Quantification absolue du métabolisme de synthèse des protéines sans cellules par spectrométrie de chromatographie liquide à phase inversée

La synthèse des protéines sans cellules est une technologie émergente dans les systèmes et la biologie synthétique pour la production in vitro de protéines. Les systèmes de synthèse des protéines sans cellules n’ont pas de paroi cellulaire, nous avons donc un accès direct aux métabolites. Dans ce protocole, nous quantifions les mesures absolues de 40 métabolites impliqués dans le métabolisme central du carbone et de l’énergie, ce qui nous permet de caractériser le métabolisme sans cellules.

Le protocole repose sur la métastasation des composés avec de l’aniline, ce qui permet une meilleure séparation et une résolution de spectrométrie de masse plus élevée. En outre, nous utilisons des normes internes avec une aniline isotopique que nous étiqueterons, pour la quantification absolue des métabolites. Les métabolites marqués coelute, qui élimine les effets de la suppression du fer.