Name: Transplantation de peau murine (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-16T10:34:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Découvrez la transplantation de peau murine allogénique entre les souches BALB/c et C57BL/6 pour étudier les réponses immunitaires et le rejet de greffe. Cette méthode standard évalue les stratégies d'induction de tolérance.

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NIH immunologie Subvention de formation T32 IA 60573 (ARK) et NIH GM 41514 (MDC)

Avant le début de l&#39;expérience: <ul><li> Obtenir l&#39;approbation du IACUC </li><li> Stériliser les instruments chirurgicaux et les Q-tips </li></ul> Tissu I. Récolte des donateurs <ol><li> Euthanasier souris donneuse (en conformité avec SOP institution) </li><li> Mouiller les cheveux en arrière de la base de l&#39;oreille avec de l&#39;alcool </li><li> La peau des bailleurs de fonds récolte en coupant l&#39;oreille à l&#39;arrêt de base </li><li> Placez le tissu de la plaque sur la glace </li><li> L&#39;oreille Split: pincez côtés ventral et dorsal de tissu à la base de l&#39;oreille avec le rat-dent de forceps; tirez doucement en dehors des tissus; tissus flottent dorsale, surface interne vers le bas, dans le PBS sur la glace; jetez collagènes rabat ventral </li></ol> II. Préparer Récipiendaire d&#39;une transplantation <ol><li> La souris en utilisant une procédure approuvée Anesthetize </li><li> Administrer analgésique pour soulager la douleur post-opératoire (c.-à 0,05-0,1 mg / g ip Bupernex) </li><li> Placez la souris en position latérale </li><li> Effectuer pincement de l&#39;orteil pour assurer des animaux est suffisamment sédation </li><li> Mouiller les cheveux avec de l&#39;alcool et raser le thorax </li><li> Essuyez la zone propre avec tampon imbibé d&#39;alcool </li></ol> III. Greffe de peau <ol><li> Faire une incision ~ 1 cm: la peau tente avec le rat-dent de pince et couper ~ 0.25 à 0,5 cm en dessous des pinces </li><li> Enlever la peau des bailleurs de fonds du CPE, place au sommet lit de greffe (avec une surface interne de la peau d&#39;oreille face à lit de greffe), et enlever l&#39;excédent avec du PBS stérile, Q-tip </li><li> Soigneusement rogner la peau donateurs excès de telle sorte que la transplantation est platement sein lit de greffe (en s&#39;assurant que les bords du greffon ne sont pas courbés sous et que la corruption ne fait pas la gueule de bois sur la peau du tronc destinataire) </li><li> Bénéficiaires Envelopper dans un bandage stérile (avec le segment de gaze non-adhésif placé sur la greffe de peau) </li><li> S&#39;assurer que le bandage est trop serré (évaluer la respiration des animaux) et que les armes sont librement mobiles </li><li> Bandage avec une seule suture de soie 2-0 </li><li> Placer dans des animaux en cage propre (sous la lampe de chauffage jusqu&#39;au animal a suffisamment récupéré de l&#39;anesthésie) </li><li> Moniteur bénéficiaires 1-2/day les signes de détresse et d&#39;administrer analgésique nécessaire pour soulager la douleur </li></ol> IV. Retrait Bandage (6-7 jours post-transplantation) <ol><li> La souris en utilisant une procédure approuvée Anesthetize </li><li> Couper et enlever suture de soie </li><li> Avec des ciseaux extrémité émoussée, soigneusement découpé par un bandage (en veillant à ne pas perturber la greffe) et retirez délicatement </li><li> Retour de la souris pour cage propre </li><li> Vérifiez greffe de ~ 8 heures après l&#39;enlèvement bandage pour des signes de croûtes ou de contraction. S&#39;il est présent, la greffe peut avoir omis de vasculariser et doit être considéré comme un échec technique. </li><li> Surveiller quotidiennement les signes de rejet (généralement définie comme une nécrose ~ 80% du tissu du donneur) </li><li> Greffes de peau allogénique seront généralement rejettent entre d8-12 post-op </li></ol> Conseils utiles V. <ol><li> Récolte tissu du donneur à proximité de la base de l&#39;oreille va: 1) de maximiser la taille du greffon, et 2) fournir un surplomb inégale ventrale qui facilitera fractionnement </li><li> Toujours utiliser une lame de rasoir neuve pour le rasage bénéficiaires </li><li> Si antalgique doit être donnée ip, administrer la procédure avant la greffe afin de minimiser la manipulation post-op (minimiser les risques de perturber la greffe) </li><li> Si possible, enlever les gants avant d&#39;appliquer le bandage. Gants tendance à coller le pansement et compliquent l&#39;application </li><li> Placer une suture simple à la fin pansement sera de minimiser le retrait prématuré </li><li> Enveloppez un bandage aussi serré que permise et évaluer la respiration Avant de placer de suture. Si le bandage est trop serré, animal arrêter de respirer. Si le bandage est trop lâche, animal sera le retirer. </li></ol>

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

Comme démontré dans cette vidéo l&#39;article, le modèle de greffe de peau est une méthode rapide et facile pour le contrôle des lymphocytes T allogéniques réponses. La peau de transplantation allogénique a une large gamme d&#39;applications et a été utilisée pour doser l&#39;efficacité d&#39;une variété d&#39;agents immunosuppresseurs et les protocoles d&#39;induction de tolérance, ainsi que pour étudier les effets biologiques des différents anticorps bloquants.

<table><tbody><tr><td>Pinces micro-dissection (courbées)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>Pinces à dents de rat (1x2 dents, droites)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td>n=2</td></tr><tr><td>Ciseaux de strabisme (extrémité émoussée)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinces à iris (courbées)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort (inclinés)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Porte-aiguille micro Halsey</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de 10 cm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Bupernex (chlorhydrate de buprénorphine)</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>517201</td><td></td></tr><tr><td>Seringues à insuline (29 Ga)</td><td>Monoject</td><td>8881 600145</td><td></td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>Solon Manufacturing Company</td><td>362</td><td></td></tr><tr><td>Lames de rasoir à bord unique (#9)</td><td>Smith &amp;amp; Nephew Inc.</td><td>67-0238</td><td></td></tr><tr><td>Filet de soie (2-0 ; PS-2)</td><td>Ethicon Inc.</td><td>583H</td><td></td></tr></tbody></table>

transplantation de peau murine

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Bienvenue dans le laboratoire du Dr Michael Kalen. Je suis Kim Gard. Aujourd'hui, nous allons démontrer un modèle de greffe cutanée utilisant la combinaison allogénique BC vers la souche black six, l'un des modèles les plus rigoureux et les moins difficiles sur le plan technique d'étude du rejet de greffe de tissu.La greffe de peau est une technique standard utilisée pour évaluer les réponses allogéniques et est couramment employée pour mesurer l'efficacité de diverses stratégies d'induction de tolérance. Commençons donc. Cette procédure débute par la récolte de la peau du souris donneur BAB.Tout d'abord, euthanasier le donneur conformément au P.O. du comité IACUC. Humidifier ensuite les poils à la base avec de l'alcool, prélever la peau en retirant l'oreille aussi près que possible de sa base et placer le prélèvement sur de la glace. Ensuite, diviser chaque oreille en deux, jeter le lambeau ventral collagèneux et faire flotter le tissu sur la glace.La peau du donneur est désormais prête à être transplantée. La procédure de transplantation commence par l'anesthésie de l'animal receveur selon des protocoles approuvés. Une fois que l'animal receveur est suffisamment anesthésié, sorte

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Biologie

Dans ce rapport, nous décrivons la peau en trois dimensions de reconstruire le modèle qui imite la peau humaine dans l'architecture et la composition. La physiologie des mélanocytes, la progression du mélanome et le destin des cellules souches dermiques ont été étudiés en utilisant la peau de reconstruire le modèle. Le modèle est également utile comme outil pour l'évaluation préclinique de médicaments.

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Analyse rapide de la génétique des épithélio-mésenchymateuse signalisation lors de la régénération des cheveux

Cette vidéo montre une méthode de greffe de peau humaine sur une souris immunodéficiente avec une réponse neutrophile supprimée. La méthode consiste à appliquer de la peau humaine d'épaisseur fendue sur le lit de greffe de la souris, à le sceller et à le recouvrir pour la récupération. Finalement, la peau humaine adhère à la peau de la souris, établissant la vascularisation et la circulation, ce qui permet une xénogreffe de peau réussie.

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