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DOI: 10.3791/61862-v
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Le présent protocole décrit des méthodes pour étudier la structure et la dynamique de deux protéines modèles qui jouent un rôle important dans la santé humaine. La technique combine la caractérisation biophysique de paillasse avec la spectroscopie d’écho de spin neutronique pour accéder à la dynamique aux échelles de temps et de longueur pertinentes pour les mouvements interdomaines des protéines.
Le protocole suivant présente comment mettre en place une expérience Neutron Spin Echo pour mesurer la fonction de diffusion intermédiaire et étudier la dynamique des protéines en solution. Le principal avantage de la spectroscopie d’écho de spin neutronique est sa capacité à examiner le réarrangement des domaines et des sous-domaines protéiques sur l’échelle de temps pico à la nanoseconde; qui est la gamme de ralentis dans les protéines dans leur environnement presque naturel, et dans la solution protéique encombrée. Neutron Spin Echo est également sensible à la configuration isotopique, ce qui permet des études très spécifiques et ciblées utilisant l’appariement de contraste.
Les connaissances sur la dynamique du domaine protéique constituent une partie importante de la recherche biophysique dans la tâche difficile en cours de relayer les mouvements du domaine des protéines avec leur fonctionnalité biologique. Le protocole présenté ici peut être généralement appliqué à toute mesure de l’écho de spin neutronique effectuée au spectromètre SNS-NSE, quel que soit votre choix d’échantillons, si l’on reste dans le domaine des matériaux de matière molle. Pour mettre en place l’expérience, commencez par sélectionner l’épaisseur de la charge de l’échantillon cellulaire, en fonction de la concentration de l’échantillon de protéines, de la température nécessaire à la mesure et de la quantité de solution disponible.
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