Utilisation d’une injection de traceur cellulaire pour étudier l’origine des cellules formant neointima dans un modèle de paroi latérale sacculaire de rat

En utilisant une application directe de traceur cellulaire intra-aortal, nous pouvons analyser le rôle des cellules endothéliales provenant de l’artère mère dans la formation de néoinntima à deux moments différents. Un grand avantage de cette technique est une injection in vivo directe, en un point, interprétative qui fait de ce modèle une technique robuste et reproductible. Avant la chirurgie, incuber les poches artérielles de rats donneurs dans du dodécylsulfate de sodium à 0,1% pendant 10 heures à 37 degrés Celsius pour obtenir des anévrismes décellularisés.

Prélevez ces poches sur des animaux donneurs quelques jours avant la chirurgie. Pour commencer, analysez le comportement de l’animal et inspectez les muqueuses et la turgescence dans le cadre de l’examen clinique préopératoire. Notez le poids de chaque animal.

Pour l’induction de l’anesthésie, placez tous les rats dans une boîte propre contenant de l’oxygène jusqu’à la perte de conscience après cinq à 10 minutes. Vérifiez la profondeur de l’anesthésie par l’absence du réflexe de retrait de la pédale. Placez les rats en position couchée et rasez la région thoraco-abdominale avec un rasoir électrique.

À l’aide de ruban adhésif, fixez les pattes du rat sur une planche recouverte d’un coussin chauffant relié à une sonde rectale à régulation automatique. Insérez la sonde rectale dans l’anus du rat pour maintenir la température souhaitée de 37 degrés Celsius à l’aide d’un coussin chauffant. Installez ensuite un capteur sur la patte arrière droite relié à un système informatisé pour vérifier les signes vitaux en peropératoire.

Pour les soins périanesthésiques, appliquez un lubrifiant ophtalmique stérile sur les yeux et couvrez-les d’un masque en aluminium opaque pour éviter le dessèchement et les dommages causés par la lampe chirurgicale. Désinfectez le champ chirurgical avec de l’iode povidone et drapez le champ chirurgical de manière stérile. Placez un micro-écouvillon avec un rembourrage violet sous les parties proximale et distale de l’aorte pour mieux visualiser l’artère dès qu’elle est séparée de la veine cavale.

Ensuite, protégez l’abdomen avec de la gaze blanche. Le jour de l’opération, dissoudre deux microlitres du traceur cellulaire par pipetage dans un millilitre de PBS. Transférer le mélange dans une seringue d’un millilitre munie d’une canule.

Éteignez la lumière dans la salle d’opération. À l’aide d’un microscope, effectuez l’injection en un point dans la partie ventrale moyenne de l’aorte avec des micro-pinces et injectez soigneusement un millilitre de solution saline héparinisée à 0,9%. Injectez soigneusement le traceur de cellules et éteignez immédiatement le microscope opératoire.

Protégez à nouveau l’abdomen avec de la gaze humide. Laissez le colorant incuber pendant au moins 15 minutes. Allumez ensuite le microscope et les lumières de la salle d’opération.

Utilisez des micro-pinces et des micro ciseaux pour effectuer l’artériotomie longitudinale afin que sa longueur soit en moyenne du diamètre de l’anévrisme récolté. Placez l’anévrisme à côté de l’aorte avant d’effectuer une artériotomie pour vous assurer de la longueur correcte. Suturez l’anévrisme avec huit à 10 points de suture simples à l’aide d’une suture 10-0 non résorbable.

Avant le point final, livrer la bobine avec une densité d’emballage d’un centimètre. Un traitement par bobine ou stent peut être effectué dans ce modèle. Ensuite, retirez soigneusement les pinces temporaires, en commençant distalement, sous irrigation continue avec une solution saline héparinisée.

Fermez la plaie de manière stratifiée. À la fin de la chirurgie, inverser l’anesthésie avec une injection sous-cutanée. Laissez chaque animal opéré récupérer dans une cage propre jusqu’à ce qu’il soit complètement éveillé et chaud au besoin avec une lampe chauffante.

Les volumes d’anévrisme de base tirés pour le septième jour et le jour 21 ne différaient pas de manière significative pour les anévrismes décellularisés ou vitaux entre les groupes de traitement par bobine ou stent. Les volumes de FU tirés pour les anévrismes décellularisés ont montré une croissance non significative de l’anévrisme enroulé par rapport aux anévrismes stentés. Le volume de FU tiré était significativement plus élevé dans le groupe enroulé vital que dans le groupe stent.

Les quantités de cellules positives du traceur cellulaire dans le néointame des anévrismes décellularisés ne différaient pas significativement entre les groupes d’endoprothèses ou les groupes traités enroulés au septième jour FU, mais étaient significativement plus élevées chez les rats stentés au jour 21 FU.No des différences significatives ont été notées chez les rats suturés à anévrisme vital à sept jours ou 21 jours FU.In anévrismes décellularisés à sept jours FU, significativement plus de cellules positives de traceurs cellulaires sont restées dans le thrombus du stent traité par rapport au groupe traité par bobine. Cette différence n’a pas été observée dans les anévrismes vitaux à sept jours FU. N’oubliez pas de toujours éteindre les lumières de la salle d’opération avant d’injecter le traceur de cellules pour éviter la décoloration. En outre, laissez incuber le colorant pendant au moins 15 minutes.