Name: Application des biopuces microfluidiques technologie pour détecter sérum allergène spécifique immunoglobuline E (sIgE) (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Découvrez la détection d'IgE spécifiques sériques par biopuce microfluidique pour le diagnostic allergique. Cette méthode par chimiluminescence réduit les coûts et le volume de sérum nécessaire.

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Les auteurs remercient professeur Mei Jiang pour son aide dans l’analyse statistique et M. Hammer Tsui dans la préparation du manuscrit. Cette étude a été financée par le Guangzhou Science et Technology Foundation (201804020043) et la Fondation nationale sciences naturelles de Chine (NSFC 81572063 et NSFC 81802076). Les financement de groupes d’accord avec la conception de l’étude, l’analyse des données, rédaction de manuscrits et décision de publier. Aucun autre financement a été reçue pour cette étude.

Cette étude et l’utilisation des échantillons sériques ont été approuvées par le Comité d’éthique de l’université le premier affilié hôpital de Guangzhou Medical (VJJJ-2016-73). Tous les participants ont donné leur consentement écrit indépendamment ou par l’intermédiaire de leurs parents (dans le cas des enfants).
1. Généralités au groupe d’étude
Remarque : Le référentiel d’Information allergie de l’état laboratoire clé des maladies respiratoires (AIR-SKLRD) est une banque de sérums grand établie à l’intérieur de l’hôpital de Guangzhou Institute of Respiratory (GIRH). Lancé dans la dernière décennie, l’AIR-SKLRD a déjà commencé à recueillir et stocker des échantillons de sérum provenant de patients atteints de maladies allergiques, ainsi que leurs renseignements cliniques (tableau 1)4,5. La présente étude a été réalisée avec des sérums provenant de l’AIR-SKLRD.
<ol><li>Recherche base de données de l’AIR-SKLRD pour les sérums prélevés de 2015 de janvier à juin 2018 et sélectionner les patients atteints de la maladie allergique, qui se sont révélés sensibles aux allergènes communs dans la région.</li>
	<li>Assurez-vous que tous les patients sélectionnés ont des maladies allergiques liées, telles que la rhinite allergique et l’asthme, dermatite allergique, ou urticaire, et que le sérum de ces patients contienne plusieurs immunoglobulines de l’allergène spécifique sérum E (sIgE) sensibilisations des allergènes courants dans cette région, détectés par le système 1.</li>
	<li>Exclure les patients avec des dossiers médicaux incomplètes, ceux perdus de vue, ceux qui refusent de donner leur consentement éclairé concernant l’utilisation de leurs échantillons de sérum à des fins scientifiques, ceux avec une immunodéficience identifié, ceux actuellement sur l’immunothérapie ou des agents immunomodulateurs, ou ceux qui présentent des infections parasitaires.</li>
	<li>Assurer qu'aucune prescription de traitement ou de la drogue a été donnée avant la collecte de sérum afin de minimiser les interférences pour les résultats de laboratoire. Tous les échantillons de sérum qui ne remplissent pas les critères ont été rejetées.</li>
</ol>2. Etude des flux et des mesures d’intérêt
Remarque : Le système microfluidique doit 100 µL de sérum pour la détermination de 19 allergènes. Sang veineux (5 mL) ont été prélevé de chaque patient à l’aide d’un vaisseau sanguin sous vide contenant du gel de séparation. Après centrifugation pendant 10 min à 1 000 x g, la couche supérieure a été recueillie pour être analysés. Sérum inutilisé a été stocké à-80 ° C. Avant l’essai, le sérum a été maintenu à température ambiante pendant 30 min et a été secoué par un vortex. Les cycles de gel-dégel répétés ont été évitées.
<ol><li>Principalement de tester les échantillons de sérum de sIgEs aux allergènes entiers de Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), poils de chat (e1), poils de chien (e5), herbe des Bermudes (g2), timothy grass) G6), blattes (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans (m5), herbe à poux (w1), blanc de œuf (f1), lait (f2), blé (f4), arachide (f13), soja (f14), amande (f20), crabe (f23) et crevette (f24). Suivez les instructions indiquées au point 3. NOTE : sIgE dosage a été fait avec l’IgE allergène spécifique test kit (voir la Table des matières) et mesurée par un analyseur à chimiluminescence.</li>
	<li>Choisir au hasard trois échantillons parmi les échantillons avec suffisant (au moins 900 µL) de sérum pour une étude de reproductibilité. Garder toutes les conditions inchangées, mesurer les trois sérums pour sIgEs allergène par jour pendant 9 jours consécutifs (soit un total de 100 x 9 = 900 µL de sérum).</li>
</ol>3. procédure d’essai semi automatisation du système microfluidique
Remarque : Le système 2 est l’intégration d’une technologie automatique microfluidique, microarray de protéine, lumière froide analyse, analyse IgE parallèle et technologie de traitement d’image. Le protocole d’essai est divisé en quatre parties : préparation de l’équipement, chargement d’échantillon, d’incubation et de mesure.
<ol><li>
Préparation du matériel
	<ol>
<li>Allumez le PC et la puissance de l’analyseur. Remarque : L’interrupteur est sur la gauche de la base.</li>
		<li>Lancez le programme LabIT sur le PC. Si la fenêtre d’avertissement de Darks apparaît, cliquez sur OK pour exécuter le Test de fuite. Par la suite, cliquez sur le logo de centre pour accéder à l’interface d’opération. Remarque : Le système rappellera à l’utilisateur d’exécuter le Test de fuite s’il est inactif pendant plus de 24 h.</li>
		<li>Vérifier le Temp de réaction et le CCD (charge - coupled device) Temp dans le coin inférieur droit de l’écran. Le Temp de réaction devrait s’élever à 37 ° C ± 1 ° C en 10 min environ, et le Temp de CCD devrait tomber à-15 ° C ± 1 ° C.</li>
		<li>Exécutez le Test de fuite après le Temp du CCD, a chuté à-15 ° C ± 1 ° C. Avant d’exécuter l’essai d’étanchéité, assurez-vous qu’il n’y a pas d’autres éléments laissés à l’intérieur de l’instrument et fermer la porte. Cliquez sur outils | Système de Test | Test d’étanchéité. N’ouvrez pas la porte au cours des essais. Lorsque le test est terminé, la fenêtre d’état s’affiche.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Chargement de l’échantillon
	<ol>
<li>Ajouter 620 µL de tampon de lavage, 120 µL de tampon de blocage, 60 µL de conjugués A et B, 60 µL de substrat A et B et 100 µL de sérum dans le réservoir de réactif correspondant sur la cartouche microfluidique.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubation
	<ol>
<li>Cliquez sur l’ID de la cartouche, utiliser le scanner de code à barres pour scanner le numéro de série de la cartouche, entrez l’ID d’échantillon, mettre la cartouche dans l’analyseur et fermer la porte et cliquez sur analyseur et exécuter pour démarrer l’analyse.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Mesure
	<ol>
<li>Exporter les résultats vers un logiciel de statistique (par exemple, Excel) après la mesure. Remarque : Après 30 min d’incubation, l’analyseur automatiquement effectue la mesure et indique le résultat.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Extinction de l’analyseur
	<ol>
<li>Pour l’entretien de routine, après avoir terminé le test, retirez la cartouche et essuyer l’analyseur fer de chauffage intérieur et électro-aimant légèrement avec 75 % d’alcool. Remarque : Ne pas appuyer fort ou secouer l’électro-aimant.</li>
		<li>Fermez la fenêtre LabIT. La fenêtre de contrôle de température sautera vers le haut. Il se ferme automatiquement lorsque le capteur CCD chauffe pour le mode de protection de 5 ° C. D’ici là, il sera prudent de couper l’alimentation de l’analyseur et le PC. Remarque : Ne fermez pas manuellement la contrôle fenêtre avant le Temp de CCD est passé à 5 ° C de température et n’éteignez pas la puissance de l’analyseur, ni le PC pendant l’échauffement du CCD.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. définition de la réactivité de sIgE
Remarque : Pour un échantillon de sérum non dilué, la plage de détection du système 2 est de 0,21 – 100 IU/mL.
<ol><li>Basé sur la valeur de seuil de 0,35 UI/mL, envisager un niveau de sIgE excédant 0,35 UI/mL pour être positif6,7. Évaluer la réactivité des tests sIgE comme8: classe 1 (≥0.35 et < 0,70 UI/mL), classe 2 (≥0.70 et < 3,50 UI/mL), classe 3 (≥3.50 et < 17,50 UI/mL), de la classe 4 (≥17.50 et < 50,00 UI/mL), classe 5 (≥50.00 et < 100,00 UI/mL) et la classe 6 (≥100.00 UI/mL).</li>
</ol>5. analyse statistique
<ol><li>Utiliser un histogramme pour afficher le taux de positivité des 19 allergènes (Figure 1) et utiliser la courbe de Levey-Jennings pour démontrer la répétabilité de la détection du système (Figure 2)9.</li>
	<li>Sélectionnez les trois inhalants allergènes les plus courants et les allergènes alimentaires (au total, six allergènes) et comparer les résultats à l’i 1 système d’évaluer ses performances diagnostiques cliniques10,11. Inclure le taux de concordance, sensibilité, spécificité, valeurs prédictives positives et négatives et l’aire sous le récepteur (ROC) de la caractéristique (AUC) de fonctionnement comme les critères d’évaluation.</li>
	<li>Appliquer corrélation analyse12 pour décrire les corrélations entre les deux systèmes et utiliser la valeur kappa par souci de cohérence de Spearman. Classer la valeur kappa comme presque parfait (0,8 à 1,0), importante (0,6 – 0,8), modérée (0,4 à 0,6), Foire/salon (0,2 – 0,4) ou pauvres (< 0,2)13. Utiliser l’analyse statistique SPSS 23,0 et MedCalc 11,0 et définir P < 0,05 comme signification statistique.</li>
</ol>

<ol><li>Kamble, S., Bharmal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incremental+Direct+Expenditure+of+Treating+Asthma+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Asthma+Research%22%5BJournal%5D)">Incremental Direct Expenditure of Treating Asthma in the United States.</a> Journal of Asthma Research. 46 (1), 73-80 (2009).</li>
<li>Paganelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+antibodies+in+the+diagnosis+of+atopic+disease.+Clinical+evaluation+of+a+new+in+vitro+test+system%2C+UniCAP%2C+in+six+European+allergy+clinics%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Specific IgE antibodies in the diagnosis of atopic disease. Clinical evaluation of a new in vitro test system, UniCAP, in six European allergy clinics.</a> Allergy. 53 (8), 763-768 (1998).</li>
<li>Wang, J., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+serum+allergy+%28ige%29+tests+performed+by+different+assay+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Correlation of serum allergy (ige) tests performed by different assay systems.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121 (5), 1219-1224 (2008).</li>
<li>Sun, B., Zheng, P., Wei, N., Huang, H., Zeng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-sensitization+to+silkworm+moth+%28Bombyx+mori%29+and+9+inhalant+allergens+among+allergic+patients+in+Guangzhou%2C+Southern+China%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Co-sensitization to silkworm moth (Bombyx mori) and 9 inhalant allergens among allergic patients in Guangzhou, Southern China.</a> PLoS ONE. 9 (5), e94776(2014).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Component-Resolved+Diagnostic+Study+of+Dermatophagoides+Pteronyssinus+Major+Allergen+Molecules+in+a+Southern+Chinese+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigational+Allergology+%26+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Component-Resolved Diagnostic Study of Dermatophagoides Pteronyssinus Major Allergen Molecules in a Southern Chinese Cohort.</a> Journal of Investigational Allergology & Clinical Immunology. 25 (5), 343-351 (2015).</li>
<li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((grass+pollen+allergens+and+components+detected+in+a+southern+Chinese+cohort+of+patients+with+allergic+rhinitis+and%2For+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">grass pollen allergens and components detected in a southern Chinese cohort of patients with allergic rhinitis and/or asthma.</a> Molecular Immunology. 78 (2016), 105-112 (2016).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+profiles+of+serum+specific+IgE+and+IgG4+to+Dermatophagoides+pteronyssinus+allergen+and+its+major+components+during+allergen+immunotherapy+in+a+cohort+of+southern+Chinese+children%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Longitudinal profiles of serum specific IgE and IgG4 to Dermatophagoides pteronyssinus allergen and its major components during allergen immunotherapy in a cohort of southern Chinese children.</a> Molecular Immunology. 74 (2016), 1-9 (2016).</li>
<li>Lee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+measurement+using+AdvanSure%28R%29+system%3A+comparison+of+detection+performance+with+ImmunoCAP%28R%29+system+in+Korean+allergy+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Specific IgE measurement using AdvanSure(R) system: comparison of detection performance with ImmunoCAP(R) system in Korean allergy patients.</a> Clinica Chimica Acta. (9-10), 914-919 (2012).</li>
<li>Eckels, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+control%2C+analysis+and+secure+sharing+of+Luminex%28R%29+immunoassay+data+using+the+open+source+LabKey+Server+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Bmc+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Quality control, analysis and secure sharing of Luminex(R) immunoassay data using the open source LabKey Server platform.</a> Bmc Bioinformatics. 14 (1), 145(2013).</li>
<li>Bland, J. M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+methods+for+assessing+agreement+between+two+methods+of+clinical+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement.</a> Lancet. 327 (8476), 307-310 (1986).</li>
<li>Carletta, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+Agreement+on+Classification+Tasks%3A+The+Kappa+Statistic%5BTitle%5D)+AND+%22Computational+Linguistics%22%5BJournal%5D)">Assessing Agreement on Classification Tasks: The Kappa Statistic.</a> Computational Linguistics. 22 (2), 249-254 (1996).</li>
<li>Shyur, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+multiple+allergen-specific+IgE+by+microfluidic+immunoassay+cartridge+in+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Determination of multiple allergen-specific IgE by microfluidic immunoassay cartridge in clinical settings.</a> Pediatric Allergy and Immunology. 21, 623-633 (2010).</li>
<li>Cesana, B. M., Antonelli, P., Gallazzi, E., Marino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+measurement+methods%3A+an+endless+application+of+wrong+statistical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of measurement methods: an endless application of wrong statistical methods.</a> Intensive Care Medicine. 37 (6), 1038-1040 (2011).</li>
<li>Park, K. H., Lee, J., Sim, D. W., Lee, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Singleplex+Specific+IgE+Detection+Immunoassays%3A+ImmunoCAP+Phadia+250+and+Immulite+2000+3gAllergy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of Singleplex Specific IgE Detection Immunoassays: ImmunoCAP Phadia 250 and Immulite 2000 3gAllergy.</a> Annals of Laboratory Medicine. 38 (1), 23-31 (2018).</li>
<li>Teppo, H., Revonta, M., Haahtela, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+rhinitis+and+asthma+have+generally+good+outcome+and+little+effect+on+quality+of+life+-+a+20-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Allergic rhinitis and asthma have generally good outcome and little effect on quality of life - a 20-year follow-up.</a> Allergy. 66 (8), 1123-1125 (2011).</li>
<li>Fischer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+type+I+sensitization+to+alpha-gal+in+forest+service+employees+and+hunters%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Prevalence of type I sensitization to alpha-gal in forest service employees and hunters.</a> Allergy. 72 (10), 1540-1547 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multicentre+study+assessing+the+prevalence+of+sensitizations+in+patients+with+asthma+and%2For+rhinitis+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">A multicentre study assessing the prevalence of sensitizations in patients with asthma and/or rhinitis in China.</a> Allergy. 64 (7), 1083-1092 (2009).</li>
<li>Ahlstedt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+usefulness+of+specific+IgE+blood+tests+in+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">Understanding the usefulness of specific IgE blood tests in allergy.</a> Clinical & Experimental Allergy. 32 (1), 11-16 (2002).</li>
<li>Wood, R. A., Segall, N., Ahlstedt, S., Williams, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+IgE+antibody+laboratory+results%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Allergy+Asthma+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Accuracy of IgE antibody laboratory results.</a> Annals of Allergy Asthma & Immunology. 100 (2), 288-289 (2008).</li>
<li>Aberer, W., Kränke, B., Hager, A., Wick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+allergy+testing+needs+better+standardization--test+results+from+different+laboratories+lack+comparability+mostly+due+to+missing+effective+standards%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vitro allergy testing needs better standardization--test results from different laboratories lack comparability mostly due to missing effective standards.</a> International Archives of Allergy & Immunology. 108 (1), 82-88 (1995).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Similaires aux résultats de nombreuses autres études15,16,17, les résultats du système microfluidique issu des sérums de 293 patients allergiques ont montré que la maison acariens (y compris d. pteronyssinus, D. farinaeet b. tropicalis) sont les principaux allergènes inhalants conduisant à des maladies allergiques au sud de la Chine, alors que pour la nourriture, lait, arachide, crevette et crabe sont...

La prévalence des allergies a augmenté régulièrement au cours des dernières décennies et touche 20 % - 30 % de la population mondiale1. Identification des allergènes responsables a une importance dans la gestion des maladies. En Chine, étant donné que la peau in vivo enregistré prick tests ne sont pas disponibles dans le pays, la détermination in vitro de IgE sériques spécifiques est le plus important et un outil couramment utilisé pour les allergies de type I diagnostique2. Ceci est similaire aux pratiques dans le monde occidental, mais bien que ImmunoCAP système (système 1), un système de base d’immuno-fluorescence, est perçu comme l’étalon-or pour allergie in vitro diagnostic3, son utilisation en Chine est très limitée dû à son prix élevé de l’équipement et réactif. Par conséquent, un nouveau système de diagnostic d’allergie alternative avec un rapport coût-performances est absolument nécessaire.
Le système BioIC (système 2) est un système microfluidique cartouche basé sur le principe de la chimiluminescence pour des dosages d’IgE sériques spécifiques multiplexés. Avec une taille de 7 cm x 4 cm, la cartouche microfluidique est composée de trois couches de plastique moulé par injection. La partie supérieure est polycarbonate transparent de 3 mm d’épaisseur qui assure la bonne stabilité au cours du processus d’assemblage thermique. Avec la couche de 3 mm d’épaisseur inférieure, construite à partir d’un copolymère d’acrylonitrile, butadiène et styrène (ABS), il sandwichs le 0.5 mm d’épaisseur couche intermédiaire en caoutchouc de silicone. Couleur noire, la couche intermédiaire propose fond inférieur lors de la détection par chimiluminescence. Surface du gel de silice, une fine couche de membrane de nitrocellulose (membrane NC) est pulvérisée à la position correspondant à la zone de réaction, ce qui permet le repérage des différentes protéines allergènes. Le but de cette étude est d’évaluer les performances cliniques du système microfluidique permettant de déterminer l’allergène spécifique IgE dans le sérum multiplexé.

<table><tbody><tr><td>Analyseur Agnitio BioIC</td><td>Agnitio Science & Technologie (Taiwan, China)</td><td>BA-G2000</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Allergen specific-IgE Detection Kit</td><td>Agnitio Science & Technologie (Taïwan, Chine)</td><td>DR17A12</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Cartrideg Plaque</td><td>de placement Agnitio Science & Technologie (Taiwan, Chine)</td> <td>T20SET</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Distributeur de réactifs</td><td>Agnitio Science & Technologie (Taiwan, Chine)</td> <td>DS-1</td><td></td></tr><tr><td>Image bidimensionnelle code-barres</td><td>Agnitio Science & Technologie (Taiwan, Chine)</td><td>NLS-HR200</td><td></td></tr><tr><td>Software Package, LabIT</td><td>Agnitio Science & Technologie (Taiwan, Chine)</td><td>Version 2.4.12</td><td></td></tr><tr><td>VORTEX-5 Vortex Mixer</td><td>Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd.</td><td>VORTEX-5</td><td></td></tr></tbody></table>

application des biopuces microfluidiques technologie pour détecter sérum allergène spécifique immunoglobuline e (sige)

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE)

Maladie allergique est fréquente chez les adultes et les enfants. Identification des allergènes causatifs est importante dans la prévention et la gestion de la maladie. Toutefois, un système de mesure spécifique de l’immunoglobuline E (IgE) avec un rapport coût-performances fait défaut en Chine continentale, en particulier dans les hôpitaux de soins de santé primaires. Cet article décrit les principe et le fonctionnement des procédures d’utiliser un système de chimiluminescence axée sur la cartouche microfluidique pour détecter l’allergène spécifique IgE dans le sérum. Les résultats ont été comparés avec ceux d’ImmunoCAP (système 1), la norme de l’industrie, et la reproductibilité du système pour détecter les patients sensibilisés aux allergènes courants est évaluée. Les résultats ont montré que, en comparaison avec ImmunoCAP (système 1), le système BioIC (système 2) a bonne précision et sensibilité dans la détection des IgE sériques spécifiques contre différents allergènes respiratoires et alimentaires, mais avec un coût nettement inférieur. Il peut servir comme une bonne alternative au système 1 dans les hôpitaux de soins de santé primaires en Chine continentale qui ont la plus faible financièrement abordables.

Taux positifs pour des allergènes communs 19 Les résultats sur 293 sérums sont indiquées à la Figure 3. Parmi tous les allergènes inhalants, d. farinae avait le plus haut taux de positivité (80,89 %, 273/293), suivie par D. Pteronyssinus (78.84 %, 231/293). Parmi les allergènes alimentaires, crabe a le plus haut taux de positivité (20,48 %, 60/293), suivie de 13,65 % (40/293) pour la crevette. Le taux global posi...

Cet article présente un protocole pour la détection des immunoglobulines sériques spécifiques E avec un système de chimiluminescence axée sur la cartouche microfluidique et l’évaluation de son utilité dans le diagnostic de l’allergie.

Application des biopuces microfluidiques technologie pour détecter sérum allergène spécifique immunoglobuline E (sIgE)

Allergic disease is common in both adults and children. Identification of the causative allergens is significant in disease management and prevention. ...

Le système de technologie microfluidique de biopuce est une section basée sur la cartouche microfluidique qui emploie le principe de chemiluminescence pour l’assage du specif IGE de sérum. Par rapport à d’autres méthodes de détection, les systèmes bioIC ont l’avantage d’être peu coûteux et nécessitent moins de sérum pour détecter le sérum IGE. Les implications de cette technique tend vers le diagnostic des maladies allergiques telles que la rhinite et l’asthme parce que beaucoup de ces patients sont sensibilisés aux allergènes détectables communs.Bien que cette méthode puisse fournir un aperçu des maladies des allergies respiratoires, elle peut également être appliquée à d’autres situations, telles que les allergies alimentaires et cutanées. Comme cette technique est plus facile à utiliser, et a une méthode abaissée pour la formation des opérateurs, les personnes nouvelles dans le système peuvent apprendre à l’utiliser rapidement. La démonstration vive de cette matière est critique car le détermine si le test est réussi et exige le fonctionnement manuel habile.Pour tester des échantillons de sérum pour les anticorps E d’immunoglobuline sérique aux allergènes entiers, sélectionnez au hasard trois échantillons avec au moins 900 microlitres de sérum et prenez la puce du kit et numérotez-la. Ensuite, allumez l’ordinateur et la puissance de l’analyseur. Démarrez le programme informatique de laboratoire sur l’ordinateur.Si la fenêtre d’avertissement du cadre sombre apparaît, cliquez sur OK pour exécuter un test de fuite, puis cliquez sur le logo central pour entrer dans l’interface de fonctionnement. Vérifiez la température de réaction et la température couplée de charge ou de CCD, la température de réaction devrait augmenter à 37 plus ou moins un degré celsius dans environ dix minutes et la température de CCD devrait tomber à moins 15 plus ou moins un degré celsius. Lorsque la température du CCD est tombée à moins 15 plus ou moins un degré Celsius, confirmez qu’il n’y a plus d’autres éléments à l’intérieur de l’instrument et fermez la porte.Cliquez ensuite sur outils, test système, test de fuite. Lorsque le test est terminé, la fenêtre de rapport apparaît. Ensuite, chargez 620 microlitres de tampon de lavage, 120 microlitres de tampon de blocage, 60 microlitres de conjugués A et B, 60 microlitres de substrats A et B, et 100 microlitres de chaque échantillon de sérum dans les réservoirs de réaccélét correspondants sur la cartouche microfluidique.Après avoir cliqué sur l’id de la cartouche, utilisez le scanner de code à barres pour scanner le numéro de série de la cartouche et entrez l’exemple ID.Then placez la cartouche dans l’analyseur, fermez la porte, cliquez sur l’analyseur et courez pour commencer l’analyse. À la fin de l’analyse, exportez les résultats dans un logiciel statistique approprié et retirez la cartouche de l’analyseur. Essuyez légèrement le fer de chauffage interne et l’électroaimant de l’analyseur avec 75 pour cent d’alcool et fermez la fenêtre informatique du laboratoire.La fenêtre de surveillance de la température apparaîtra et se fermera automatiquement lorsque le CCD se réchauffera jusqu’au mode de protection de cinq degrés Celsius, à partir duquel il est sécuritaire d’éteindre l’analyseur et l’ordinateur. Le système microfluidique produit des résultats reproductibles, comme en témoignent ces données sur les squames de chat, les squames de chien et les cafards après neuf séries d’essais. Comme nous l’avons observé, toutes les données se trouvent dans la fourchette de deux écarts types, ce qui est compatible avec l’erreur clinique maximale permise.Comme prévu à partir des taux de positivité pour les allergènes, tous les résultats de l’évaluation pour les allergènes inhalants sont supérieurs aux allergènes alimentaires. Étant donné que la zone sous les valeurs de la courbe montre une fourchette de 0,613 à 0,984, et que la zone sous les valeurs courbes des trois allergènes inhalants est supérieure à 0,950, on peut conclure que le système deux a une précision élevée par rapport au système un. L’analyse de cohérence pour les deux systèmes révèle que les valeurs kappa pour les trois inhalants sont toutes supérieures aux valeurs kappa pour les allergènes alimentaires qui, en général, tombent en dessous de 0,4.Dans ces parcelles de dispersion construites avec le système deux résultats le long de l’axe x et le système on résulte le long de l’axe y, la distribution de la concentration d’immunoglobuline E sérum des deux systèmes pour six allergènes différents peuvent être observés. Avant de commencer la détection, vérifiez toujours la réaction et le temps ccd car ils sont liés à l’exactitude du test. Après cette procédure, d’autres méthodes comme le diagnostic résolu de composant peuvent être exécutées pour répondre aux questions additions au sujet de la normalisation croisée et de la co-sensibilisation d’allergène.La technologie des puces microfluidiques a été appliquée avec succès dans le domaine du diagnostic des allergies pour résoudre des problèmes tels que le sérum inadéquat, et le coût médical élevé Comme travailler avec le sérum humain, les symptômes peuvent être déterminants dangereux. Le port de l’équipement de protection personnelle approprié et d’autres précautions doivent toujours être pris lors de l’exécution de cette procédure.

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La vidéo présente un test cellulaire pour détecter l’immunoglobuline G anti-aquaporine-4 à l’aide d’une biopuce contenant des cellules non transfectées et des cellules transfectées exprimant l’aquaporine-4. Cette méthode a des applications dans le diagnostic des troubles du spectre de la neuromyélite optique, confirmées par une forte fluorescence verte sur la biopuce.

Un test pour détecter l’immunoglobuline G anti-aquaporine-4 sérique

Cette vidéo présente la détection par électrochimiluminescence des auto-anticorps des îlots dans le sérum humain. Les anticorps présents dans le sérum font le lien entre l’antigène conjugué au ruthénium et l’antigène de capture biotinylé, formant des complexes qui sont détectés par des mesures d’électrochimiluminescence.

Détection d’auto-anticorps d’îlots humains à l’aide d’un test d’électrochimiluminescence

Cette vidéo présente un protocole de détection de l’immunoglobuline E spécifique du sérum à l’aide d’un système de chimiluminescence à base de cartouche microfluidique. Les IgE sériques interagissent avec des allergènes distincts immobilisés dans la zone réactionnelle de la cartouche, qui sont ensuite détectés avec des anticorps anti-IgE conjugués à la peroxydase et un substrat chimiluminescent, permettant la détection simultanée de plusieurs IgE spécifiques aux allergènes.

Système de détection à cartouche microfluidique pour l’immunoglobuline E spécifique d’un allergène

Le travail proposé évalue le potentiel de diagnostic de l'imagerie de résonance de plasmon de surface directe et amplifié (SPRi) les essais, en particulier pour la détection de l'hormone de croissance humaine recombinante dans le sérum humain à pointes, en comparant SPRi résulte directement disponible dans le commerce dosage immuno-enzymatique (ELISA) trousse.

Analyse comparative de l&#39;hormone de croissance dans le sérum en utilisant SPRi, Nano-SPRi et dosages ELISA

Nous décrivons ici une méthode pour générer des microréseaux d’antigènes personnalisables qui peuvent être utilisés pour la détection simultanée d’auto-anticorps IgG et IgM sériques chez l’homme et la souris. Ces réseaux permettent une détection quantitative et à haut débit d’anticorps contre tout antigène ou épitope d’intérêt.

Génération de deux couleurs Antigène Microarrays pour la détection simultanée des IgG et IgM autoanticorps

Ce travail décrit un protocole qui utilise une approche résolue par les composants pour étudier la sensibilisation aux allergènes de pollen de gazon dans une cohorte de patients du sud de la Chine avec une rhinite allergique et / ou de l'asthme.

Une approche de diagnostic résolue par un composant pour une étude sur les allergènes au pollen dans les ressortissants chinois avec la rhinite allergique et / ou l&#39;asthme

Ici, nous avons présenté les méthodes pour détecter des autoanticorps d’îlots pancréatiques humains à l’aide de dosages par électrochimiluminescence (ECL). Le protocole utilisé pour prédire le diabète de type 1, peut être étendu à pour détecter des auto-anticorps pour d’autres maladies auto-immunes.

Par électrochimiluminescence dosages pour îlots pancréatiques humains autoanticorps

Ce travail montre le potentiel de la technologie de baies (PGA) de glycan imprimées pour l’analyse des anticorps anti-glucides chez de petits animaux en circulation.

Tableau de Glycan imprimé : Une Technique sensible pour l’analyse du répertoire des anticorps anti-glucides chez de petits animaux en circulation

Essai sur les cellules est une méthode largement utilisée pour détecter les immunoglobulines de sérum anti-aquaporin-4 G. Cette méthode pourrait être appliquée au diagnostic clinique et les recherches scientifiques de neuromyélite optique spectre troubles.

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Nous présentons ici le test de libération du médiateur, utilisant une lignée cellulaire de leucémie basophile de rat transfectée avec le récepteur IgE humain, pour simuler la dégranulation des cellules effectrices généralement observées dans les réactions allergiques de type 1. Cette méthode étudie l’activité biologique des allergènes d’une manière très sensible, reproductible et personnalisable.

Test humanisé de libération du médiateur comme lecture de la puissance des allergènes

Conformément au besoin urgent de dépistage du diabète de type 1, de la maladie cœliaque et de la maladie à coronavirus 2019, nous avons développé un test d’électrochimiluminescence 6-Plex à haut débit pour détecter simultanément les quatre autoanticorps des îlots, les autoanticorps de la transglutaminase tissulaire et les anticorps dirigés contre le domaine de liaison aux récepteurs du coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère.

Un dépistage multiplexé à haut débit pour le diabète de type 1, les maladies cœliaques et la COVID-19

Découvrez la détection d'IgE spécifiques sériques par biopuce microfluidique pour le diagnostic allergique. Cette méthode par chimiluminescence réduit les coûts et le volume de sérum nécessaire.

Application des biopuces microfluidiques technologie pour détecter sérum allergène spécifique immunoglobuline E (sIgE)

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