Transplantation de peau murine
16 janvier 2008
La transplantation allogénique de la peau est un modèle standard d'analyse des réponses des cellules T à l'hôte antigènes du donneur MHC-disparates. Cette vidéo-article fournit un tutoriel visuelle de chaque étape à effectuer une greffe BALB/c--> C57BL / 6 peau.
Bienvenue dans le laboratoire du Dr Michael Kalen. Je suis Kim Gard. Aujourd'hui, nous allons démontrer un modèle de greffe cutanée utilisant la combinaison allogénique BC vers la souche black six, l'un des modèles les plus rigoureux et les moins difficiles sur le plan technique d'étude du rejet de greffe de tissu.
La greffe de peau est une technique standard utilisée pour évaluer les réponses allogéniques et est couramment employée pour mesurer l'efficacité de diverses stratégies d'induction de tolérance. Commençons donc. Cette procédure débute par la récolte de la peau du souris donneur BAB.
Tout d'abord, euthanasier le donneur conformément au P.O. du comité IACUC. Humidifier ensuite les poils à la base avec de l'alcool, prélever la peau en retirant l'oreille aussi près que possible de sa base et placer le prélèvement sur de la glace. Ensuite, diviser chaque oreille en deux, jeter le lambeau ventral collagèneux et faire flotter le tissu sur la glace.
La peau du donneur est désormais prête à être transplantée. La procédure de transplantation commence par l'anesthésie de l'animal receveur selon des protocoles approuvés. Une fois que l'animal receveur est suffisamment anesthésié, sortez l'animal de la chambre et administrez du bup etnext par voie intrapéritonéale pour soulager la douleur.
Placer le receveur en position latérale et s'assurer que l'animal est complètement sédaté en effectuant une pincée au niveau de l'orteil. Pincer les poils mouillés avec de l'alcool et raser. Une fois le receveur correctement rasé, pratiquer une incision d'environ un à deux centimètres.
Placer le prélèvement donneur au-dessus de l'incision et retirer le liquide excédentaire à l’aide d’un coton-tige stérile. Ensuite, découper soigneusement l’excès de peau donneuse, l’animal et le pansement. S’assurer que le pansement n’est pas trop serré en évaluant la respiration, puis vérifier que les membres supérieurs sont libres de tout mouvement.
Fixez maintenant le pansement à l’aide d’un seul point de suture. Placez la souris dans une cage propre sous une lampe chauffante jusqu’à ce que l’animal se soit remis, pendant les premiers jours. Après la chirurgie, surveillez l’animal plusieurs fois par jour afin de détecter tout signe de détresse, et administrez du buprenex selon les besoins pour soulager la douleur.
Cinq à sept jours après la chirurgie, les pansements sont retirés. Je vais démontrer le retrait du pansement sur un receveur au sixième jour suivant la greffe. Une fois que la souris est complètement anesthésiée, retirez le point de suture et, à l’aide de ciseaux à bout rond, coupez délicatement le pansement et retirez-le en veillant à ne pas perturber la greffe.
Replacer l'animal dans une cage propre et surveiller quotidiennement les signes de rejet. Selon la combinaison de souches choisie, la plupart des greffes de peau sont rejetées, ce qui correspond généralement à une nécrose de 80 % entre le huitième et le douzième jour. Cette souris est au huitième jour postopératoire et a reçu des greffes bilatérales.
À gauche se trouve une greffe syngénique contrôle de souris black six, qui ne sera pas rejetée. À droite se trouve la greffe allogénique BAB/c, qui sera rejetée. Voici une autre greffe datée qui est en cours de rejet.
Enfin, une greffe de peau avec un donneur différent, qui est presque entièrement rejetée. Ainsi, ces trois exemples illustrent la variation normale des cinétiques de rejet de greffe cutanée. Dans l'expérience précédente, nous vous avons montré comment réaliser une greffe de peau en miroir.
Ce modèle constitue une méthode rapide et simple pour surveiller les réponses allogéniques et offre un large éventail d'applications. Par exemple, la greffe de peau peut être utilisée pour évaluer l'efficacité de divers agents immunosuppresseurs, d'anticorps bloquants et de protocoles d'induction de tolérance. Voilà tout.
Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.
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Aperçu
Cet article vidéo propose un tutoriel visuel sur la réalisation d'un modèle de greffe cutanée utilisant la combinaison de souches allogéniques BALB/c vers C57BL/6. Ce modèle est essentiel pour l'étude des réponses des lymphocytes T de l'hôte aux antigènes donneurs de CMH différents.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neurosciences
- Immunologie
- Biologie de la transplantation
Contexte
- La greffe de peau est une technique standard pour évaluer les réponses allogéniques.
- Ce modèle est l'un des moins complexes sur le plan technique pour l'étude du rejet de greffe de tissu.
- Il est couramment utilisé pour évaluer diverses stratégies d'induction de tolérance.
- L'étude implique l'utilisation de souches spécifiques de souris pour la greffe.
Objectif de l'étude
- Démontrer la procédure de transplantation cutanée.
- Fournir un guide visuel aux chercheurs intéressés par les réponses allogéniques.
- Faciliter la compréhension des aspects techniques de la procédure.
Méthodes utilisées
- Prélèvement de la peau d'une souris donneuse BALB/c.
- Réalisation de la greffe sur une souris receveuse C57BL/6.
- Surveillance des réponses des lymphocytes T de l'hôte après la greffe.
- Utilisation d'un format vidéo pour améliorer l'apprentissage et la compréhension.
Résultats principaux
- Démonstration réussie de la procédure de greffe cutanée.
- Représentation visuelle des étapes impliquées dans le processus.
- Connaissances approfondies sur la réponse immunitaire déclenchée par le tissu greffé.
- Évaluation de l'efficacité du modèle pour l'étude du rejet de greffe.
Conclusions
- La vidéo constitue une ressource précieuse pour les chercheurs en biologie de la transplantation.
- Elle souligne l'importance du modèle BALB/c vers C57BL/6 dans les études immunologiques.
- Le tutoriel aide à comprendre les complexités de la greffe de peau allogénique.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
La greffe cutanée chez les modèles murins fournit un système rigoureux mais techniquement accessible pour évaluer les réponses des lymphocytes T de l'hôte aux antigènes de CMH différents, soutenant directement la validation ciblée en découverte de médicaments immunomodulateurs. Cet essai permet une détection mécanistique des risques en quantifiant la cinétique du rejet allogénique, guidant ainsi les décisions d'aller ou de ne pas aller de l'avant concernant les agents immunosuppresseurs et les stratégies d'induction de tolérance. Sa reproductibilité et ses mesures quantitatives de la survie du greffon renforcent la fiabilité prédictive des pipelines précliniques en immunologie.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Découverte précoce et validation de cibles
- Valeur scientifique : Interroge des hypothèses thérapeutiques en mesurant le rejet de greffon médié par les lymphocytes T comme indicateur fonctionnel de la réponse allogénique.
- Valeur opérationnelle : Permet une évaluation rapide de l'engagement de la cible pour les immunomodulateurs à l'aide d'un modèle chirurgical standardisé.
- Valeur prédictive : Facilite le tri du portefeuille en corrélant la survie du greffon avec le mécanisme d'action dans les voies d'induction de la tolérance.
Développement de criblages et de tests
- Prêt de l'essai : Génère des paramètres quantitatifs basés sur la nécrose (par exemple, 80 % de nécrose entre les jours 8 et 12) pour le criblage de composés.
- Reproductibilité : Des protocoles standardisés de prélèvement et de transplantation assurent une prise constante des greffons d'une expérience à l'autre.
- Extensibilité : La courte durée de la procédure (<10 min) et sa faible complexité technique permettent l'évaluation à haut débit de candidats.
Recherche translationnelle et préclinique
- Pertinence pour la maladie : Modélise le rejet allogénique humain, permettant l'évaluation préclinique de régimes immunosuppresseurs.
- Continuité translationnelle : Assure le passage de la découverte à la validation préclinique en fournissant un test fonctionnel de réponse immunitaire.
- Décisions adaptées au risque : La cinétique du rejet guide le choix de la dose et l'ajustement du calendrier pour les candidats thérapeutiques.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Le test de greffe cutanée s'inscrit dans le continuum de découverte allant de la validation de la cible à l'optimisation du composé candidat, en fournissant des données sur la réponse immunitaire à des points de décision cruciaux.
- Découverte en biologie : Évalue la modulation des réponses allogéniques médiée par la cible, permettant de préciser le rôle des voies impliquées dans le rejet de greffe.
- Écrantage : Fournit des mesures quantitatives de la survie de la greffe, permettant la comparaison de différents candidats immunosuppresseurs.
- Analytique : Génère des scores de délai de rejet et de nécrose, facilitant l'analyse statistique des effets des traitements.
- Recherche translationnelle : Relie les découvertes mécanistiques aux résultats précliniques grâce à une évaluation standardisée du rejet.
- Réutilisation en entreprise : Met en place une plateforme d'immunologie réutilisable pour évaluer plusieurs modalités thérapeutiques dans divers projets.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Fournit des éclaircissements mécanistiques sur le rejet induit par les lymphocytes T, réduisant ainsi l'ambiguïté concernant les mécanismes des immunomodulateurs.
- Valeur opérationnelle : Propose un test standardisé, peu exigeant sur le plan technique, et présentant une forte reproductibilité entre les expériences.
- Valeur stratégique : Améliore l'efficacité des décisions « aller/ne pas aller » en prédisant précocement le potentiel immunosuppresseur clinique.
- Impact sur le portefeuille : Permet une priorisation ajustée au risque en se basant sur la cinétique quantitative du rejet et la modulation de la cible.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en chirurgie murine et en technique aseptique pour le prélèvement cutané et la pose de greffons.
- Dépend de l'utilisation de microscopes stéréoscopiques, d'instruments de suture et de conditions environnementales contrôlées (par exemple, lampes chauffantes) pour les soins postopératoires.
- Exige des protocoles normalisés d'évaluation de la nécrose du greffon afin d'assurer la comparabilité entre équipes.
- Doit tenir compte de la cinétique de rejet propre à chaque souche lors de la transposition des résultats entre systèmes modèles.
- Limité à l'évaluation des réponses médiées par les lymphocytes T ; ne prend pas en compte les mécanismes immunitaires innés ou dépendants des anticorps sans modification.
