Name: Instillation intratrachéale des cellules souches chez les rats néonatals à terme (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 27 s
Description: Apprenez l'instillation intratrachéale de cellules souches mésenchymateuses chez des rats néonatals Sprague-Dawley. Cette méthode permet d'évaluer l'efficacité thérapeutique pulmonaire de manière ciblée et économique.

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Cette étude a été en partie soutenue par une subvention de Meridigen Biotech Co., Ltd. Taipei, Taiwan (A-109-008).

Cette procédure a été approuvée par le Comité des soins et de l’utilisation des animaux de l’Université médicale de Taipei.
REMARQUE : Les MSCs humains transfectés de protéines fluorescentes vertes (GFP) et de gènes de luciferase de lucferase de lucfly (Fluc) ont été obtenus auprès d’une société commerciale (Table of Materials).
1. Caractérisation des MSC humains avec luciferase de luciferase de lucfly et protéine fluorescente verte
<ol><li>Maintenir les MSC humains transfectés avec GFP et Fluc dans des milieux complets (modification minimale essentielle de l’aigle-alpha [αMEM], complétés par 10−15% de sérum bovin fœtal [FBS], 2 mM L-glutamine, 1 ng/mL de base FGF, et PSF) à 37 °C avec humidité saturée et 5% CO2. Cellules de passage à ~70−90% confluence.</li>
	<li>Observez les MSC sous un microscope à contraste de phase de fluorescence (figure 1A)et analysez les niveaux d’expression de Fluc et GFP14.</li>
	<li>Caractériser les MSC en analysant l’expression des marqueurs CD, y compris CD44, CD73, CD90, CD105 à l’aide de cytométrie de flux (Figure 1B). Induire la différenciation du trilignement des cellules souches aux adipocytes, chondrocytes et ostéocytes, et confirmer la différenciation du triage (Figure 1C) par von Kossa, huile rouge O, et tache bleue alcaline suivant un protocole commercial15,16.</li>
</ol>2. Anesthésiation des chiots de rat
<ol><li>Laissez les rats Sprague-Dawley enceintes datés à temps accoucher par voie vaginale à terme.</li>
	<li>Retirer les chiots de rat de la cage le jour postnatal 5.</li>
	<li>Anesthésiez les chiots de rat à l’aide d’une anesthésie au gaz (c.-à-d. 2 % d’isoflurane) dans une chambre d’anesthésie.</li>
	<li>Confirmez l’anesthésie adéquate en vérifiant la respiration et les réflexes. REMARQUE : La respiration doit devenir superficielle et les réflexes devraient diminuer. Les chiots de rat restent inconscients pendant au moins ~10 min avec cette concentration d’isoflurane.</li>
</ol>3. Instillation intratrachéale
<ol><li>Une fois anesthésiés, retenez les chiots de rat sur un peuplement d’intubation incliné à ~60° et maintenez les chiots en place avec du ruban adhésif de laboratoire sur les quatre membres.</li>
	<li>Appliquer du ruban sous le nez pour fixer la tête et identifier le cou pour la trachéotomie de perforation.</li>
	<li>Désinfecter la zone d’incision (c.-à-d. le cou) à l’aide d’un tampon de préparation à l’alcool à 75 %.</li>
	<li>Faire une incision verticale de 0,3 cm du cou intermédiaire au-dessus de la trachée avec des microscisants pour éviter d’endommager les artères carotides.</li>
	<li>Disséquer les couches de graisse et de muscle loin pour localiser la trachée avec la pointe courbée pince à épiler effilée sans crochet.</li>
	<li>Tenez la trachée à l’une de la pointe incurvée.</li>
	<li>Tenez une seringue de 100 μL verticale et injectez lentement 30 μL de solution saline normale (c.-à-d. contrôle) ou 30 μL de MSC étiqueté Fluc-GFP (1 x 105 cellules) dans la trachée par une seringue à aiguille de 30 G pendant la phase d’ipratoire.</li>
	<li>Fermez l’incision avec un point de soie 6-0, attachez le noeud aussi petit que possible, et coupez les extrémités aussi courtes que possible.</li>
	<li>Placez les rats sous la lumière infrarouge ou sur un coussin chauffant pour se tenir au chaud et leur permettre de se remettre de l’anesthésie.</li>
	<li>Confirmez que les rats sont chauds, roses et capables de mouvement spontané avant de ramener les rats dans la cage.</li>
</ol>4. Surveillance de la distribution pulmonaire des MSC
<ol><li>Pour suivre les MSC humains transplantés, intraperitoneally injecter les rats avec le sel de potassium de luciferine dans la solution saline tamponnée de phosphate (PBS) à une dose de 125 mg/kg de poids corporel 15 min après l’injection de MSC.</li>
	<li>Anesthésier les rats à l’aide d’isoflurane à 2% à travers les cônes nasaux.</li>
	<li>Acquérir des images séquentielles à intervalles de 5 à 15 s 10 min après l’administration de luciferine avec binning moyen, 1 f/stop, et un champ de vision de 26 cm à l’aide d’un système d’imagerie pour petits animaux (Table des matériaux).</li>
	<li>Quantifier l’activité de luminescence des poumons en fonction des régions d’intérêt automatiques à l’aide d’un logiciel d’imagerie (Tableau des matériaux)17.</li>
</ol>

<ol><li>Ramanathan, R., Bhatia, J. J., Sekar, K., Ernst, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+in+preterm+infants+with+respiratory+distress+syndrome+treated+with+poractant+alfa%2C+calfactant+or+beractant%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Mortality in preterm infants with respiratory distress syndrome treated with poractant alfa, calfactant or beractant: a retrospective study.</a> Journal of Perinatology. 33, 119-125 (2013).</li>
<li>Gien, J., Kinsella, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of bronchopulmonary dysplasia.</a> Current Opinion in Pediatrics. 23, 305-313 (2011).</li>
<li>Pasha, A. B., Chen, X. Q., Zhou, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchopulmonary+dysplasia%3A+Pathogenesis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">Bronchopulmonary dysplasia: Pathogenesis and treatment.</a> Experimental and Therapeutic. 16, 4315-4321 (2018).</li>
<li>Committee on Fetus and Newborn. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+corticosteroids+to+treat+or+prevent+chronic+lung+disease+in+preterm+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Postnatal corticosteroids to treat or prevent chronic lung disease in preterm infants.</a> Pediatrics. 109, 330-338 (2002).</li>
<li>Watterberg, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Academy+of+Pediatrics%3B+Committee+on+Fetus+and+Newborn.+Policy+statement-postnatal+corticosteroids+to+prevent+or+treat+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">American Academy of Pediatrics; Committee on Fetus and Newborn. Policy statement-postnatal corticosteroids to prevent or treat bronchopulmonary dysplasia.</a> Pediatrics. 126, 800-808 (2010).</li>
<li>Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marrow+stromal+cells+as+stem+cells+for+nonhematopoietic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Marrow stromal cells as stem cells for nonhematopoietic tissues.</a> Science. 276, 71-74 (1997).</li>
<li>Nemeth, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+stromal+cells+attenuate+sepsis+via+prostaglandin+E%282%29-+dependent+reprogramming+of+host+macrophages+to+increase+their+interleukin-10+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bone marrow stromal cells attenuate sepsis via prostaglandin E(2)- dependent reprogramming of host macrophages to increase their interleukin-10 production.</a> Nature Medicine. 15 (2), 42-49 (2009).</li>
<li>Chou, H. C., Li, Y. T., Chen, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+attenuate+experimental+bronchopulmonary+dysplasia+induced+by+perinatal+inflammation+and+hyperoxia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells attenuate experimental bronchopulmonary dysplasia induced by perinatal inflammation and hyperoxia.</a> American Journal of Translational Research. 8, 342-353 (2016).</li>
<li>Chen, C. M., Chou, H. C., Lin, W., Tseng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surfactant+effects+on+the+viability+and+function+of+human+mesenchymal+stem+cells%3A+in+vitro+and+in+vivo+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Surfactant effects on the viability and function of human mesenchymal stem cells: in vitro and in vivo assessment.</a> Stem Cell Research & Therapy. 8, 180(2017).</li>
<li>Kim, Y. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+simultaneously+attenuates+both+lung+and+brain+injuries+in+hyperoxic+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Intratracheal transplantation of mesenchymal stem cells simultaneously attenuates both lung and brain injuries in hyperoxic newborn rats.</a> Pediatric Research. 80, 415-424 (2016).</li>
<li>Fleurence, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficacy+of+intratracheal+adeno-associated+virus+administration+to+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Comparative efficacy of intratracheal adeno-associated virus administration to newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 16, 1298-1306 (2005).</li>
<li>Waszak, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+intratracheal+adenoviral+vector+administration+on+lung+development+in+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effect of intratracheal adenoviral vector administration on lung development in newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 13, 1873-1885 (2002).</li>
<li>O'Reilly, M., Thébaud, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bronchopulmonary+dysplasia.+The+term+rat+models%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of bronchopulmonary dysplasia. The term rat models.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307, 948(2014).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP+labeling+and+hepatic+differentiation+potential+of+human+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">GFP labeling and hepatic differentiation potential of human placenta-derived mesenchymal stem cells.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 35, 2299-2308 (2015).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).</li>
<li>Zhang, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+osteogenic+capacity+for+bone+tissue+engineering+of+fetal+compared+with+perinatal+and+adult+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Superior osteogenic capacity for bone tissue engineering of fetal compared with perinatal and adult mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 27, 126-137 (2009).</li>
<li>Huang, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+surfactant+and+budesonide+on+pulmonary+distribution+of+fluorescent+dye+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+and+Neonatology%22%5BJournal%5D)">Effect of surfactant and budesonide on pulmonary distribution of fluorescent dye in mice.</a> Pediatric and Neonatology. 56, 19-24 (2015).</li>
<li>Keyaerts, M., Caveliers, V., Lahoutte, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging%3A+looking+beyond+the+light%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging: looking beyond the light.</a> Trends in Molecular Medicine. 18, 164-172 (2012).</li>
<li>Yeh, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-tracheal+administration+of+budesonide%2Fsurfactant+to+prevent+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intra-tracheal administration of budesonide/surfactant to prevent bronchopulmonary dysplasia.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193, 86-95 (2016).</li>
<li>Nguyen, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+inoculation+of+Fischer+344+rats+with+Francisella+tularensis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intratracheal inoculation of Fischer 344 rats with Francisella tularensis.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56123(2017).</li>
<li>de Almeida, P. E., van Rappard, J. R., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+for+tracking+cell+fate+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence for tracking cell fate and function.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301, 663-671 (2011).</li>
<li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49, 3-10 (2011).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Les nouveau-nés souffrant de détresse respiratoire ont généralement besoin d’un surfactant intratrachéal et/ou d’un traitement corticostéroïde19. Les essais cliniques de phase I chez l’homme ont démontré l’innocuité des MSC intratrachéaux chez les nouveau-nés prématurés8. Ces études suggèrent que l’administration intratrachéale des médicaments est une option importante pour les nouveau-nés souffrant de détresse respiratoire. Les études sur les modèle...

L’oxygène supplémentaire est souvent nécessaire pour traiter les nouveau-nés souffrant de détresse respiratoire1. Cependant, la thérapie d’hyperoxie chez les enfants en bas âge a des effets à long terme défavorables. L’exposition prolongée à des concentrations élevées d’oxygène conduit à l’inflammation et aux lésions pulmonaires aiguës, qui est semblable à la dysplasie bronchopulmonaire humaine (BPD)2. Le DBP est une complication majeure du traitement d’hyperoxie qui peut se produire en dépit de la thérapie de surfactant tôt, des procédures optimales de ventilation, et l’utilisation accrue de la ventilation positive non invasive de pression dans les enfants en bas âge prématurés. Alors que de nombreuses stratégies de traitement ont été rapportées pour bpd3, aucun traitement connu ne peut réduire cette complication.
L’utilisation de corticostéroïdes est un traitement potentiel pour prévenir le TPL, parce que l’inflammation pulmonaire joue un rôle crucial dans sa pathogénie. Cependant, la thérapie systémique de corticostéroïde n’est habituellement pas recommandée pour les nouveau-nés prématurés en raison des effets indésirables à long terme4,5.
Les cellules stromales mésenchymales (MSC) ont des caractéristiques pluripotentes et peuvent se différencier en différents types de cellules, y compris les os, le cartilage, les tissus adipeux, les muscles et les tendons6. Les MSC ont des effets immunomodulatoires, anti-inflammatoires et régénératifs7,et les études animales montrent les avantages thérapeutiques des MSC et de leurs composants sécrétés dans les lésions pulmonaires induites par l’hyperoxie chez les rongeurs8,9. La transplantation intratrachéale et intraveineuse de MSC a été montrée pour protéger contre des dommages hyperoxiques néonatals de poumon. Par conséquent, l’administration intratrachéale des cellules souches et la thérapie combinée de surfactant et de corticostéroïde pourrait être une stratégie potentielle de traitement pour traiter des nouveau-nés avec des désordres respiratoires. Des études précliniques ont utilisé l’administration intratrachéale des cellules souches et du virus adéno-associé chez les rats nouveau-nés10,11,12. Cependant, une présentation étape par étape de la technique et du suivi in vivo des cellules souches transplantées n’est pas disponible. Le rat nouveau-né est approprié pour étudier les effets de l’administration intratrachéale sur les nouveau-nés prématurés souffrant de détresse respiratoire parce que le stade saccular du poumon de rat à la naissance est équivalent à celui du poumon humain à 26−28 semaine de gestation13. Une méthode efficace d’administration dans la trachée de rat est cruciale pour la distribution pulmonaire réussie. La technique présentée ici permet l’étude de l’administration intratrachéale des cellules et/ou des médicaments pour le traitement des maladies pulmonaires néonatales utilisant des rats comme modèle pour l’homme.

<table><tbody><tr><td>6-0 silk</td><td>Ethicon</td><td>1916G</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Prep Pad</td><td>CSD</td><td>3032</td><td></td></tr><tr><td>BD Stemflow hMSC Kit d’analyse</td><td>BD Biosciences</td><td>562245</td><td>marqueurs CD</td></tr><tr><td>CMV-Luciferase-EF1&alpha ;-copGFP BLIV 2.0 Lentivecteur pour l’imagerie in vivo</td><td>SBI</td><td>BLIV511PA-1</td><td></td></tr><tr><td>CryoStor10</td><td>BioLife Solutions</td><td>640222</td><td></td></tr><tr><td>MSCs humaines</td><td>Meridigen Biotech Co., Ltd. Taipei, Taïwan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lumière infrarouge</td><td>JING SHANG</td><td>JS300T</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Halocarbon</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>IVIS-200 système d’imagerie pour petits animaux</td><td>Caliper LifeSciences, Hopkinton, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luciferin sel de potassium</td><td>Promega, Madison, WI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micro-ciseaux, droit</td><td>Vannas</td><td>H4240</td><td></td></tr><tr><td>Saline normale</td><td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td><td>113531</td><td>Aiguille RN isotonique en solution de chlorure de sodium</td></tr><tr><td>, calibre 30</td><td>Hamilton Company, Reno, NV</td><td>7799-06</td><td></td></tr><tr><td>Seringue (100 &micro ; l)</td><td>Hamilton Company, Reno, NV</td><td>81065</td><td></td></tr><tr><td>Xenogen Living Image 2.5 software</td><td>Caliper LifeSciences, Hopkinton, MA</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

instillation intratrachéale des cellules souches chez les rats néonatals à terme

Intratracheal Instillation of Stem Cells in Term Neonatal Rats

L’exposition prolongée à des concentrations élevées d’oxygène conduit à l’inflammation et aux lésions pulmonaires aiguës, qui sont semblables à la dysplasie bronchopulmonaire humaine (BPD). Chez les nourrissons prématurés, le TPL est une complication majeure malgré l’utilisation précoce de la thérapie surfactante, des stratégies de ventilation optimales et de la ventilation à pression positive non invasive. Parce que l’inflammation pulmonaire joue un rôle crucial dans la pathogénie de la BPD, l’utilisation de corticostéroïdes est un traitement potentiel pour le prévenir. Néanmoins, le traitement systémique des corticostéroïdes n’est généralement pas recommandé pour les nouveau-nés prématurés en raison d’effets indésirables à long terme. Les études précliniques et les essais cliniques de phase I chez l’homme ont démontré que l’utilisation de cellules stromales mésenchymales (MSC) dans les lésions pulmonaires induites par l’hyperoxie et chez les nouveau-nés prématurés est sûre et faisable. La transplantation intratrachéale et intraveineuse de MSC a été montrée pour protéger contre des dommages hyperoxiques néonatals de poumon. Par conséquent, l’administration intratrachéale des cellules souches et du traitement combiné surfactant et glucocorticoïde est apparue comme une nouvelle stratégie pour traiter les nouveau-nés atteints de troubles respiratoires. Le stade de développement des poumons de rat à la naissance est équivalent à celui dans les poumons humains à 26−28 semaines de gestation. Par conséquent, les rats nouveau-nés sont appropriés pour étudier l’administration intratrachéale aux nouveau-nés prématurés présentant la détresse respiratoire pour évaluer son efficacité. Cette technique d’instillation intratrachéale est une option cliniquement viable pour la livraison de cellules souches et de médicaments dans les poumons.

La distribution pulmonaire de l’instillation intratrachéale des cellules souches dans le terme rats néonatals a été déterminée par des cellules souches étiquetées luciferase de luciferase de firefly (Fluc). Les MSC ont été étiquetés avec Fluc et étiquetés avec des protéines fluorescentes vertes par transduction lentiviral. La figure 1A montre un niveau élevé d’expression GFP dans les MSC humains, et 93,7 % de la population a montré l’expression positive de GFP détectée par cytométrie de flux...

Décrit est un protocole pour effectuer la transplantation intratrachéale des cellules stromales mésenchymales (MSCs) par injection intratrachéale dans les rats néonatals terme. Cette technique est une option cliniquement viable pour l’administration de cellules souches et de médicaments dans les poumons néonatals de rat pour évaluer leur efficacité.

Instillation intratrachéale des cellules souches chez les rats néonatals à terme

Prolonged exposure to high concentrations of oxygen leads to inflammation and acute lung injury, which is similar to human bronchopulmonary dysplasia ...

L’instillation intratrachéale est une biotechnique clinique pour la livraison de cellules souches et de médicaments dans un poumon néonatal afin d’évaluer l’efficacité de Chilman. Cette technique peut être de bonne foi pour une utilisation avec une variété d’application primaire chez un rat néonatal et est une mesure relativement facile et rentable pour le traitement des maladies pulmonaires. Le cinquième jour postnatal, retenir les chiots rat Sprague-Dawley anesthésiés, sur un support d’intubation à angle de 60 degrés.Et apposer du ruban adhésif d’étiquetage de laboratoire sur les quatre membres de chaque chiot pour les fixer en place. Appliquez du ruban adhésif sous chaque nez pour fixer les têtes. Et localiser le premier cou pour la trachéotomie de perforation.Utilisez un tampon de préparation à 75 % d’alcool pour désinfecter la zone d’incision. Et faire une incision verticale de 3 centimètres au-dessus de la trachée pour éviter d’endommager les artères carotides. Utilisez des pinces coniques incurvées sans crochet pour dissocier les couches de graisse et de muscle pour localiser la trachée.Lorsque la trachée peut être observée, utilisez la pince à épiler pour saisir la trachée

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Des avancées significatives dans l'identification de cellules souches sont continuellement en cours. Pour traduire ces découvertes, cependant, de nouvelles méthodes pour la livraison cellulaires doivent être élaborées. Ici je signale que les voies respiratoires fournir un itinéraire sûr pour la transplantation de cellules souches pour les poumons.

Trachéotomie: Une méthode pour la transplantation de cellules souches pour le poumon

Instillations intratrachéale offrir solutés directement dans les poumons. Cette procédure vise la livraison de l'instillation dans les régions distales du poumon, et est donc souvent incorporées dans des études visant à étudier les alvéoles. Nous fournissons un protocole de survie détaillées pour effectuer des instillations intra-trachéale chez les souris.

L&#39;instillation trachéale directe des solutés dans les poumons de souris

Nous avons développé une nouvelle approche chirurgicale pour l'administration intratrachéale d'agents bioactifs dans le fœtus de souris. L'itinéraire de livraison est plus efficace en ciblant les poumons de foetus de souris que l'couramment utilisés injection intra-amniotique. Cette procédure n'a jusqu'à présent pas été décrits dans un modèle de souris.

Une nouvelle approche chirurgicale pour l&#39;administration intratrachéale d&#39;agents bioactifs dans un modèle de souris fœtale

Cette vidéo montre l’établissement d’une infection pulmonaire chez un modèle de rongeur immunocompétent par intubation et installation de suspensions bactériennes dans les lobes pulmonaires. Ce modèle permet d’étudier l’efficacité antibactérienne chez des animaux immunocompétents.

Instillation intrabronchique de Streptococcus pneumoniae dans des modèles de rongeurs immunocompétents

Une méthode pour fournir des cellules souches neurales, adaptable pour injecter des solutions ou des suspensions, par l’artère carotide commune (souris) ou l’artère carotide externe (rat) après un AVC ischémique est rapporté. Les cellules injectées sont réparties largement dans tout le parenchyme cérébral et peuvent être détectées jusqu’à 30 d après l’accouchement.

Livraison intra-artérielle de cellules souches neuronales au cerveau du rat et de la souris : application à l’ischémie cérébrale

Cette technique consistant à instiller des médicaments directement dans la trachée des rongeurs néonatals est importante pour étudier l’impact des médicaments ou des produits biologiques administrés localement sur les maladies pulmonaires néonatales. En outre, cette méthode peut également être utilisée pour induire des lésions pulmonaires dans des modèles animaux.

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Cette méthode permet d’éliminer toute invasion majeure lors des injections cellulaires provoquée par la solution de suspension cellulaire.

Une nouvelle méthode d’injection cellulaire avec un minimum d’invasion

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Ce travail présente un modèle animal de fibrose induite par la transition endothéliale à mésenchymateuse, tel qu’il est observé dans les malformations cardiaques congénitales telles que la sténose aortique critique ou le syndrome hypoplasique du cœur gauche, ce qui permet une évaluation histologique détaillée des tissus, l’identification des voies de signalisation régulatrices et le test des options de traitement.

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La thérapie cellulaire offre une intervention prometteuse pour la fibrose pulmonaire en utilisant des cellules progénitrices pour réparer les tissus endommagés et améliorer la fonction pulmonaire. Comme l’imagerie joue un rôle central dans le suivi de l’intégration cellulaire, nous décrivons ici le suivi in vivo de la thérapie cellulaire pour la fibrose pulmonaire guidé par l’imagerie par particules magnétiques dans un modèle murin.

Suivi in vivo guidé par l’image de cellules progénitrices de l’épithélium pulmonaire distal transplantées pour la fibrose pulmonaire à l’aide de l’imagerie par particules magnétiques

Apprenez l'instillation intratrachéale de cellules souches mésenchymateuses chez des rats néonatals Sprague-Dawley. Cette méthode permet d'évaluer l'efficacité thérapeutique pulmonaire de manière ciblée et économique.

Instillation intratrachéale des cellules souches chez les rats néonatals à terme

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