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Sand Fly (Phlebotomus papatasi) Microinjection embryonnaire pour CRISPR/Cas9 Mutagenesis
Sand Fly (Phlebotomus papatasi) Microinjection embryonnaire pour CRISPR/Cas9 Mutagenesis
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JoVE Journal Genetics
Sand Fly (Phlebotomus papatasi) Embryo Microinjection for CRISPR/Cas9 Mutagenesis

Sand Fly (Phlebotomus papatasi) Microinjection embryonnaire pour CRISPR/Cas9 Mutagenesis

Full Text
8,015 Views
05:44 min
November 17, 2020

DOI: 10.3791/61924-v

Isabelle Louradour1, Kashinath Ghosh1, Ehud Inbar1, David L. Sacks1, Channa Aluvihare2, Robert A. Harrell II2

1Laboratory of Parasitic Diseases, National Institute of Allergy and Infectious Diseases,National Institutes of Health, 2University of Maryland Insect Transformation Facility,The Institute for Bioscience and Biotechnology Research

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol details the steps of CRISPR/Cas9 targeted mutagenesis in sand flies, including embryo collection, injection, insect rearing, and identification of mutations.

Key Study Components

Area of Science

  • Genetic engineering
  • Insect biology
  • Vector control

Background

  • Targeted mutagenesis is crucial for understanding gene function in sand flies.
  • Embryo microinjection is a key step in genome editing.
  • Sand fly embryos are small and sensitive to humidity.
  • Proper feeding and maintenance of sand flies are essential for successful experiments.

Purpose of Study

  • To adapt CRISPR/Cas9 technology for use in sand flies.
  • To investigate the role of specific genes in vector insects.
  • To improve methods for insect genome editing.

Methods Used

  • Embryo collection from sand flies.
  • Microinjection of CRISPR/Cas9 components.
  • Rearing of injected insects.
  • Identification and selection of mutations.

Main Results

  • Successful adaptation of CRISPR/Cas9 for sand flies.
  • Establishment of effective embryo microinjection protocols.
  • Identification of mutations of interest in target genes.
  • Insights into gene function in vector biology.

Conclusions

  • CRISPR/Cas9 is a viable tool for genetic studies in sand flies.
  • Methodological adaptations are necessary for different insect species.
  • This research enhances our understanding of vector genetics.

Frequently Asked Questions

What is CRISPR/Cas9?
CRISPR/Cas9 is a genome editing technology that allows for precise modifications to DNA.
Why are sand flies important in research?
Sand flies are vectors for diseases, making them crucial for understanding disease transmission and control.
How do you collect sand fly embryos?
Embryos are collected from blood-fed female sand flies, which are then maintained in controlled conditions.
What challenges are associated with sand fly embryo microinjection?
Sand fly embryos are small and sensitive to environmental conditions, requiring careful handling during microinjection.
What are the potential applications of this research?
This research can lead to better vector control strategies and insights into gene function in disease transmission.

Ce protocole détaille les étapes de la mutagenèse ciblée CRISPR/Cas9 chez les mouches du sable : collecte d’embryons, injection, élevage et identification d’insectes ainsi que sélection de mutations d’intérêt.

La mutagenèse ciblée n’a été adaptée aux phlébotomes que récemment et constitue une technique cruciale pour comprendre le rôle et la fonction des gènes d’intérêt chez ces insectes vecteurs. La micro-injection d’embryons est une étape très importante dans l’édition du génome des insectes, mais elle doit être adaptée aux espèces avec lesquelles vous travaillez, dans notre cas, les phlébotomes. Comparés aux autres espèces d’insectes, les embryons de phlébotomes sont très petits.

Mettent beaucoup de temps à se développer et sont particulièrement sensibles au taux d’humidité. Cinq jours avant l’injection, nourrissez par le sang les phlébotomes femelles comme pour l’entretien régulier de la colonie. Un jour après le nourrissage, capturez les femelles nourries au sang dans des gousses de plâtre avec un port latéral par groupes de 100 à 150 et nourrissez les mouches avec une solution à 30 % de saccharose.

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