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Air-Gonflage des poumons murins avec perfusion vasculaire-Fixation
Air-Gonflage des poumons murins avec perfusion vasculaire-Fixation
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JoVE Journal Neuroscience
Air-Inflation of Murine Lungs with Vascular Perfusion-Fixation

Air-Gonflage des poumons murins avec perfusion vasculaire-Fixation

Full Text
8,491 Views
07:19 min
February 2, 2021

DOI: 10.3791/62215-v

Stacey M. Thomas1, Joseph Bednarek2, William J. Janssen1, Patrick S. Hume1

1Division of Pulmonary, Sleep and Critical Care Medicine, Department of Medicine,National Jewish Health, 2Section of Pediatric Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition,Children's Hospital Colorado

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a method for preserving lung structures through an innovative air-inflation with vascular perfusion-fixation technique. This method allows researchers to maintain cell morphology and location within airways, alveoli, and interstitium for detailed structure-function analyses. The preserved samples are suitable for subsequent histologic studies.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Biology
  • Histological Analysis

Background

  • Traditional methods often compromise cell morphology during lung fixation.
  • This technique combines air inflation with vascular perfusion fixation to improve sample integrity.
  • Maintaining location of cells within lung architecture is critical for accurate analyses.

Purpose of Study

  • To develop a method preserving both structure and function of lung tissues.
  • To facilitate detailed histologic examination of lungs post-fixation.
  • To investigate inflammatory responses in lung tissues effectively.

Methods Used

  • The method involves air inflation of lungs combined with vascular perfusion fixation.
  • The biological model used is the euthanized mouse lung.
  • This technique involves precise surgical incisions and careful administration of fluids.
  • Key steps include setting up an air-inflation apparatus and accurately controlling pressure during fixation.
  • Importance is placed on the timing and order of inflation and fixative perfusion to prevent damage.

Main Results

  • The technique successfully preserves cell morphology and location in lung tissues.
  • Unlike traditional methods, few immune cells are lost in the airway lumen, allowing for more accurate assessments.
  • The method enhances visibility of inflammatory responses within perfused lung tissues.
  • Histological analysis demonstrates the viability of the samples for various imaging techniques.

Conclusions

  • This study enables better preservation of lung structures for detailed analyses.
  • It has significant implications for understanding lung pathology and responses to injury or infection.
  • Overall, the method enhances histological examination capabilities in lung research.

Frequently Asked Questions

What are the advantages of this air inflation and fixation method?
This method preserves cell morphology and positioning in lung structures better than traditional methods, allowing for more accurate functional analyses.
How is the mouse lung prepared for inflation and fixation?
Lungs are prepared by making incisions to access the trachea and heart, and through precise placement of a perfusion needle into the right ventricle.
What types of data can be obtained using this technique?
This method allows for histological analysis, including staining and immunohistochemistry to evaluate lung structure and immune response.
How can this method be applied to other studies?
This air-inflation and perfusion fixation technique can be adapted for other tissues where preservation of structural details is critical for analysis.
What are key considerations when using this technique?
Careful attention must be paid during the surgical preparation and the perfusion steps to avoid damaging the lung tissue.

Présenté est une méthode de gonflage de l’air avec perfusion vasculaire-fixation des poumons qui préserve l’emplacement des cellules dans les voies respiratoires, les alvéoles et l’interstitium pour les analyses structure-fonction. La pression constante des voies respiratoires est maintenue avec une chambre de gonflage de l’air tandis que le fixateur est perfusé via le ventricule droit. Les poumons sont traités pour des études histologiques.

Il s’agit d’une méthode peu coûteuse qui combine les avantages du gonflage de l’air et de la fixation par perfusion vasculaire pour préserver les poumons pour les analyses structurelles et fonctionnelles. Le principal avantage de cette technique est la préservation de la morphologie cellulaire et de l’emplacement dans les espaces aériens du poumon. Des précautions doivent être prises lors de la mise en place de l’adaptateur de talon de leurre dans la trachée et de l’aiguille de perfusion dans le ventricule droit pour assurer un gonflage et une fixation adéquats.

Pour installer l’appareil de gonflage de l’air, placez une seringue pour la colonne d’eau dans un porte-anneau et mesurez une hauteur verticale de 25 centimètres de la plate-forme animale à 25 centimètres sur la colonne d’eau. Fixez à l’extrémité du tube de la colonne d’eau au robinet d’arrêt de la chambre à air et fixez un tube du leurre femelle de la chambre à air au robinet d’arrêt du récipient de traitement des animaux. Vérifiez que le bouchon de la chambre à air et le robinet d’arrêt à l’extérieur du récipient de traitement des animaux sont fermés et que le robinet d’arrêt du tube menant de la colonne d’eau à la chambre de gonflage de l’air est ouvert.

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Neurosciences Numéro 168 Air-inflation perfusion vasculaire-fixation voies respiratoires alvéolaire interstitielle macrophage poumon structure-fonction

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