Name: Évaluation de la toxicité par inhalation aigue des particules aéroportées en exposant les cellules pulmonaires humaines cultivées à l’interface air-liquide (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Découvrez un système d'exposition in vitro utilisant des cellules pulmonaires humaines à l'interface air-liquide pour évaluer la cytotoxicité aiguë des particules aéroportées. Cette méthode réduit significativement le recours aux expérimentations animales.

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Ce travail a été soutenu par le Ministère fédéral allemand de l’éducation et de la recherche (Bundesministerium f’r Bildung und Forschung, BMBF, Allemagne (Grant 031A581, sous-projet A-D)) et par la Fondation allemande de la recherche (Deutsche Forschungsgesellschaft, DFG, Groupe de formation à la recherche GRK 2338).

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Les auteurs AT, KG, AB, SH, HM, TG, HT et DS n’ont rien à divulguer. La société Cultex Technology GmbH (anciennement Cultex Laboratories GmbH) produit des instruments (par exemple, CULTEX RFS, CULTEX DG) utilisés dans cet article. NM a été employé de Cultex Laboratories GmbH au cours de cette étude. OK est un employé de Cultex Technology GmbH (anciennement Cultex Laboratories GmbH). Le brevet PCT/EP2009/007054 pour l’appareil est retenu par le fondateur de la Cultex Technology GmbH Prof. Dr. Ulrich Mohr (anciennement Cultex Laboratories GmbH).

De nombreux modèles d’essais de toxicité par inhalation non animale ont été développés ces dernières années afin d’obtenir des informations sur le risque aigu d’inhalation de particules inhalables et de réduire et de remplacer les expériences animales selon le principe 3R25.
En termes de modèles de culture cellulaire, l’exposition des cellules peut se faire dans des conditions immergées ou à l’ALI. L’exposition des cellules dans des conditions immergées peut affecter le...

L’inhalation de particules toxiques en suspension dans l’air est un problème de santé publique, entraînant une multitude de risques pour la santé dans le monde entier et plusieurs millions de décès par an1,2. Le changement climatique, le développement industriel en cours et la demande croissante d’énergie, d’agriculture et de produits de consommation ont contribué à l’augmentation des maladies pulmonaires au cours des dernières années3,4,5,6. La connaissance et l’évaluation des substances inhalables concernant leur toxicité par inhalation grave constituent la base de l’évaluation des risques et de la gestion des risques, mais cette information fait encore défaut pour un large éventail de ces substances7,8. Depuis 2006, la législation de l’UE sur les produits chimiques REACH (Enregistrement, Évaluation, Autorisation et Restriction des produits chimiques) exige que les produits déjà existants et nouvellement introduits subissent une caractérisation toxicologique, y compris la voie d’inhalation, avant d’être mis sur le marché. Par conséquent, REACH met l’accent sur les méthodes alternatives et sans animaux, la mise en œuvre du principe « 3R » (Remplacement, raffinement et réduction des expériences animales) et l’utilisation de modèles in vitro appropriés9. Au cours des dernières années, de nombreux modèles d’essais de toxicité par inhalation non animale différents et adéquats (p. ex., cultures cellulaires in vitro, modèles de poumons sur puce, tranches de poumoncoupées de précision (PCLS)) ont été développés afin d’évaluer la toxicité par inhalation aigue des particules en suspension dans l’air5,7,10,11. En ce qui concerne les modèles de culture cellulaire in vitro, les cellules cultivées peuvent être exposées dans des conditions immergées ou à l’ALI (Figure 1). Cependant, la validité des études d’exposition submergée est limitée en ce qui concerne l’évaluation de la toxicité des composés en suspension dans l’air, en particulier les particules. Les techniques d’exposition submergée ne correspondent pas à la situation in vivo humaine; le milieu de culture cellulaire couvrant les cellules peut affecter les propriétés physico-chimiques et donc, les propriétés toxiques d’une substance d’essai12,13. Les modèles d’inhalation in vitro ALI permettent l’exposition directe des cellules aux substances d’essai sans interférence du milieu de culture cellulaire avec des particules d’essai, imitant ainsi l’exposition humaine avec une similitude physiologique et biologique plus élevée que les expositions submergées12,14.
Pour les processus réglementaires tels que REACH, cependant, seuls les modèles animaux sont disponibles dans le domaine de la toxicologie par inhalation aigue, car aucune autre méthode in vitro n’a été suffisamment validée et officiellement acceptée jusqu’à présent14. À cette fin, les modèles d’essai doivent être validés conformément aux exigences du Laboratoire de référence de l’Union européenne pour les principes d’alternatives à l’expérimentation animale (EURL-ECVAM) sur la validité des tests15.
Une ancienne étude de pré-validation et une étude de validation récemment terminée ont démontré avec succès la zone d’application du système d’exposition À la RFS DELET et sa transférabilité, sa stabilité et sa reproductibilité13. Ce système d’exposition est un système d’exposition cellulaire in vitro qui permet une exposition homogène des cellules aux gaz, aux particules ou aux atmosphères complexes (p. ex. fumée de cigarette) à l’ALI en raison de son concept de distribution d’aérosols radiaux et de la conduction de l’aérosol d’essai dans un flux continu sur les cellules16. Le module de base de ce système d’écoulement radial se compose de l’adaptateur d’entrée, du module de guidage d’aérosol avec une distribution d’aérosols radiaux, du module d’échantillonnage et de prise, et d’un module de verrouillage avec une roue à main (Figure 2). Les particules générées atteignent les cellules par l’intermédiaire de l’adaptateur d’entrée et du module de guidage des aérosols et sont déposées sur les inserts de culture cellulaire, qui sont situés dans les trois chambres d’exposition radialement disposées du module d’échantillonnage. Le module de guidage des aérosols ainsi que le module d’échantillonnage peuvent être chauffés en se connectant à un bain d’eau externe17.
Dans le cadre des deux études, les cellules A549 ont été utilisées pour toutes les expériences d’exposition. La lignée cellulaire A549 est une lignée cellulaire épithéliale immortalisée par l’homme qui est très bien caractérisée et a été utilisée comme modèle in vitro pour les cellules épithéliales alvéoliennes de type II dans de nombreuses études toxicologiques. Les cellules sont caractérisées par des corps lamellar, la production de surfactant et un certain nombre de facteurs inflammation-pertinents18. Ils montrent également des propriétés des cellules épithéliales bronchiques en raison de leur production de mucus19. En outre, ils peuvent être cultivés à l’ALI. Bien que cette lignée cellulaire est déficiente dans la construction de contacts cellule-cellule, la culture de ces cellules est beaucoup plus pratique, moins coûteux et les résultats dérivés de celui-ci sont indépendants des donneurs par rapport aux cellules primaires20.
Les cellules A549 ont été enseventées dans des inserts de culture cellulaire de 6 puits (membrane DE PET, 4,67 cm2, taille de pore 0,4 mm) avec une densité de 3,0 x 105 cellules par insert et cultivées pendant 24 h dans des conditions immergées. Les cellules ont ensuite été exposées dans trois laboratoires indépendants à l’air pur et à trois doses d’exposition différentes (25, 50 et 100 'g/cm2) de 20 substances d’essai à l’ALI. La dose d’exposition est corrélée au temps de dépôt, ce qui entraîne un taux de particules constants de 25 g/cm2,50 g/cm2 et 100 g/cm2 sur les cellules après 15, 30 ou 60 min, respectivement. Les particules déposées, cependant, n’ont pas été lavées après dépôt, mais sont restées sur les cellules pendant 24 h. Les temps de dépôt des particules étaient donc de 15, 30 et 60 min, mais l’exposition des cellules a duré 24 h au total. Le taux de dépôt des substances d’essai a été déterminé dans des expériences préliminaires selon les méthodes précédentes17.
La viabilité cellulaire comme indicateur de toxicité a été évaluée 24 h après dépôt de particules à l’aide d’un exemple de viabilité cellulaire. Un accent particulier a été mis sur la qualité des contrôles de l’air pur, l’optimisation et le raffinement du protocole d’exposition, la reproductibilité intra- et inter-laboratoire et l’établissement d’un modèle de prévision (PM). Substances qui ont entraîné une diminution de la viabilité cellulaire en dessous de 50 % (PM 50 %) ou 75% (PM 75%) à l’une des trois doses d’exposition ont été considérées comme exerçant un risque aigu d’inhalation. Les résultats ont ensuite été comparés aux données in vivo existantes (basées sur au moins une étude fiable selon les lignes directrices des tests de l’OCDE (TG) 403 ou TG 43621,22), conduisant à une concordance globale de 85%, avec une spécificité de 83% et une sensibilité de 88%23.
Outre la mesure de la viabilité cellulaire, d’autres critères d’évaluation tels que la libération de cytokine, l’examen du lysate cellulaire ou l’intégrité de la membrane par l’analyse DeLH peuvent être évalués, mais n’ont pas été requis pour l’étude de validation. Ainsi, le système d’exposition (p. ex., LE RFS DE L’ESSAI DE CULTEX) a été prouvé comme un système de dépistage prédictif pour l’évaluation qualitative de la toxicité par inhalation aigue des particules testées dans l’air, ce qui représente une méthode alternative prometteuse à l’expérimentation animale. Le protocole suivant est recommandé pour les expériences d’exposition aux particules en suspension dans l’air à l’aide de ce système d’exposition.

<table><tbody><tr><td>Cells</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A549</td><td>ATCC</td><td>CCL-185</td><td></td></tr><tr><td>Milieu de culture cellulaire et fournitures</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Biochrom, Berlin, Allemagne</td><td>FG 0415</td><td>utilisé comme milieu de croissance</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco-Invitrogen, Darmstadt, Allemagne</td><td>22320</td><td>utilisé comme milieu d’exposition</td></tr><tr><td>FBS superior</td><td>Biochrom, Berlin, Allemagne</td><td>S 0615</td><td></td></tr><tr><td>Gentamycine (10mg/mL)</td><td>Biochrom, Berlin, Allemagne</td><td>A 2710</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 1M</td><td>Th. Geyer, Renningen, Allemagne</td><td>L 0180</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Biochrom, Berlin, Allemagne</td><td>L 1825</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine/EDTA (0,05 %/0,02 %)</td><td>Biochrom, Berlin, Allemagne</td><td>L 2143</td><td></td></tr><tr><td>Cell culture material</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CASY Cups</td><td>Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany</td><td>REF 05651794</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de culture cellulaire</td><td>Corning, Wiesbaden, Allemagne</td><td>3516</td><td>Plaques à 6 puits</td></tr><tr><td>Corning Inserts de culture cellulaire Transwell</td><td>Corning, Wiesbaden, Allemagne</td><td>3450</td><td>Inserts de 24 mm ; 6-&shy ; plaques de puits ; 0,4 et micro ; m</td></tr><tr><td>Chemicals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CASYton</td><td>Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Allemagne</td><td>REF 05651808001</td><td></td></tr><tr><td>Air comprimé (DIN EN 12021)</td><td>Linde Gas Therapeutics GmbH, Oberschlei&szlig ; heim, Allemagne</td><td>2290152</td><td></td></tr><tr><td>WST-1</td><td>Abcam, Cambridge, Royaume-Uni</td><td>ab155902</td><td></td></tr><tr><td>Instruments + équipement</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CASY Cell Counter</td><td>Sch&auml ; rfe System GmbH, Reutlingen, Allemagne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Thermostat à circulation</td><td>LAUDA, Lauda-K&ouml ; nigshofen, Allemagne</td><td>Ecoline RE 100</td><td></td></tr><tr><td>CULTEX HyP - Presse hydraulique</td><td>Cultex&reg ; Technology GmbH, Hanovre, Allemagne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Manchon d’insertion CULTEX</td><td>Cultex&reg ; Technology GmbH, Hanovre, Allemagne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CULTEX RFS - Système à flux radial de type 2 (module pour l’exposition aux particules)</td><td>Cultex&reg ; Technology GmbH, Hanovre, Allemagne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CULTEX RFS - Système à flux radial de type 2 (module pour l’exposition à l’air pur)</td><td>Cultex&reg ; Technology GmbH, Hanovre, Allemagne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Régulateur de débit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CULTEX 0-30 ml/min (IQ-Flow)</td><td>Bronkhorst Deutschland Nord GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Régulateur de débit 0-1,5 l/min (EL-Flow)</td><td>Bronkhorst Deutschland Nord GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtres (grands)</td><td>Munktell & Filtrak GmbH, Sachsen, Allemagne</td><td>LP-050</td><td>Munktell Filtre stérile ; Efficacité de rétention des particules > 99,999 %</td></tr><tr><td>Filtres (petits)</td><td>Parker Hannifin Corporation, Mayence, Allemagne</td><td>9933-05-DQ</td><td>Filtre jetable Balston</td></tr><tr><td>Pompe moyenne</td><td>Cole-Parmer GmbH, Wertheim, Allemagne</td><td>Ismatec IPC High Precision Multichannel Dispenser</td><td>pompe péristaltique numérique</td></tr><tr><td>Lecteur de microplaques Infinite M200 Pro</td><td>Tecan Deutschland GmbH, Crailsheim, Allemagne</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pompe Vakuum</td><td>KNF, Fribourg, Allemagne</td><td>N86 KT.18</td><td></td></tr><tr><td>V&ouml ; régulateur de débit massique gtlin 0,2-10 l/min</td><td>TrigasFI GmbH</td><td>V&ouml ; gtlin red-y détendeur compact, N° de type : GCR-C3SA-BA20</td><td></td></tr><tr><td>Bain-marie</td><td>LAUDA, Lauda-K&ouml ; nigshofen, Allemagne</td><td>Ecoline Staredition RE 104</td><td></td></tr></tbody></table>

Évaluation de la toxicité par inhalation aigue des particules aéroportées en exposant les cellules pulmonaires humaines cultivées à l’interface air-liquide

Assessment of the Acute Inhalation Toxicity of Airborne Particles by Exposing Cultivated Human Lung Cells at the Air-Liquid Interface

Ici, nous présentons un système modulaire d’exposition in vitro spécialement conçu qui permet l’exposition homogène des cellules pulmonaires humaines cultivées à l’ALI aux gaz, aux particules ou aux atmosphères complexes (par exemple, la fumée de cigarette), fournissant ainsi des aspects physiologiques réalistes l’exposition de la surface apaïque de la région alvéolienne humaine à l’air. Contrairement aux modèles d’exposition séquentielle avec guidage linéaire d’aérosol, la conception modulaire du système d’écoulement radial répond à toutes les exigences pour la génération et le transport continus de l’atmosphère d’essai aux cellules, une distribution homogène et le dépôt de particules et l’élimination continue de l’atmosphère. Cette méthode d’exposition est principalement conçue pour l’exposition des cellules aux particules en suspension dans l’air, mais peut être adaptée à l’exposition d’aérosols liquides et de gaz hautement toxiques et agressifs selon la méthode de production d’aérosols et le matériau des modules d’exposition. .
Dans le cadre d’une étude de validation récemment terminée, ce système d’exposition a été prouvé comme une méthode de dépistage transférable, reproductible et prédictive pour l’évaluation qualitative de la cytotoxicité pulmonaire aigue des particules en suspension dans l’air, potentiellement réduire ou remplacer les expériences animales qui fourniraient normalement cette évaluation toxicologique.

Le CULTEX RFS est un système d’exposition in vitro modulaire spécialement conçu qui permet l’exposition directe et homogène des cellules de l’ALI. Dans le cadre d’une ancienne étude de pré-validation, l’applicabilité générale de ce système d’exposition et sa transférabilité, sa stabilité et sa reproductibilité ont été démontrées avec succès. Dans le cadre d’un récent projet de recherche financé par le Ministère fédéral allemand de l’éducation et de la recherche, le système d’exposition a ...

Nous présentons un système robuste, transférable et prédictif d’exposition in vitro pour le criblage et la surveillance des particules aéroportées concernant leur cytotoxicité pulmonaire aigue en exposant les cellules pulmonaires humaines cultivées à l’interface air-liquide (ALI).

Here, we present a specially designed modular in vitro exposure system that enables the homogenous exposure of cultivated human lung cells at the ALI to ...

Le criblage des particules aéroportées concernant la cytotoxicité pulmonaire aiguë en exposant les cellules pulmonaires humaines cultivées à l’ALI utilisant ce système d’exposition in vitro peut aider à réduire des expériences animales. Le principal avantage de ce système d’exposition est le concept de distribution d’aérosols radiaux conduisant à une distribution homogène et à la position des particules sur les cellules. Avant d’ensemencer les cellules, ajouter 2,5 millilitres de milieu de croissance tempéré à chaque puits d’une plaque de six puits.Placez les inserts de culture cellulaire sans cellules soigneusement à l’intérieur des puits et ajoutez un millilitre de milieu de croissance à chaque insert de culture cellulaire. Incuber les plaques pendant 30 minutes à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone. Après la trypsinisation des cellules, diluer 100 microlitres de la suspension de la culture cellulaire dans une tasse remplie de 10 millilitres de solution isotonique.Inclinez la tasse lentement sans trembler. Sur un compteur cellulaire, déterminer le nombre de cellules viables par millilitre et la viabilité cellulaire en fonction des paramètres de mesure spécifiques des cellules A549. Après le tempérage de la plaque, aspirer le milieu dans les inserts de culture cellulaire et la graine d’un millilitre de cellules A549 avec une densité de trois fois 10 à la cinquième cellule par millilitre dans chaque insert de culture cellulaire.Répartir la suspension cellulaire par basculement doux et incuber pendant 24 heures. Réglez le temps de pressage via le contrôle du temps sur le côté avant de la presse. Ouvrez l’alimentation en air comprimé à la valve d’air comprimé.À l’aide du régulateur de pression sur le côté avant de la presse, réglez la pression de l’air comprimé à environ deux barres. Sortez le tiroir, appuyez sur le bouton Appuyez sur et lisez la pression pressante sur le commutateur de pression numérique. Remplissez le contenant de substance d’une petite quantité de la substance d’essai.Insérez le piston dans le récipient de substance et tournez-le légèrement d’avant en arrière pour répartir uniformément la poudre dans le récipient. Placez le récipient de substance, avec le piston, dans le tiroir et appuyez sur le bouton Appuyez sur. Ouvrez le tiroir et retirez le piston.Une étape cruciale est le pressage des substances d’essai qui doivent être spécifiquement comprimées à un gâteau en poudre dans le récipient de substance afin de permettre des expositions stables de particules. Retirez l’adaptateur d’entrée et le réflecteur de condensat du module de guidage des aérosols. Fermez les trois alésages d’alimentation en aérosol dans le module de guidage des aérosols avec des bouchons et les connexions d’alimentation moyenne au module d’échantillonnage avec des volets factices.Connectez les lignes de vide avec le connecteur à tube du module de guidage des aérosols. Utilisez la roue à main pour fermer le module et mesurer la valeur des contrôleurs de débit. Quelques minutes après la fermeture, les valeurs diminuent en dessous de cinq millilitres par minute.Démarrez le logiciel générateur d’aérosols. Si le grattoir de substance n’est pas dans la position la plus basse, appuyez sur le bouton Homing Mode. Placez le récipient de substance avec le matériel d’essai pressé à l’envers au-dessus du grattoir de substance.Assurez-vous que le verre du contenant de substance fait face à l’avant. Placez la plaque de verrouillage dans la fente au-dessus du récipient de substance et serrez la vis noire. Modifiez les valeurs d’alimentation et de rotation vers les paramètres souhaités.Utilisez les flèches vers le bas pour pousser la glissière avec le récipient de substance jusqu’à ce que le grattoir de substance soit près de la substance pressée. Ouvrez l’alimentation en air comprimé du générateur d’aérosols avec un robinet du contrôleur de débit de masse et démarrez la génération d’aérosols en cliquant sur le bouton Démarrer. Réglez le taux d’alimentation à 15 à 20 millimètres par heure pour éviter de longs temps d’attente.Contrôlez la bonne génération de particules en observant le nuage de poussière fine avec une petite lampe de poche placée d’en bas derrière le tube de verre de l’élitriateur. Démarrez l’approvisionnement moyen avec le milieu d’exposition préchauffé et remplissez les modules d’échantillonnage jusqu’à ce que les tuyaux d’aval soient couverts pendant que le module est ouvert. Insérez des inserts de culture cellulaire aveugle dans le module d’exposition, pompez le milieu d’exposition jusqu’à ce que les tuyaux inférieurs soient recouverts de milieu et que le côté inférieur des inserts soit en contact avec le milieu.Démarrez le générateur d’aérosols, fermez le module d’exposition et connectez le module d’exposition à la sortie du module d’exposition du générateur d’aérosols. 30 minutes après le délai d’avance, sceller la sortie du module d’exposition de l’élitriateur à l’aide d’un bouchon en caoutchouc et retirer les inserts aveugles. Remplissez le milieu d’exposition jusqu’à ce que les tuyaux d’arrêt soient recouverts de milieu.Retirer les inserts de culture cellulaire des six plaques du puits à l’aide d’une pince à épiler. Versez soigneusement le milieu de croissance de la culture cellulaire en déversant les inserts et utilisez une pipette pour aspirer et jeter le liquide résiduel. Placez les inserts dans les chambres d’exposition des modules d’exposition et d’air pur.Fermez les modules et commencez les expériences d’exposition en connectant le module d’exposition à la sortie du module d’exposition du générateur d’aérosols et du module d’air pur à l’approvisionnement en gaz du transporteur simultanément. Une fois l’expérience terminée, déconnectez les modules d’exposition et d’air pur et scellez la sortie du module d’exposition. Arrêtez l’alimentation en air comprimé et le générateur d’aérosol en cliquant sur le bouton Stop.Ouvrez le module d’exposition et d’air pur et utilisez des pinces à épiler pour transférer les inserts de culture cellulaire vers les six plaques de puits préparées après l’incubation. Incuber les six plaques de puits, ainsi que les inserts de culture cellulaire non exposés, pendant 24 heures à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone à l’interface liquide de l’air. 24 heures après l’exposition, insérez les inserts de culture cellulaire dans les six nouvelles plaques de puits préparées.Ajoutez un millilitre de la solution WST1 fraîchement préparée à chaque insert de culture cellulaire. Rock les plaques avec soin afin de distribuer la solution de manière homogène sur les cellules. Incuber les six plaques de puits avec les inserts de culture cellulaire pendant une heure à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone.Après cela, transférer 100 microlitres du surnatant en triplicates de chaque plaque de six puits à une plaque de puits 96. À l’aide d’un lecteur de microplaques, mesurez l’absorption à 450 nanomètres avec une longueur d’onde de référence de 650 nanomètres. Le CULTEX RFS est un système modulaire d’exposition in vitro spécialement conçu qui permet l’exposition directe et homogène des cellules aux particules en suspension dans l’air à l’interface liquide de l’air.L’exposition des cellules à l’air pur n’entraînent aucune diminution de la viabilité cellulaire au fil du temps. Le système d’exposition a été validé avec succès et établi comme modèle de prévision des risques aigus d’inhalation des composés testés. Exposition des cellules A549 à différentes substances d’essai qui ne présentaient aucune toxicité, moyenne ou forte.S’il vous plaît assurez-vous que vous gardez strictement les délais qui sont les temps d’incubation, le délai de production de particules, et les temps de dépôt des particules. Cette méthode d’exposition est principalement conçue pour l’exposition aux particules des cellules, mais peut être étendue à l’exposition des aérosols liquides et des gaz en adaptant la méthode de génération d’aérosols. Cette méthode de dépistage permet l’évaluation qualitative des particules inhalables concernant la toxicité aiguë par inhalation in vitro, réduisant ainsi les tests sur les animaux qui fourniraient normalement cette évaluation toxicologique.N’oubliez pas que travailler avec des substances d’essai toxiques peut être extrêmement dangereux et des précautions, comme le port de gants, d’un masque, doivent toujours être prises lors de la manipulation de ces composés.

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Ce protocole est conçu pour démontrer Procédé d'exposition de cultures cellulaires à des produits chimiques toxiques inhalés. Exposition des différenciée interface air-liquide (ALI) des cultures de cellules épithéliales des voies aériennes fournit un modèle unique de l'exposition des voies respiratoires à des gaz toxiques tels que le chlore. Dans ce manuscrit, nous décrivons effet de l'exposition au chlore sur les cultures à l'interface air-liquide de cellules épithéliales et de la culture...

Cellulaire in vitro modèle de culture pour le contrôle des produits chimiques toxiques inhalés

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Évaluation de l&#39;impact de l&#39;exposition répétée de organotypiques 3D bronchiques et nasales Tissue Culture modèles Whole fumée de cigarette

Compte tenu du principe des 3 r, modèles respiratoires comme des alternatives aux études sur les animaux évoluent. Surtout pour l’évaluation des risques des substances respiratoires, il y a un manque d’essais appropriés. Nous décrivons ici l’utilisation de tranches de poumon humain de coupe de précision pour l’évaluation des substances véhiculées.

Évaluation de la cytotoxique et effets immunomodulateurs de Substances dans des tranches de poumon humain de coupe de précision

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Une nouveau Portable In Vitro exposition Cassette pour l’échantillonnage des aérosols

Présenté ici est un protocole pour l’isolement primaire de monocyte de sang humain aussi bien que leur différenciation dans les macrophages et les cellules dendritiques et l’assemblage avec des cellules épithéliales dans un modèle humain multicellulaire de poumon. Les réponses biologiques des cocultures composées de cellules immunitaires différenciées des monocytes fraîchement isolés ou décongelés, lors de l’exposition à des stimuli proinflammatoires, sont comparées.

Modèle alvéolaire humain multicellulaire composé de cellules épithéliales et de cellules immunitaires primaires pour l’évaluation des risques

Décrit est la culture cellulaire et la méthode d’exposition d’un modèle bronchique in vitro pour l’exposition réaliste et répétée par inhalation aux particules pour l’essai de toxicité.

Un modèle épithélial bronchique d’interface air-liquide pour l’exposition réaliste et répétée par inhalation aux particules aéroportées pour l’essai de toxicité

Le présent protocole décrit les cellules alvéolaires de type 2 dérivées de cellules souches pluripotentes de type 2 induites par l’homme (iAT2s). Ces cellules peuvent être cultivées en tant que sphères auto-renouvelées en culture 3D ou adaptées à la culture d’interface air-liquide (ALI).

Génération de sphères 3D et de cultures d’interface air-liquide 2D de cellules épithéliales pluripotentes de type 2 dérivées de cellules souches pluripotentes induites par l’homme

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In vitro Expositions au cannabis des cellules épithéliales pulmonaires à l’interface air-liquide

Cellules épithéliales pulmonaires peuvent être isolés par les voies respiratoires des souris et cultivés à interface air-liquide comme un modèle de l'épithélium respiratoire différencié. Un protocole est décrit pour l'isolement, la culture et d'exposer ces cellules à la fumée de cigarette dominante, afin d'étudier les réponses moléculaires à cette toxine de l'environnement.

L&#39;isolement de la souris les cellules épithéliales respiratoires et l&#39;exposition à la fumée de cigarette expérimentale chez Air interface liquide

L'objectif de ce protocole est d'isoler les cellules endothéliales lymphatiques qui tapissent malformation lymphatique navires et prépuces kystiques humains en utilisant des cellules activées par fluorescence (FACS). La culture de cellules et de l'expansion ultérieure de ces cellules permet un nouveau niveau de sophistication expérimental pour les études génétiques, protéomiques, fonctionnels et de différenciation cellulaire.

Isolement des cellules endothéliales humaines lymphatique par multi-paramètres fluorescence tri cellulaire activé

Découvrez un système d'exposition in vitro utilisant des cellules pulmonaires humaines à l'interface air-liquide pour évaluer la cytotoxicité aiguë des particules aéroportées. Cette méthode réduit significativement le recours aux expérimentations animales.

Évaluation de la toxicité par inhalation aigue des particules aéroportées en exposant les cellules pulmonaires humaines cultivées à l’interface air-liquide (Vidéo) | JoVE Journal

Évaluation de la toxicité par inhalation aigue des particules aéroportées en exposant les cellules pulmonaires humaines cultivées à l’interface air-liquide

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