Name: Évaluation thérapeutique de la transplantation de microbiote fécal dans un modèle murin déficient en interleukine 10 (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-06T13:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 41 s
Description: Découvrez la transplantation de microbiote fécal par gavage oral chez des souris déficientes en interleukine 10. Cette méthode évalue son efficacité thérapeutique contre l'inflammation colique et les troubles cardiaques liés à la maladie inflammatoire de l'intestin.

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Ce travail a été soutenu, en partie, par des subventions des National Institutes of Health (R01 HL152683 et R21 AI126097 à Q. Li) et par l’American Heart Association Grant-in-Aid 17GRNT33460395 (à Q. Li) (heart.org).

Toutes les procédures effectuées sur les animaux ont été approuvées par le Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux de la branche médicale de l’Université du Texas à Galveston (Protocole # 1512071A).
1. Collecte de granulés fécaux frais
<ol><li>Préparez des serviettes en papier stériles, des pinces à extrémité émoussée et des tubes coniques de 50 mL.<ol><li>Placer des serviettes en papier et des pinces dans des sacs d’autoclave séparés et les autoclaver à 180 °C à feu sec pendant 30 min. Utilisez également des tubes coniques stériles. Pesez les tubes coniques et notez leur poids sur les tubes.</li>
	</ol></li>
	<li>Allumez l’armoire de biosécurité dans la salle animalière.</li>
	<li>Prenez une cage à souris propre autoclavée sans litière et placez-la dans l’armoire de biosécurité. Retirez le couvercle et la grille à nourriture et placez-les à l’intérieur de l’armoire.</li>
	<li>Placez des serviettes en papier stériles au fond de la cage et replacez le support métallique sur le dessus de la cage.</li>
	<li>Identifiez les donneurs fécaux compatibles selon l’âge et placez la cage de la souris dans l’enceinte de biosécurité. Ouvrez la cage et attrapez doucement une souris donneuse (C57BL/6J) par la queue et placez-la sur le support métallique au-dessus de la cage propre.</li>
	<li>Placez le couvercle de la cage sur le dessus du support et attendez que le ou les animaux défèquent. REMARQUE: Mettez quelques compagnons de portée de souris sur le rack simultanément.</li>
	<li>Prélever les granulés fécaux et les mettre dans un tube conique stérile de 50 mL. Mettez les granulés en commun par sexe. Ne mélangez pas les granulés fécaux prélevés sur les mâles et les femelles.</li>
	<li>Pesez à nouveau le tube et calculez le poids des granulés fécaux.</li>
</ol>2. Préparation de la suspension fécale
<ol><li>Préparer une solution stérile (10% de glycérol dans une solution saline normale).</li>
	<li>Ajouter 10 mL de glycérol à 10 % / solution saline normale dans le tube conique pour chaque gramme de granulés fécaux. REMARQUE : Augmentez le volume de solution à 20 mL si nécessaire. Cette étude a également utilisé 1 mL de solution pour chaque pastille (5-10 mg).</li>
	<li>Homogénéiser le mélange à basse vitesse avec un homogénéisateur de paillasse ou un mélangeur à l’intérieur d’une hotte pour remettre les matières fécales en suspension (3 X 30 s).</li>
	<li>Filtrer la suspension fécale à travers 2 couches de gaze de coton stérile (10,2 cm x 10,2 cm). Conservez temporairement le filtrat au réfrigérateur jusqu’à 6 heures ou conditionnez-le dans des flacons cryogéniques stériles et conservez-le dans un congélateur à -80 °C.</li>
	<li>Nettoyez soigneusement l’homogénéisateur ou le mélangeur en suivant une procédure standard.</li>
</ol>3. Administration de suspension fécale par gavage oral
<ol><li>Décongeler la suspension fécale congelée sur la glace si vous utilisez des échantillons congelés. Mélanger la suspension fécale décongelée par vortex.</li>
	<li>Transférer la suspension fécale fraîche ou décongelée dans des seringues de 1 mL. REMARQUE: Chaque souris recevra un total de 200 μL de suspension fécale, et chaque souris IL-10-/- du groupe témoin recevra 200 μL de glycérol à 10% / solution saline normale17.</li>
	<li>Pesez les souris et choisissez la bonne taille d’aiguille de gavage et le volume de dosage maximal. REMARQUE: Pour les souris dont le poids corporel se situe entre 20 et 25 grammes, utilisez une aiguille de gavage incurvée de 20 g 3,81 cm avec une balle de 2,25 mm. Veuillez consulter gavageneedle.com pour plus d’informations.</li>
	<li>Testez l’aiguille de gavage en mesurant la longueur entre le bout du nez de la souris et le processus xiphoïde (bas du sternum). Remplissez la seringue avec 10% de glycérol / solution saline ou de suspension fécale et retirez les bulles d’air à l’intérieur de la seringue et de l’aiguille. REMARQUE: Si l’aiguille est plus longue que la longueur, mettez une marque sur la tige ou le tube de l’aiguille au niveau du nez. Ne passez pas l’aiguille ou la tubulure à travers l’animal au-delà de ce point pour éviter la perforation gastrique.</li>
	<li>Placez une cage de souris dans l’armoire de biosécurité, retirez le couvercle de la cage en plastique et laissez le support métallique en place.</li>
	<li>Attrapez une souris par la queue et mettez-la sur le support en métal. Tenez la souris par la queue d’une main et utilisez le pouce et le majeur d’une autre main pour retenir l’animal en saisissant la peau par-dessus les épaules. De cette façon, les pattes antérieures sont tendues sur le côté, ce qui empêchera les pieds avant de pousser l’aiguille. Étendez doucement la tête de l’animal vers l’arrière et maintenez la tête en place d’une main. REMARQUE: Pratiquez la manipulation de la souris jusqu’à ce que l’expérimentateur ait une confiance totale avant de procéder à l’expérience.</li>
	<li>Placez l’aiguille de gavage sur le dessus de la langue à l’intérieur de la bouche. Avancez doucement le long du palais supérieur jusqu’à ce que l’aiguille atteigne l’œsophage. Passez l’aiguille en douceur en un seul mouvement. Ne forcez pas l’aiguille si une résistance est ressentie. Retirez l’aiguille et réessayez.</li>
	<li>Une fois que l’aiguille est correctement placée et vérifiée, administrez lentement le matériel en poussant la seringue attachée à l’aiguille. Ne tournez pas l’aiguille et ne poussez pas l’aiguille vers l’avant, ce qui pourrait rompre l’œsophage. Après le dosage, retirez doucement l’aiguille.</li>
	<li>Remettez la souris dans sa cage d’origine. Surveillez l’animal pendant 5 à 10 minutes en recherchant des signes de respiration laborieuse ou de détresse. Surveillez à nouveau les souris entre 12 et 24 heures après le FMT.</li>
</ol>4. Surveillance des maladies et euthanasie
<ol><li>Surveiller longitudinalement les souris pour détecter l’apparition de MII par sang fécal occulte et/ou coloscopie21. Évaluer la fonction cardiaque par échocardiographie transthoracique22,23.</li>
	<li>Euthanasier les animaux par décapitation sous un plan d’anesthésie profond avec de l’isoflurane (1%-4%).</li>
	<li>Prélever le sang dans des tubes de microcentrifugation avec anticoagulant et centrifuger à 1000-2000 x g pendant 10 min dans une centrifugeuse réfrigérée (4 °C). Conservez le surnageant, désigné plasma dans un congélateur à -80°C.</li>
	<li>Lors de l’euthanasie, préparer le côlon de souris en utilisant la technique Swiss-roll24 pour l’analyse histopathologique (coloration H&E)25.</li>
	<li>Mesurer le peptide natriurétique de type B (BNP) dans le plasma à l’aide d’un kit de dosage immunoenzymatique (EIA)23.</li>
</ol>

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<li>Perler, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+efficacy+and+safety+of+fecal+microbiota+transplantation+for+treatment+of+recurrent+clostridioides+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Long-term efficacy and safety of fecal microbiota transplantation for treatment of recurrent clostridioides difficile infection.</a> Journal of Clinical Gastroenterology. 54 (8), 701-706 (2020).</li>
<li>Safety alert regarding use of fecal microbiota for transplantation and risk of serious adverse events likely due to transmission of pathogenic organisms. FDA. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/safety-availability-biologics/safety-alert-regarding-use-fecal-microbiota-tramsplantation-and-risk-serious-adverse-events-likely">https://www.fda.gov/vaccines-blood-biologics/safety-availability-biologics/safety-alert-regarding-use-fecal-microbiota-tramsplantation-and-risk-serious-adverse-events-likely</a> (2020).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts concurrents.

En tant que traitement expérimental innovant, la FMT est devenue un sujet brûlant dans le traitement de divers troubles ces dernières années, car la dysbiose du microbiote commensale est impliquée dans la pathogenèse de multiples maladies humaines, notamment les MII, l’obésité, le diabète sucré, l’autisme, les maladies cardiaques et le cancer26. Bien que le mécanisme n’ait pas été déterminé, on pense que la FMT agit en construisant une nouvelle flore biologique et en empêchant la perte de bactérie...

Le micro-écosystème intestinal humain est extrêmement complexe, avec plus de 1000 espèces de bactéries dans l’intestin d’une personne en bonne santé1. La flore intestinale est impliquée dans le maintien des fonctions physiologiques normales de l’intestin et de la réponse immunitaire et a une relation inséparable avec le corps humain. L’accumulation de preuves suggère que le microbiome intestinal constitue le dernier organe humain, qui fait partie du corps humain, pas seulement un groupe de parasites2. Une relation symbiotique « saine » entre le microbiote intestinal, ses métabolites et le système immunitaire de l’hôte établi au début de la vie est essentielle au maintien de l’homéostasie intestinale. Dans certaines conditions anormales telles que l’inflammation chronique, les changements dans l’environnement interne et externe du corps perturbent gravement l’homéostasie intestinale, entraînant un déséquilibre persistant de la communauté microbienne de l’intestin, appelé dysbiose3. En fait, l’exposition à de multiples facteurs environnementaux, y compris l’alimentation, les médicaments et les agents pathogènes, peut entraîner des changements dans le microbiote.
La dysbiose est associée à la pathogenèse de diverses maladies intestinales, telles que les maladies inflammatoires de l’intestin (MII), le syndrome du côlon irritable (SCI) et l’entérite pseudomembraneuse, ainsi qu’à une liste croissante de troubles extra-intestinaux, notamment les maladies cardiovasculaires, l’obésité et les allergies4. Le profilage du microbiote a révélé que les patients atteints de MII présentent une diminution spectaculaire de la diversité bactérienne, ainsi que des altérations marquées dans les populations de certaines souches bactériennes spécifiques 5,6. Ces études ont démontré moins de Lachnospiraceae et de Bacteroidetes, mais plus de Protéobactéries et d’Actinobactéries chez les patients atteints de MII. On croit que la pathogenèse des MII est liée à divers facteurs pathogènes, y compris une flore intestinale anormale, une réponse immunitaire dérégulée, des défis environnementaux et des variantes génétiques7. De nombreuses preuves suggèrent que les bactéries intestinales jouent un rôle dans les phases d’initiation et d’application de la MII8,9, ce qui indique que la correction de la dysbiose intestinale peut représenter une nouvelle approche pour le traitement et/ou le traitement d’entretien des MII.
Le prototype de la transplantation de microbiote fécal (TMF) a commencé dans la Chine ancienne10. En 1958, le Dr Eiseman et ses collègues ont traité avec succès quatre cas d’entérite pseudomembraneuse sévère avec des matières fécales provenant de donneurs sains par lavement, ouvrant un nouveau chapitre dans la médecine occidentale moderne utilisant des excréments humains pour traiter des maladies humaines11. L’infection à Clostridium difficile (ICD) s’est avérée être la principale cause d’entérite pseudomembraneuse12 et la FMT est très efficace dans le traitement de l’ICD. Au cours des huit dernières années, la TMF est devenue une thérapie standard pour le traitement de l’ICD13 récurrente, ce qui a incité d’autres études sur le rôle de la TMF dans d’autres troubles, tels que les MII. Au cours des vingt dernières années, de nombreux rapports de cas et études de cohorte ont documenté l’utilisation de la FMT chez les patients atteints de MII14. Une méta-analyse, incluant 12 essais, a montré que 62 % des patients atteints de la maladie de Crohn (MC) ont obtenu une rémission clinique après la TMF et que 69 % des patients atteints de la MC ont présenté une réponse clinique15. Malgré ces résultats encourageants, le rôle de la FMT dans la prise en charge des MII demeure incertain, et les mécanismes par lesquels la FMT améliore l’inflammation intestinale sont mal compris. Une enquête plus approfondie est nécessaire avant que FMT puisse rejoindre l’arsenal actuel des options de traitement pour les MII dans les cliniques.
Dans ce protocole, nous avons appliqué la FMT sur des souris IL-10-/-, qui développent spontanément une colite après le sevrage et ont servi d’étalon-or pour refléter la nature multifactorielle de la MII16,17,18. Les souris IL-10−/− ont été largement utilisées pour disséquer l’étiologie des MII parce qu’elles présentent des caractéristiques moléculaires et histologiques similaires à celles des patients atteints de MII et, comme les patients, la maladie peut être améliorée par un traitement anti-TNFα16. Les souris IL10−/− vieillissantes (âgées de >9 mois) ont une taille cardiaque accrue et une fonction cardiaque altérée par rapport aux souris de type sauvage appariées selon l’âge19, ce qui en fait un excellent modèle pour étudier les maladies cardiaques induites par la colite. Cependant, d’autres modèles murins de colite, tels que le modèle de sulfate de sodium de dextrane et le modèle de colite induite par les cellules T, peuvent également être utilisés. Nous avons administré une suspension fécale par gavage oral, qui s’est avérée être une voie efficace et meilleure que le lavement chez l’homme20.

<table><tbody><tr><td>BD Seringue, 1 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-829-10F</td><td></td></tr><tr><td>Pince à bout émoussé</td><td>Knipex</td><td>926443</td><td></td></tr><tr><td>Brain natriurétique peptide EIA kit</td><td>Sigma</td><td>RAB0386</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J</td> souris <td>Jackson Lab</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Eppendorf</td><td>5415R</td><td></td></tr><tr><td>Tubes coniques</td><td>ThermoFisher</td><td>339650</td><td></td></tr><tr><td>Aiguilles d’alimentation incurvées</td><td>Kent Scientific</td><td>FNC-20-1.5-2</td><td></td></tr><tr><td>GLH-115 homogénéisateur</td><td>Omni International</td><td>GLH-115</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>MilliporeSigma</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>IL-10 souris knock-out</td><td>Jackson Lab</td><td>004366</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Soins intensifs</td><td>NDC66794-017-10</td><td></td></tr><tr><td>USP normal salin</td><td>Grainger</td><td>6280</td><td></td></tr><tr><td>Vaporisateur</td><td>Euthanex Corp.</td><td>EZ-108SA</td><td></td></tr></tbody></table>

Évaluation thérapeutique de la transplantation de microbiote fécal dans un modèle murin déficient en interleukine 10

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

Avec le développement de la microécologie au cours des dernières années, la relation entre les bactéries intestinales et les maladies inflammatoires de l’intestin (MII) a attiré une attention considérable. L’accumulation de preuves suggère que le microbiote dysbiotique joue un rôle actif dans le déclenchement ou l’aggravation du processus inflammatoire dans les MII et que la transplantation de microbiote fécal (FMT) est une stratégie thérapeutique attrayante puisque le transfert d’un microbiote sain à un patient atteint de MII pourrait rétablir la communication hôte-microbiote appropriée. Cependant, les mécanismes moléculaires ne sont pas clairs et l’efficacité de la FMT n’a pas été très bien établie. Par conséquent, d’autres études sur des modèles animaux de MII sont nécessaires. Dans cette méthode, nous avons appliqué la FMT de souris C57BL / 6J de type sauvage à des souris déficientes en IL-10, un modèle murin largement utilisé de colite. L’étude porte sur la collecte de granulés fécaux sur les souris donneuses, la fabrication de la solution / suspension fécale, l’administration de la solution fécale et la surveillance de la maladie. Nous avons constaté que la FMT atténuait significativement l’insuffisance cardiaque chez les souris knock-out IL-10, soulignant son potentiel thérapeutique pour la prise en charge des MII.

Nous avons effectué une FMT de donneur sain 3 fois (une fois par mois pendant 3 mois) sur des souris C57BL/6J de type sauvage (WT) et IL-10 âgées de 2 mois. Des souris C57BL/6J appariées selon l’âge (la différence d’âge devrait être de &lt;2 mois) ont servi de donneurs fécaux et des granulés fécaux frais ont été utilisés à chaque fois. Les tests EIA ont révélé que le BNP était nettement élevé dans le plasma des souris déficitaires en IL-10 et que la TMF d’un donneur sain atténuait significativement l’augmentation des tau...

L’interaction de la susceptibilité génétique, de l’immunité muqueuse et de l’environnement microécologique intestinal est impliquée dans la pathogenèse des maladies inflammatoires de l’intestin (MII). Dans cette étude, nous avons appliqué la transplantation de microbiote fécal à des souris déficientes en IL-10 et étudié son impact sur l’inflammation colique et la fonction cardiaque.

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...

Trois expériences cliniques ont suggéré que la transplantation de microbiote fécal a le potentiel thérapeutique d’un certain nombre de maladies humaines. D’autres études mécanistes aideront à faire passer la FMT du laboratoire au chevet du patient. Cette méthode adopte le gavage oral pour la voie de livraison, permettant une livraison de volume plus précise et une absorption rapide.Il ne nécessite que des compétences techniques modérées. Xioying Zhong, un associé de recherche principal de notre laboratoire, fera la démonstration de la procédure. Commencez par préparer des serviettes en papier stériles, des pinces à extrémité émoussée et des tubes coniques de 50 millilitres.Placez des serviettes en papier et des pinces dans des sacs d’autoclave séparés et autoclavez-les à 180 degrés Celsius à la chaleur sèche pendant 30 minutes. Pesez les tubes coniques stériles et notez leur poids sur les tubes. Allumez l’armoire de biosécurité dans la salle animalière.Prenez une cage à souris propre autoclavée sans litière et placez-la dans l’armoire de biosécurité. Retirez le couvercle et la grille à nourriture et placez-les à l’intérieur de l’armoire. Placez des serviettes en papier stériles au fond de la cage et replacez la grille métallique sur le dessus de la cage.Identifiez les donneurs fécaux appariés selon l’âge et placez la cage de la souris dans l’enceinte de biosécurité. Ouvrez la cage et attrapez doucement une souris donneuse par la queue et placez-la sur le support métallique au-dessus de la cage propre. Placez le couvercle de la cage sur le dessus du support et attendez que l’animal défèque.Recueillez les granulés fécaux et mettez-les dans un tube conique stérile de 50 millilitres. Tirez les granulés par sexe. Pesez à nouveau le tube et calculez le poids des granulés fécaux.Préparez une solution stérile en ajoutant une solution de glycérol à 10% à une solution saline normale. Ajouter 10 millilitres de cette solution dans le tube conique pour chaque gramme de granulés fécaux. Homogénéiser ce mélange à basse vitesse trois fois pendant 30 secondes à l’aide d’un homogénéisateur de paillasse à l’intérieur d’une hotte pour remettre les matières fécales en suspension.Filtrer la suspension fécale à travers deux couches de gaze de coton stérile. Conservez temporairement le filtrat au réfrigérateur jusqu’à six heures ou emballez-le dans des flacons cryogéniques stériles et conservez-le dans un congélateur à moins 80 degrés. Nettoyez soigneusement l’homogénéisateur ou le mélangeur en suivant une procédure standard.Décongeler la suspension fécale congelée sur la glace si vous utilisez des échantillons congelés. Mélanger la suspension fécale décongelée par vortex. Transférer la suspension fécale fraîche ou décongelée dans des seringues d’un millilitre.Pesez les souris et choisissez la bonne taille d’aiguille de gavage et le volume de dosage maximal. Testez l’aiguille de gavage en mesurant la longueur du bout du nez de la souris au bas du sternum. Remplissez la seringue avec 10% de glycérol dans une suspension saline ou fécale et éliminez les bulles d’air à l’intérieur de la seringue et de l’aiguille.Placez une cage de souris dans l’enceinte de biosécurité. Retirez le couvercle de la cage en plastique et laissez le support métallique en place. Ouvrez le rack métallique d’une seule main.Attrapez une souris par la queue et mettez-la sur le support en métal. Tenez la souris par la queue d’une main et utilisez le pouce et le majeur d’une autre main pour retenir l’animal en saisissant la peau par-dessus les épaules. Étendez doucement la tête de l’animal vers l’arrière et maintenez la tête en place d’une main.Placez l’aiguille de gavage sur le dessus de la langue à l’intérieur de la bouche. Avancez doucement le long de la palette supérieure jusqu’à ce que l’aiguille atteigne l’œsophage. Passez l’aiguille en douceur en un seul mouvement.Une fois que l’aiguille est correctement placée et vérifiée, administrez lentement le matériel en poussant la seringue attachée à l’aiguille. Après le dosage, retirez doucement l’aiguille. Marquez la souris et remettez-la dans sa cage d’origine.Surveillez l’animal pendant cinq à 10 minutes en recherchant des signes de respiration laborieuse ou de détresse. Surveiller à nouveau les souris entre 12 et 24 heures après la transplantation du microbiote fécal. Le dosage immunoenzymatique a révélé que le peptide natriurétique de type B était nettement élevé dans le plasma de souris déficientes en interleukine 10.Une transplantation de microbiote fécal de donneur sain a significativement atténué l’augmentation des taux de peptides natriurétiques de type B. L’échocardiographie a détecté une diminution significative de la fraction d’éjection du ventricule gauche chez les souris déficientes en interleukine 10 par rapport aux souris de type sauvage. La diminution a été significativement abrogée par la transplantation de microbiote fécal.Ces résultats suggèrent que la transplantation de microbiote fécal en bonne santé a atténué l’insuffisance cardiaque induite par la colite. Lorsque vous essayez le protocole, il est essentiel de choisir la bonne aiguille de gavage. Les sondes d’alimentation en plastique flexible pourraient être un meilleur choix pour les débutants.Il est également important de pratiquer la manipulation des animaux avant le gavage.

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Immunology and Infection

Immunologie et infection

Cette vidéo montre la méthode de génération d’une souris BLT (moelle, foie et thymus) osseuse doublement humanisée avec un système immunitaire humain fonctionnel et un microbiome intestinal stable de type humain.

Génération d’un modèle murin BLT (Os-Marrow, Foie, Thymus) doublement humanisé

Cette vidéo illustre une procédure de transplantation de microbiote fécal chez une souris déficiente en interleukine-10 avec une inflammation du côlon. Les microbes fécaux colonisés dans l’intestin libèrent des métabolites secondaires, provoquant la libération de cytokines anti-inflammatoires et réduisant l’inflammation du côlon.

Évaluation des effets de la transplantation de microbiote fécal chez une souris déficiente en interleukine-10

Fécale microbiote transplantation par coloscopie est un traitement sûr et efficace de l'infection à C. difficile récurrent et réfractaire. Une approche systématique de patient et la sélection des donneurs, la préparation des selles, et la livraison des selles pendant la coloscopie permettra de maximiser le succès thérapeutique.

Fécale microbiote transplantation par coloscopie pour Recurrent C. difficile Infection

Nous décrivons des méthodes de surveillance longitudinale de l’efficacité des traitements pour le traitement des pathologies du côlon chez la souris à l’aide d’un endoscope rigide. Ce protocole peut être facilement utilisé pour la caractérisation de la réponse thérapeutique d’une tumeur individuelle chez des souris vivantes et également pour le suivi d’une rechute potentielle de la maladie.

Évaluation non invasive de l&#39;efficacité de nouveaux traitements pour les pathologies intestinales en utilisant l&#39;imagerie endoscopique de série de souris vivantes

Ici, nous présentons un protocole pour induire une inflammation colique chez la souris par transfert adoptif de lymphocytes Tsyngéniques à haute teneur en CD4+CD45RB dans des receveurs déficients en lymphocytes T et B. Les caractéristiques cliniques et histopathologiques imitent les maladies inflammatoires de l’intestin humain. Cette méthode permet d’étudier l’initiation de l’inflammation colique et la progression de la maladie.

Induction de murin inflammation intestinale par transfert adoptif de effecteur CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Haute</sup&gt; T cellules dans des souris immunodéficientes

Nous décrivons une nouvelle méthode pour produire des blT-souris doublehumanisées qui comportent un système immunitaire humain fonctionnel et un microbiome d'intestin humain-comme un homme stable. Ce protocole peut être suivi sans avoir besoin de souris exemptes de germes ou d'installations gnotobiotiques.

Un modèle double humanisé DE BLT-souris avec un microbiome humain stable-comme l'intestin et le système immunitaire humain

Dans ce protocole, un modèle de colite adoptive de transfert de lymphocytes T spécifiques à l’antigène du microbiote intestinal est décrit. Les lymphocytes T CD4+ sont isolés à partir de souris transgéniques TCR CBir1. Ceux-ci sont spécifiques pour un antigène immunodominant du microbiote intestinal CBir1 flagellin, qui est transféré dans les souris Rag1-/- receveuses, entraînant une inflammation intestinale.

Induction de l’inflammation intestinale par transfert adoptif de lymphocytes T CD4+ transgéniques CBir1 TCR à des souris immunodéficientes

L’objectif ici est de définir un protocole pour étudier les mécanismes de la dysbiose dans les maladies cardiovasculaires. Cet article explique comment collecter et transplanter de manière aseptique des échantillons fécaux murins, isoler les intestins et utiliser la méthode « Swiss-roll », suivie de techniques d’immunomarquage pour interroger les changements dans le tractus gastro-intestinal.

Isolement fécal murin et transplantation de microbiote

Ce protocole démontre comment le modèle murin déficient en 5'-inositol phosphatase (5'-inositol phosphatase) de l’inflammation iléale et de la fibrose de type maladie de Crohn (MC) peut être utilisé pour tester de nouvelles thérapies pour la MC.

Évaluation des interventions thérapeutiques dans le modèle murin déficient en SHIP de l’iléite et de la fibrose semblables à la maladie de Crohn

Dans cette vidéo, nous démontrons la procédure d'activation de CD40-et à l'expansion des cellules B murines à partir de splénocytes de souris C57BL / 6, qui peut être utilisé comme un modèle de cellule présentatrice d'antigène (APC) pour étudier l'induction de l'immunité.

Modèle murin de CD40-activation des cellules B

Découvrez la transplantation de microbiote fécal par gavage oral chez des souris déficientes en interleukine 10. Cette méthode évalue son efficacité thérapeutique contre l'inflammation colique et les troubles cardiaques liés à la maladie inflammatoire de l'intestin.

Évaluation thérapeutique de la transplantation de microbiote fécal dans un modèle murin déficient en interleukine 10

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