Évaluation de la disponibilité des minéraux dans les aliments pour poissons à l’aide de méthodes complémentaires démontrées par l’exemple du zinc dans le saumon de l’Atlantique

Nous avons étudié la disponibilité de la solubilité de micro-métaux comme le zinc sélénium avec différentes formes ou sources chimiques, comme nous l’appelons, dans le contexte de l’évolution de la composition des aliments. Dans une suite de radionucléides, peser environ 0,2 gramme d’échantillons d’aliments pour saumons de l’Atlantique moulus et les mélanger avec un radiotraceur de zinc d’activité spécifique connue dans un tube d’échantillon de volume de cinq millilitres. Préparez six autres aliquotes du tampon et ajoutez l’un des acides aminés montrés ici à chacun pour atteindre une concentration molaire finale de cinq millimolaires.

Ajouter un tampon luminal intestinal d’eau douce pour alimenter l’échantillon. Ensuite, ajoutez le tampon luminal intestinal d’eau douce aux aliquotes tampons contenant les acides aminés. Fermez les tubes et faites-les tourner sur un spinner rotatif à 25 tr/min pendant 30 minutes.

Ensuite, centrifuger à 1, 157 x g pendant 10 minutes, pour séparer les fractions solubles et non solubles. Utilisez un téléseau gamma pour mesurer le nombre par minute du radiotraceur de zinc dans les fractions solubles et non solubles. Lavez deux fois la lignée cellulaire intestinale dérivée de la truite arc-en-ciel avec un millilitre de solution d’EDTA et siphonnez la solution après chaque lavage à l’aide d’une pipette.

Traiter les cellules lavées avec une solution de trypsine à 0,25%. Faites tourner doucement la fiole à des angles aigus pendant deux minutes. Ajoutez ensuite 10 millilitres de milieu L-15 contenant 5% de FBS pour neutraliser la trypsine.

À l’aide d’une pipette stérile, décanter la suspension cellulaire résultante dans un tube de centrifugeuse à fond conique. Centrifuger à 130 x G pendant trois minutes. Ensuite, à l’aide d’un hémocytomètre, déterminez la densité des cellules récoltées par comptage manuel.

Ensemencez les cellules sur 24 plaques de puits à une densité cellulaire de 50 000 cellules par millilitre, par puits, et incubez les plaques à 19 degrés Celsius sous une atmosphère normale pendant 48 heures avant les expériences. Après avoir nourri les poissons pendant 11 jours et les avoir euthanasiés, prélever un échantillon regroupé des excréments du poisson en les dépouillant de la nageoire ventrale à l’anus et le placer sur une assiette. Utilisez une spatule pour transférer les matières fécales de la plaque dans un tube conique de 50 millilitres.

Stockez immédiatement les échantillons à 20 degrés Celsius. Dans cette étude, la disponibilité minérale des aliments pour poissons est évaluée à l’aide d’un certain nombre de méthodes complémentaires. L’analyse représentative de l’alimentation du saumon de l’Atlantique par la méthode de spectrométrie de masse à plasma à couplage inductif par chromatographie d’exclusion de taille fournit des données sur les espèces chimiques de zinc présentes dans la fraction soluble.

Cinq pics contenant du zinc peuvent être vus dans cette fraction, chacun avec un poids moléculaire différent. Les espèces chimiques de zinc présentes dans la fraction soluble peuvent avoir différentes sources, car l’aliment utilisé contient à la fois des ingrédients marins et végétaux, et est complété. La gamme de poids moléculaire de ces espèces suggère que ces composés pourraient être des métalloprotéines.

Alors que la solubilité du zinc 65 supplémenté augmente la présence de tous les acides aminés testés, une solubilité plus élevée est trouvée avec l’histidine et la lysine. L’absorption apicale de zinc dans les cellules GC d’Arteca est significativement influencée par la présence de L-Met ou de DL-Met à deux concentrations millimolaires. De plus, l’impact de la méthionine sur l’absorption du zinc est affecté négativement par la présence de BCH.

Le principal avantage de ce protocole est que nous avons essayé de combiner différentes approches dans les études visuelles, analytiques et invivo, pour nous comparer et nous compléter mutuellement lorsqu’il s’agit d’étudier la disponibilité des minéraux.