Phase ^{solide 11}C-Méthylation, purification et formulation pour la production de traceurs de PET

Le carbone-11 est l’un des radioisotopes les plus utilisés dans la tomographie par émission de positons en raison de son abondance en molécules organiques et d’une courte demi-vie de 20 minutes. Dans cette vidéo, nous montrons une technique efficace de radioétiquement carbone-11 à l’aide de cartouches d’extraction en phase solide. Par rapport aux méthodes conventionnelles, les techniques basées sur les cartouches évitent l’utilisation de HPLC, raccourcissent le temps de radiosynthèse, améliorent la fiabilité de la synthèse, simplifient le processus d’automatisation et facilitent le respect des bonnes pratiques de fabrication, le GMP.

La technique à base de cartouches est démontrée ici sur la radiosynthèse de C11 PiB, un traceur pet utilisé pour l’imagerie in vivo de plaques amyloïdes dans le cerveau de patients atteints de la maladie d’Alzheimer. Récemment, nous avons appliqué la technique trois-en-un à la radiosynthèse de C11 ABP688, un traceur PET pour l’imagerie des récepteurs de glutamate metabotrope de type cinq, ainsi que d’autres traceurs étiquetés carbone-11. Combinez 450 millilitres de solution molaire de 0,2 molaire d’acide acétique avec 50 millilitres de solution molaire d’acétate de sodium pour préparer le tampon d’acétate au pH 3.7 comme tampon.

Vérifiez le pH du tampon à l’intérieur de bandes de pH ou d’un compteur de pH. Ensuite, combinez 12,5 millilitres d’éthanol absolu avec 87,5 millilitres de tampon d’acétate dans une bouteille de 100 millilitres pour faire une solution d’éthanol 12,5 % aqueuse comme solution de lavage. Combinez 15 millilitres d’éthanol absolu avec 85 millilitres de tampon d’acétate dans une bouteille de 100 millilitres pour faire une solution d’éthanol 15% aqueuse comme lavage deux.

Combinez cinq millilitres d’éthanol absolu avec cinq millilitres de tampon d’acétate pour fabriquer une solution d’éthanol 50 % aqueuse en tant qu’élitente finale, et dessinez 2,5 millilitres de cette solution dans une seringue de 10 millilitres. Pour conditionner la cartouche tC18, de l’extrémité féminine, utilisez une seringue pour passer 10 millilitres d’eau suivie de cinq millilitres d’acétone à travers la cartouche. Sécher la cartouche avec un jet d’azote à 50 millilitres par minute pendant une minute.

Dans un tube d’Eppendorf, dissoudre deux milligrammes du précurseur 6-OH-BTA-0 en un millilitre d’acétone anhydre. Tenant une seringue en verre de précision luer-tip, 250 microlitres vers le bas, retirez 100 microlitres de la solution précurseur, puis 50 microlitres de coussin d’air. Retirez l’aiguille et appuyez sur la seringue pour vous assurer que le coussin d’air est au-dessus de la solution dans une seringue.

Appliquez la solution précurseur à la cartouche tC18 de l’extrémité femelle en poussant lentement le piston tout le chemin vers le bas. Ne poussez pas l’air plus loin. Sécurisez et assemblez le collecteur jetable standard à cinq ports sur le module de synthèse.

Le port 1 a deux positions. Connectez l’entrée horizontale au distributeur automatisé muni d’une seringue de 20 millilitres. Connectez l’entrée verticale à la bouteille avec laver un.

Connectez la sortie du module qui produit du triflate méthylique C11 au port deux du collecteur. Installez la cartouche tC18 chargée de précurseurs 6-OH-BTA-0 entre les ports trois et quatre. Le port 5 a deux positions.

Connectez la prise horizontale à la bouteille de déchets et la sortie verticale au flacon stérile pour la collecte des traceurs via le filtre stérile. Dans la cellule chaude blindée au plomb, utilisez une ligne de téflon pour livrer du triflate méthyle C11 dans le collecteur à travers le port deux, et passez-le à travers la cartouche tC18 chargée à 20 millilitres par débit de sortie minute. Le module de triflate méthylique C11 régule le flux via les ports trois et quatre et dans la bouteille de déchets.

Une fois que toute la radioactivité a été transférée et piégée dans la cartouche tC18 sous la surveillance du détecteur de radioactivité, arrêtez le flux de gaz en fermant le port 2. Laissez reposer la cartouche pendant deux minutes pour compléter la réaction. Ensuite, par le port 1, retirez 19 millilitres de lavage d’une solution de la bouteille de 100 millilitres dans la seringue du distributeur à 100 millilitres par minute.

Distribuez 18,5 millilitres de lavage d’une solution du distributeur à travers la cartouche tC18 via les ports trois et quatre et dans la bouteille de déchets à 50 millilitres par minute. Assurez-vous de l’absence de bulles d’air dans le collecteur, car elles pourraient diminuer l’efficacité de séparation. Répétez le retrait et la distribution quatre fois avec 18,5 millilitres de lavage une solution à chaque fois et un volume total de 92,5 millilitres passant par tC18.

Changez la ligne d’entrée sur le port un de laver un pour laver deux. Répétez le retrait et la distribution trois fois avec 18,5 millilitres de lavage deux solutions à chaque fois et un volume total de 55,5 millilitres passant par tC18. Basculer la vanne 5 vers le flacon final.

Déconnectez la ligne du distributeur et connectez-la à la seringue de 10 millilitres contenant 2,5 millilitres de la solution élitente finale et 7,5 millilitres d’air. En maintenant la seringue vers le bas, poussez manuellement la solution élitente finale suivie de l’air à travers la cartouche tC18 via les ports trois et quatre et dans le flacon stérile pour la collecte des traceurs via le filtre stérile. Passez la seringue à celle contenant 10 millilitres du tampon stérile de phosphate, et poussez tout le volume à travers la cartouche tC18 dans le flacon stérile.

Déconnecter la seringue et rincer la ligne avec 10 millilitres d’air à l’aide de la même seringue. À l’aide d’une seringue d’un millilitre, retirer des échantillons pour les procédures de contrôle de la qualité avant la fin de la grossesse, l’essai de l’endotoxine bactérienne et le test de stérilité. Pour effectuer des procédures de contrôle de la qualité avant la fin de l’année, déterminez d’abord l’identité radiochimique, la pureté radiochimique, la pureté chimique et l’activité molaire du traceur par un système HPLC analytique équipé de détecteurs de radioactivité UV et d’une colonne de phase inversée.

Déterminez les temps de rétention de 6-OH-BTA-0 et 6-OH-BTA-1, et calibrez l’instrument pour quantifier le contenu de chaque composé. Déterminer la teneur résiduelle en solvants par le système de chromatographie à gaz analytique équipé d’une colonne capillaire. Déterminez les temps de rétention de l’acétone et de l’éthanol et calibrez l’instrument pour quantifier le contenu de chaque solvant.

Cette étude a exécuté la radiosynthèse de C11 PiB par C11-méthylation du précurseur 6-OH-BTA-0 avec le triflate méthylique de C11. Hplc analytique de contrôle de qualité de C11 PiB montre la pureté radiochimique était 98%Les temps de conservation de 6-OH-BTA-0 précurseur et 6-OH-BTA-1 crête traceur sur le chromatogramme UV étaient 3,6 et 5,9 minutes, respectivement. L’analyse de la trace UV montre une concentration résiduelle de précurseurs inférieure à la limite acceptable de 1,3 microgramme en l’absence d’autres impuretés non radioactives.

Ceci indique que la pureté radiochimique et chimique du traceur est acceptable pour des études cliniques de PET. L’augmentation de la quantité de précurseur 6-OH-BTA-0 de 0,1 milligramme à 0,3 milligramme a amélioré le rendement radiochimique de 18,1 % à 32,1 % au détriment d’une quantité légèrement plus élevée du précurseur dans le produit final. Cette technique devrait s’appliquer à de nombreux systèmes différents avec une différence appropriée de polarité entre le précurseur et le produit radioétique.

Toutes les manipulations impliquant des isotopes radioactifs doivent être effectuées dans une cellule chaude protégée par le plomb par du personnel ayant une formation adéquate pour manipuler les matières radioactives.