trois degrés Celsius à 20 minutes tandis que les souris témoins PBS présentent une baisse maximale de 1,1 degré Celsius dans la même période après le défi. Des observations comportementales peuvent également être effectuées chez des animaux non anesthésiés afin d’évaluer la relation entre les baisses de température observées et l’activité de la souris.
Dans ce défi représentatif d’allergie alimentaire de souris, le groupe témoin de PBS a démontré une baisse significative de température 10 minutes après défi comparé au groupe traité d’inhibiteur de 2CA. L’évaluation des scores d’activité et des baisses de température de ce défi d’allergie alimentaire a indiqué une corrélation statistiquement significative entre les deux ensembles de données. Après cette procédure, d’autres expériences impliquant des mesures de température corporelle de souris peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires concernant les phénotypes comportementaux qui sont associés au changement de température corporelle.
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Aperçu
Cet article présente une nouvelle méthode pour mesurer les différences de température corporelle chez des modèles murins d'anaphylaxie systémique passive et d'allergie alimentaire à l'aide d'un thermomètre infrarouge. La technique est non invasive et a été reproduite avec succès dans des études antérieures.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Allergie
- Immunologie
Contexte
- Les variations de la température corporelle peuvent indiquer des réactions allergiques.
- Les méthodes traditionnelles de mesure de la température peuvent entraîner du stress et nécessiter une anesthésie.
- Les techniques non invasives sont préférées pour des raisons éthiques.
Objectif de l'étude
- Présenter une méthode économique et respectueuse des animaux pour mesurer la température corporelle de la souris.
- Faciliter la recherche sur les phénotypes associés aux variations de température corporelle lors de réactions allergiques.
Méthodes utilisées
- Utilisation d'un thermomètre infrarouge pour la mesure de la température.
- Technique de mesure qui minimise le stress chez l'animal.
- Confirmation de la sédation par le taux de respiration ou l'immobilité.
- Positionnement précis du thermomètre pour des mesures exactes.
Résultats principaux
- La méthode permet des mesures précises de la température sans anesthésie.
- Réduit le stress et la douleur chez les souris pendant le processus de mesure.
- Permet la visualisation de phénotypes comportementaux liés aux variations de température.
Conclusions
- Cette technique constitue un progrès important dans la recherche en allergologie et en immunologie.
- Elle offre une alternative fiable aux méthodes traditionnelles de mesure de la température.
- Les études futures peuvent bénéficier de cette approche non invasive.
Questions fréquemment posées
Pertinence industrielle pour les cadres
La surveillance non invasive de la température chez les modèles murins d'allergie permet une évaluation concomitante des phénotypes physiologiques et comportementaux, sans interférence liée à l'anesthésie. Cette approche améliore la fiabilité des données dans les études mécanistiques de l'anaphylaxie et de l'allergie alimentaire en préservant l'état naturel des animaux pendant la mesure. La méthode soutient les protocoles de validation ciblée et de criblage phénotypique, dans lesquels la réponse thermique est corrélée à l'activation immunitaire.
Applications stratégiques en R-D biopharmaceutique
Début de la découverte et validation de la cible
- Valeur scientifique : Permet l'interrogation d'hypothèses thérapeutiques reliant les médiateurs immunitaires aux dynamiques de température dans les modèles d'anaphylaxie systémique passive.
- Valeur opérationnelle : Fournit des tendances fiables de température sans anesthésie, réduisant ainsi la variabilité due aux effets des sédatifs sur les réponses immunitaires.
- Valeur prédictive : Facilite la détection mécanistique des risques en confirmant que les variations de température cutanée reflètent les changements de température centrale lors de provocations allergiques.
Développement de criblages et de tests
- Valeur scientifique : Fournit des mesures quantitatives et reproductibles de la température superficielle, adaptées au criblage haut débit de composés immunomodulateurs.
- Valeur opérationnelle : Supprime les goulots d'étranglement liés à l'anesthésie, permettant une surveillance longitudinale de la température et de l'activité chez des animaux éveillés.
- Préparation du test : Permet une phénotypage thermique standardisé dans différents modèles d'allergie alimentaire et d'anaphylaxie, avec une variabilité technique minimale.
Recherche translationnelle et préclinique
- Continuité translationnelle : Permet de corréler les baisses de température avec les scores d'activité comportementale, soutenant ainsi une analyse phénotypique liée aux biomarqueurs dans les modèles d'allergie.
- Modélisation préclinique : Facilite l'utilisation de systèmes pertinents pour la maladie en permettant des mesures thermiques répétées durant les phases de provocation et de récupération.
- Décisions ajustées au risque : Fournit des critères d'évaluation thermiques objectifs pour des décisions de poursuite ou d'arrêt lors du criblage préclinique de thérapeutiques anti-allergiques.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Cette méthode s'intègre aux flux de travail de biologie de la découverte en permettant une surveillance thermique en temps réel pendant les tests d'agression immunitaire, reliant ainsi l'observation phénotypique à une compréhension mécanistique.
- Biologie de la découverte : Permet de tester l'hypothèse d'une thermorégulation médiée par les cytokines durant l'anaphylaxie, sans interférence des anesthésiques.
- Surveillance : Permet la standardisation des tests grâce à des mesures de température non invasives et reproductibles chez des modèles murins conscients.
- Analytique : Génère des tendances thermiques quantitatives corrélées à la gravité des symptômes cliniques et à la cinétique d'activation immunitaire.
- Recherche translationnelle : Relie la dynamique de température à des phénotypes liés à l'activité, renforçant la fiabilité prédictive de la transposition des modèles d'allergie.
- Réutilisation en entreprise : Constitue une capacité évolutible et peu coûteuse, utilisable à plusieurs reprises sur diverses plates-formes de découverte en immunologie et en allergologie.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive en révélant des relations non biaisées entre les variations de température et les phénotypes immuno-médiés.
- Valeur opérationnelle : Améliore la reproductibilité et le débit en supprimant les étapes dépendant de l’anesthésie dans les protocoles de surveillance de la température.
- Valeur stratégique : Optimise l’efficacité du capital en permettant un phénotypage multiparamétrique (température + comportement) dans des tests sur un seul animal.
- Impact sur le portefeuille : Favorise la priorisation ciblée ajustée au risque grâce à des indicateurs objectifs de réponse thermique lors de la validation de modèles d’allergie.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une formation à la position adéquate du thermomètre infrarouge et au maintien d'une distance constante pour des mesures précises de la température de surface.
- Dépend de conditions environnementales stables afin de minimiser la dérive thermique lors de mesures longitudinales.
- Exige une standardisation inter-équipes des protocoles de mesure entre les groupes d'immunologie et de phénotypage comportemental.
- Implique des ajustements selon les différentes souches de souris, les couleurs de pelage et les propriétés de la surface corporelle influant sur l'émissivité infrarouge.
- Présente des limites pratiques pour la mesure de la température à travers le pelage ou chez des animaux adoptant des postures anormales durant l'observation comportementale.
