Étude du développement de cellules dendritiques par knockdown de gènes médiés par l’ARN en épingle à cheveux court dans une lignée cellulaire hématopoïétique et progénitrice in vitro

Les cellules dendritiques, ou DC, sont des cellules immunitaires clés reliant le système immunitaire inné et adaptatif. Bien que les DC soient hétérogènes, cette méthode nous aide à comprendre quels gènes, y compris les facteurs de transcription, peuvent réguler le développement des DC. Cette technique fournit un moyen simple et rapide d’identifier un gène qui contrôle le développement dc à partir de leur progéniteur in vitro.

Pour commencer, maintenez les cellules souches et progénitrices hématopoïétiques immortalisées ou iHSPC dans un milieu RPMI 1640 complet, complété par 100 nanogrammes par millilitre du ligand FLT3 et un bêta-estradiol micromolaire. Pour la transduction lentivirale, plaquer les iHSPC dans 12 plaques de puits à une densité d’une fois 10 à la cinquième cellule par puits et un millilitre de milieu complet contenant le ligand FLT3, le bêta-estradiol et le polybrene. Ensuite, ajoutez le lentivirus portant l’ARN court en épingle à cheveux dans chaque puits à une multiplicité d’infection de 100.