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DOI: 10.3791/61924-v
Isabelle Louradour1, Kashinath Ghosh1, Ehud Inbar1, David L. Sacks1, Channa Aluvihare2, Robert A. Harrell II2
1Laboratory of Parasitic Diseases, National Institute of Allergy and Infectious Diseases,National Institutes of Health, 2University of Maryland Insect Transformation Facility,The Institute for Bioscience and Biotechnology Research
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol details the steps of CRISPR/Cas9 targeted mutagenesis in sand flies, including embryo collection, injection, insect rearing, and identification of mutations.
Ce protocole détaille les étapes de la mutagenèse ciblée CRISPR/Cas9 chez les mouches du sable : collecte d’embryons, injection, élevage et identification d’insectes ainsi que sélection de mutations d’intérêt.
La mutagenèse ciblée n’a été adaptée aux phlébotomes que récemment et constitue une technique cruciale pour comprendre le rôle et la fonction des gènes d’intérêt chez ces insectes vecteurs. La micro-injection d’embryons est une étape très importante dans l’édition du génome des insectes, mais elle doit être adaptée aux espèces avec lesquelles vous travaillez, dans notre cas, les phlébotomes. Comparés aux autres espèces d’insectes, les embryons de phlébotomes sont très petits.
Mettent beaucoup de temps à se développer et sont particulièrement sensibles au taux d’humidité. Cinq jours avant l’injection, nourrissez par le sang les phlébotomes femelles comme pour l’entretien régulier de la colonie. Un jour après le nourrissage, capturez les femelles nourries au sang dans des gousses de plâtre avec un port latéral par groupes de 100 à 150 et nourrissez les mouches avec une solution à 30 % de saccharose.
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