Name: Fabrication d’une puce à micro-motifs avec épaisseur contrôlée pour la microscopie électronique cryogénique à haut débit (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-21T13:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 20 s
Description: Découvrez la fabrication de puces à micro-motifs avec fenêtres en oxyde de graphène pour la microscopie électronique cryogénique. Cette méthode MEMS permet l'imagerie à haut débit de biomolécules et de nanomatériaux pour la découverte de médicaments.

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M.-H.K., S.K., M.L. et J.P. reconnaissent le soutien financier de l’Institute for Basic Science (Grant No. IBS-R006-D1). S.K., M.L. et J.P. reconnaissent le soutien financier du Creative-Pioneering Researchers Program par l’intermédiaire de l’Université nationale de Séoul (2021) et la subvention NRF financée par le gouvernement coréen (MSIT; N° de concession NRF-2020R1A2C2101871 et NRF-2021M3A9I4022936). M.L. et J.P. reconnaissent le soutien financier de la bourse scientifique POSCO de la FONDATION POSCO TJ Park et la subvention NRF financée par le gouvernement coréen (MSIT; N° de subvention NRF-2017R1A5A1015365). J.P. reconnaît le soutien financier de la subvention NRF financée par le gouvernement coréen (MSIT; N° de subvention NRF-2020R1A6C101A183), et les programmes d’initiatives de recherche interdisciplinaires du Collège d’ingénierie et du Collège de médecine, Université nationale de Séoul (2021). M.-H.K. reconnaît le soutien financier de la subvention NRF financée par le gouvernement coréen (MSIT; N° de subvention NRF-2020R1I1A1A0107416612). Les auteurs remercient le personnel et l’équipage du Centre d’imagerie macromoléculaire et cellulaire de l’Université nationale de Séoul (SNU CMCI) pour leurs efforts inlassables et leur persévérance dans les expériences cryo-EM. Les auteurs remercient S. J. Kim du National Center for Inter-university Research Facilities pour son aide dans les expériences FIB-SEM.

1. Fabrication d’une puce à micro-motifs avec des fenêtres GO (Figure 1)
<ol><li>Déposez le nitrure de silicium.<ol><li>Déposer du nitrure de silicium à faible contrainte (SixNy) des deux côtés de la plaquette de Si (4 pouces de diamètre et 100 μm d’épaisseur) en utilisant un dépôt chimique en phase vapeur à basse pression (LPCVD) à 830 °C et une pression de 150 mTorr, sous un débit de 170 sccm de dichlorosilane (SiH2Cl2, DCS) et de 38 sccm d’ammoniac (NH3).</li>
		<li>À l’aide d’un taux de dépôt d’environ 30 Å/min, contrôlez l’épaisseur de SixNy à l’intérieur de 25-100 nm en faisant varier le temps de dépôt. REMARQUE: Des précautions extrêmes doivent être prises lors de la manipulation de la plaquette Si car la plaquette est très mince et fragile. Veillez à ne pas plier la plaquette lors de sa manipulation ou de son chargement dans l’équipement.</li>
	</ol></li>
	<li>Motif de la résine photosensible.<ol><li>Appliquer une solution d’hexaméthyldisilazane (HMDS) sur la plaquette de SixNy déposée avec un volume suffisant pour couvrir toute la surface de la plaquette, spin coat avec un spin coater à 3 000 tr/min pendant 30 s, et cuire à 95°C pendant 30 s sur une plaque chauffante pour rendre la surface de la plaquette hydrophobe et ainsi assurer une bonne performance de revêtement avec photorésine (PR).</li>
		<li>Appliquer un PR positif (Table des matériaux) avec un volume suffisant pour couvrir toute la surface de la plaquette, faire tourner la couche à 3 000 tr/min pendant 30 s et cuire au four à 100 °C pendant 90 s sur une plaque chauffante. Le PR à revêtement de spin a une épaisseur de 500 nm.</li>
		<li>Exposer la plaquette revêtue de PR avec de la lumière ultraviolette (longueur d’onde de 365 nm et intensité de 20 mW/cm2) pendant 5 s à travers un masque de chrome (Figure 2A-D) à l’aide d’un aligneur.</li>
		<li>Développez le PR pendant 1 min à l’aide d’un révélateur (Table des matériaux) et rincez la plaquette en l’immergeant dans de l’eau désionisée (DI) 2x. Séchez complètement la plaquette à motif PR en soufflant du gaz N2 sur la surface de la plaquette. REMARQUE: Des précautions extrêmes doivent être prises lors du soufflage du gaz N2 sur la plaquette Si car la plaquette est très mince et fragile. Ne soufflez pas le gaz N2 à haute pression dans une direction perpendiculaire à la plaquette, car cela pourrait provoquer la rupture de la plaquette.</li>
	</ol></li>
	<li>Motif le SixNy.<ol><li>Gravez le SixNy exposé selon le modèle du PR à l’aide d’un graveur d’ions réactifs (RIE) construit en laboratoire, avec 3 sccm d’hexafluorure de soufre (SF6) de gaz à une puissance de radiofréquence (RF) de 50 W. Le taux de gravure avec ces paramètres est d’environ 6 Å / s. Réglez le temps de gravure en fonction de l’épaisseur de la couche SixNy déposée. REMARQUE: Le taux de gravure peut varier et nécessiter une optimisation en laboratoire en fonction des spécifications de l’équipement RIE utilisé.</li>
		<li>Éliminez le PR en immergeant la plaquette à motifs SixNy dans de l’acétone à température ambiante pendant 30 min, puis en rinçant la plaquette en l’immergeant dans de l’eau DI 2x. Sécher complètement la plaquette en soufflant du gazN2 sur la surface de la plaquette. REMARQUE: Des précautions extrêmes doivent être prises lors de l’immersion ou du retrait de la plaquette des solutions, car la plaquette peut être fracturée par la tension superficielle de la solution. Ne pas immerger ou retirer la plaquette parallèlement à la surface de la solution. Utilisez des pinces à épiler de précision avec des embouts en fibre de carbone. Ne saisissez pas fortement la plaquette avec la pince à épiler; soulevez un côté de la plaquette jusqu’à ce que la plaquette s’incline à un angle, où elle peut être retirée de la solution. La plaquette peut se fracturer lorsqu’elle se plie en raison de la prise ferme pendant le levage.</li>
	</ol></li>
	<li>Graver le Si.<ol><li>Préparer une solution d’hydroxyde de potassium (KOH) de 1,5 M en dissolvant la poudre de KOH dans de l’eau DI à 80 °C.</li>
		<li>Immerger la plaquette à motifs SixNy dans une solution KOH pour graver le Si exposé. Laissez la plaquette dans la solution en remuant jusqu’à ce que les fenêtres SixNy autoportantes puissent être observées du côté opposé du SixNy à motifs. REMARQUE: Le temps de gravure humide peut varier en fonction de l’épaisseur du Si; pour une plaquette de 100 μm d’épaisseur, la gravure humide prend normalement plusieurs heures. Ne réglez pas la vitesse d’agitation trop élevée pendant la gravure Si car les fenêtres SixNy autoportantes sont très minces et peuvent être fracturées par l’écoulement du fluide. Dans cette expérience, la vitesse d’agitation a été réglée à 250 tr / min.</li>
		<li>Nettoyez la plaquette gravée en la trempant plusieurs fois dans un bain-marie DI pour éliminer les résidus de gravure. Sécher la plaquette à l’air. REMARQUE: Des précautions extrêmes doivent être prises lors de l’immersion ou du retrait de la plaquette à motifs Si des solutions, car les fenêtres autoportantes SixNy sont très minces et fragiles et peuvent être fracturées par la tension superficielle de la solution. La plaquette doit être immergée ou retirée à un angle tel que le bord de la plaquette entre et sorte d’abord dans la solution.</li>
	</ol></li>
	<li>Éliminez les résidus de gravure KOH.<ol><li>Appuyez légèrement sur les limites du réseau de puces à l’aide d’une pince à épiler pour obtenir un réseau de puces qui seront micro-modelées (Figure 1B).</li>
		<li>Préparer 1,5 M de solution de KOH à 80 °C en remuant.</li>
		<li>Immergez le réseau de puces dans la solution KOH pendant 30 s et rincez-le en le trempant dans de l’eau DI 2x. Séchez complètement les copeaux en soufflant du gaz N2 . REMARQUE: Des précautions extrêmes doivent être prises lors de la trempation des copeaux dans des solutions et de leur séchage avec du gaz N2 , car les fenêtres autoportantes SixNy sont très minces et fragiles. Pendant que la puce est immergée dans la solution KOH, l’agitation doit être arrêtée. Les copeaux doivent être trempés avec leurs bords d’abord dans la direction perpendiculaire à la solution et soufflés avec du gazN2 dans la direction parallèle.</li>
		<li>Sécher complètement le réseau de puces dans l’air pendant au moins 1 h.</li>
	</ol></li>
	<li>Modélisez le PR.<ol><li>Préparez une plaquette de Si vierge de 525 μm comme support solide. Enduire la plaquette Si avec HMDS et PR positif, comme décrit ci-dessus, mais attacher le réseau de puces (avec la fenêtre SixNy autoportante vers le haut) sur la plaquette Si avant de cuire la PR. Le PR agit comme un adhésif entre la plaquette et le réseau de puces. Cuire la plaquette De Si fixée avec le réseau de puces à 100 °C pendant 90 s sur une plaque chauffante.</li>
		<li>Spin coat le jeu de puces avec HMDS et PR positif, comme décrit ci-dessus.</li>
		<li>Exposez le jeu de puces avec de la lumière ultraviolette (longueur d’onde de 365 nm; intensitéde 20 mW/cm2) pendant 5 s à travers un masque de chrome (Figure 2E,F) à l’aide d’un aligneur.</li>
		<li>Développez le PR à l’aide d’un révélateur pendant 15 s, rincez le jeu de copeaux en le trempant dans de l’eau DI 2x et séchez complètement le jeu de copeaux à motif PR en soufflant du gaz N2 .</li>
	</ol></li>
	<li>Préparez le micro-motif SixNy.<ol style="margin-left: 40px;"><li>Etch SixNy suivant le modèle PR à l’aide d’un RIE construit en laboratoire, avec 3 sccm SF6 gaz à une puissance RF de 50 W. Contrôlez le temps de gravure en fonction de l’épaisseur de la couche SixNy .</li>
	</ol></li>
	<li>Éliminez le PR.<ol><li>Éliminez le PR en immergeant le jeu de copeaux à motifs dans une solution de 1-méthyl-2-pyrrolidinone (NMP) à 60 °C et en le laissant toute la nuit. Rincez le jeu de copeaux en le trempant dans de l’eau DI 2x, et séchez complètement le jeu de copeaux à motifs en soufflant du gaz N2 .</li>
		<li>Éliminez les résidus PR avec un procédé plasma O2 utilisant 100 sccm O2 gaz à une puissance RF de 150 W pendant 1 min avec le RIE construit en laboratoire.</li>
	</ol></li>
	<li>Rincez la puce à micro-motifs.<ol><li>Préparer une solution de KOH de 1,5 M à 80 °C.</li>
		<li>Immergez les puces à micro-motifs dans une solution KOH pendant 30 s pour éliminer complètement les résidus PR et rincez les puces en les immergeant dans de l’eau DI 2x. Séchez complètement les copeaux en soufflant du gaz N2 .</li>
		<li>Sécher complètement les copeaux à l’air pendant au moins 1 h.</li>
	</ol></li>
	<li>Transférer l’oxyde de graphène (GO) par la méthode de coulée goutte à goutte.<ol><li>Diluer la solution de GO (2 mg/mL) à 0,2 mg/L avec de l’eau DI et du sonicate pendant 10 min pour briser les agrégats de feuilles de GO. Centrifuger la solution de GO diluée à 300 x g pendant 30 s.</li>
		<li>Déchargez le côté gravé en Si de la puce à micro-motifs pour rendre la surface de la puce avec une charge positive à l’aide d’un déchargeur luminescent (Table des matériaux) à 15 mA pendant 1 min.</li>
		<li>Déposer 3 μL de la solution GO sur le côté déchargé de lueur de la puce à micro-motifs et laisser la goutte sur la puce pendant 1 min. Après 1 min, épongez l’excès de solution GO sur la puce avec du papier filtre.</li>
		<li>Lavez la puce transférée go avec des gouttelettes d’eau DI préparées sur un film de paraffine et épongez l’eau DI sur la puce avec du papier filtre. Répétez cette procédure 2x sur le côté transféré GO et 1x sur le côté opposé. Séchez la puce transférée go à température ambiante pendant la nuit.</li>
		<li>Lavez la puce à micro-motifs avec des fenêtres GO en l’immergeant dans l’eau DI et séchez la puce avec du gaz N2 .</li>
	</ol></li>
</ol>2. Imagerie cryo-EM
<ol><li>Préparez le cryo-échantillon.<ol><li>Préparez le cryo-échantillon à l’aide d’une machine de cryo-plongée mécanique (Table des matériaux), qui contrôle la température, l’humidité, le temps d’effacement et la force. Après avoir chargé le tampon sur les buvards, assurez-vous que l’humidité et la température dans la chambre sont maintenues à 100% et 15 ° C, respectivement.</li>
		<li>Prenez la puce à micro-motifs avec une cryo-pince typique et chargez la pince à épiler sur la machine à cryo-plongeage. Pipet 3 μL de solution d’échantillon sur la puce à micro-motifs du côté à motif de trou, avec des fenêtres GO sur le fond. Contrôlez le temps de transfert et la force en fonction de la solution d’échantillon. NOTE: Ici, des échantillons biologiques, à savoir le virus de l’immunodéficience humaine (VIH-1), la ferritine, le protéasome 26S, le groEL, les particules de protéine d’apoferritine et les protéines de filament tau ont été utilisés pour l’imagerie cryo-EM. En outre, divers types de matériaux inorganiques, tels que les nanoparticules Fe2O3 (NP), les nanoparticules Au, les nanotiges Au et les nanoparticules de silice, ont été utilisés pour l’imagerie cryo-EM. Le temps et la force de transfert souhaités ont été réglés sur le piston cryogénique pour différents types d’échantillons.</li>
		<li>Après le processus de buvardage, geler immédiatement la puce chargée de l’échantillon dans de l’éthane liquide. Transférez la puce dans la boîte de grille dans de l’azote liquide (LN2) et stockez-la dans LN2 avant l’imagerie cryo-EM.</li>
	</ol></li>
	<li>Effectuer une imagerie cryo-EM.<ol><li>Chargez le cryo-échantillon sur un support cryo-EM avec la température maintenue à -180 °C.</li>
		<li>Chargez le support cryo-EM dans un TEM et observez les échantillons avec le mode système de dose minimale (MDS).</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Dillard, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+applications+at+the+cutting+edge+of+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+and+Microanalysis%22%5BJournal%5D)">Biological applications at the cutting edge of cryo-electron microscopy.</a> Microscopy and Microanalysis. 24 (4), 406-419 (2018).</li>
<li>Meyerson, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembled+monolayers+improve+protein+distribution+on+holey+carbon+cryo-EM+supports%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Self-assembled monolayers improve protein distribution on holey carbon cryo-EM supports.</a> Scientific Reports. 4, (2014).</li>
<li>Palovcak, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+robust+procedure+for+preparing+graphene-oxide+cryo-EM+grids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Structural+Biology%22%5BJournal%5D)">A simple and robust procedure for preparing graphene-oxide cryo-EM grids.</a> Journal of Structural Biology. 204 (1), 80-84 (2018).</li>
<li>Xu, B. J., Developments Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((applications%2C+and+prospects+of+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Science%22%5BJournal%5D)">applications, and prospects of cryo-electron microscopy.</a> Protein Science. 29 (4), 872-882 (2020).</li>
<li>Stewart, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+microscopy+and+cryo-electron+tomography+of+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdisciplinary+Reviews-Nanomedicine+and+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron microscopy and cryo-electron tomography of nanoparticles.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews-Nanomedicine and Nanobiotechnology. 9 (2), (2017).</li>
<li>Murata, K., Wolf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+microscopy+for+structural+analysis+of+dynamic+biological+macromolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+Et+Biophysica+Acta-General+Subjects%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron microscopy for structural analysis of dynamic biological macromolecules.</a> Biochimica Et Biophysica Acta-General Subjects. 1862 (2), 324-334 (2018).</li>
<li>Darrow, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chameleon%3A+next+generation+sample+preparation+for+cryoEM+based+on+spotiton%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallographica+a-Foundation+and+Advances%22%5BJournal%5D)">Chameleon: next generation sample preparation for cryoEM based on spotiton.</a> Acta Crystallographica a-Foundation and Advances. 75, 424(2019).</li>
<li>Hite, R. K., Tao, X., MacKinnon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+for+gating+the+high-conductance+Ca2%2B-activated+K%2B+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural basis for gating the high-conductance Ca2+-activated K+ channel.</a> Nature. 541 (7635), 52-57 (2017).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-EM+structure+of+the+activated+GLP-1+receptor+in+complex+with+a+G+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cryo-EM structure of the activated GLP-1 receptor in complex with a G protein.</a> Nature. 546 (7657), 248-253 (2017).</li>
<li>Shaik, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+coreceptor+recognition+by+HIV-1+envelope+spike%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural basis of coreceptor recognition by HIV-1 envelope spike.</a> Nature. 565 (7739), 318-323 (2019).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+architecture+of+inactivated+SARS-CoV-2+with+postfusion+spikes+revealed+by+cryo-EM+and+cryo-ET%5BTitle%5D)+AND+%22Structure%22%5BJournal%5D)">The architecture of inactivated SARS-CoV-2 with postfusion spikes revealed by cryo-EM and cryo-ET.</a> Structure. 28 (11), 1218-1224 (2020).</li>
<li>Ren, X. C., Zhang, X. Q., Xu, R., Huang, J. Q., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+energy+materials+by+cryogenic+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Analyzing energy materials by cryogenic electron microscopy.</a> Advanced Materials. 32 (24), 1908293(2020).</li>
<li>Li, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atomic+structure+of+sensitive+battery+materials+and+Interfaces+revealed+by+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Atomic structure of sensitive battery materials and Interfaces revealed by cryo-electron microscopy.</a> Science. 358 (6362), 506-510 (2017).</li>
<li>Li, Y. B., Huang, W., Li, Y. Z., Chiu, W., Cui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opportunities+for+cryogenic+electron+microscopy+in+materials+science+and+nanoscience%5BTitle%5D)+AND+%22Acs+Nano%22%5BJournal%5D)">Opportunities for cryogenic electron microscopy in materials science and nanoscience.</a> Acs Nano. 14 (8), 9263-9276 (2020).</li>
<li>Kim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uniform+synthesis+of+palladium+species+confined+in+a+small-pore+zeolite+via+full+ion-exchange+investigated+by+cryogenic+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry+A%22%5BJournal%5D)">Uniform synthesis of palladium species confined in a small-pore zeolite via full ion-exchange investigated by cryogenic electron microscopy.</a> Journal of Materials Chemistry A. 9 (35), 19796-19806 (2021).</li>
<li>Baumgartner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleation+and+growth+of+magnetite+from+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Materials%22%5BJournal%5D)">Nucleation and growth of magnetite from solution.</a> Nature Materials. 12 (4), 310-314 (2013).</li>
<li>Rice, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Routine+determination+of+ice+thickness+for+cryo-EM+grids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Structural+Biology%22%5BJournal%5D)">Routine determination of ice thickness for cryo-EM grids.</a> Journal of Structural Biology. 204 (1), 38-44 (2018).</li>
<li>D'Imprima, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+denaturation+at+the+air-water+interface+and+how+to+prevent+it%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Protein denaturation at the air-water interface and how to prevent it.</a> Elife. 8, 42747(2019).</li>
<li>Alden, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-EM-on-a-chip%3A+custom-designed+substrates+for+the+3D+analysis+of+macromolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Cryo-EM-on-a-chip: custom-designed substrates for the 3D analysis of macromolecules.</a> Small. 15 (21), 1900918(2019).</li>
<li>Naydenova, K., Peet, M. J., Russo, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifunctional+graphene+supports+for+electron+cryomicroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Multifunctional graphene supports for electron cryomicroscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (24), 11718-11724 (2019).</li>
<li>Kang, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graphene+oxide-supported+microwell+grids+for+preparing+cryo-EM+samples+with+controlled+ice+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Graphene oxide-supported microwell grids for preparing cryo-EM samples with controlled ice thickness.</a> Advanced Materials. 33 (43), 2102991(2021).</li>
<li>Johra, F. T., Lee, J. W., Jung, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facile+and+safe+graphene+preparation+on+solution+based+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Industrial+and+Engineering+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Facile and safe graphene preparation on solution based platform.</a> Journal of Industrial and Engineering Chemistry. 20 (5), 2883-2887 (2014).</li>
<li>Yang, C., Pham, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristic+study+of+silicon+nitride+films+deposited+by+LPCVD+and+PECVD%5BTitle%5D)+AND+%22Silicon%22%5BJournal%5D)">Characteristic study of silicon nitride films deposited by LPCVD and PECVD.</a> Silicon. 10 (6), 2561-2567 (2018).</li>
<li>Olson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+LPCVD+process+conditions+for+the+deposition+of+low+stress+silicon+nitride.+Part+I%3A+preliminary+LPCVD+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Science+in+Semiconductor+Processing%22%5BJournal%5D)">Analysis of LPCVD process conditions for the deposition of low stress silicon nitride. Part I: preliminary LPCVD experiments.</a> Materials Science in Semiconductor Processing. 5 (1), 51-60 (2002).</li>
<li>Zheng, B. R., Zhou, C., Wang, Q., Chen, Y. F., Xue, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deposition+of+low+stress+silicon+nitride+thin+film+and+its+application+in+surface+micromachining+device+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Materials+Science+and+Engineering%22%5BJournal%5D)">Deposition of low stress silicon nitride thin film and its application in surface micromachining device structures.</a> Advances in Materials Science and Engineering. 2013, 835942(2013).</li>
<li>Chuang, W. H., Fettig, R. K., Ghodssi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+electrostatic+actuator+for+fatigue+testing+of+low-stress+LPCVD+silicon+nitride+thin+films%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+and+Actuators+a-Physical%22%5BJournal%5D)">An electrostatic actuator for fatigue testing of low-stress LPCVD silicon nitride thin films.</a> Sensors and Actuators a-Physical. 121 (2), 557-565 (2005).</li>
<li>Shafikov, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strengthening+ultrathin+Si3N4+membranes+by+compressive+surface+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+and+Actuators+a-Physical%22%5BJournal%5D)">Strengthening ultrathin Si3N4 membranes by compressive surface stress.</a> Sensors and Actuators a-Physical. 317, 112456(2021).</li>
<li>Ng, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+and+modelling+the+wetting+properties+of+III-V+semiconductor+surfaces+using+re-entrant+nanostructures%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Controlling and modelling the wetting properties of III-V semiconductor surfaces using re-entrant nanostructures.</a> Scientific Reports. 8, 3544(2018).</li>
<li>Han, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanopore-templated+silver+nanoparticle+arrays+photopolymerized+in+zero-mode+waveguides%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Nanopore-templated silver nanoparticle arrays photopolymerized in zero-mode waveguides.</a> Frontiers in Chemistry. 7, 216(2019).</li>
<li>Escobedo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On-chip+nanohole+array+based+sensing%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">On-chip nanohole array based sensing: a review.</a> Lab Chip. 13, 2445-2463 (2013).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts.

Les procédés de microfabrication pour la production de puces à micro-motifs avec des fenêtres GO sont présentés ici. La puce fabriquée à micro-motifs est conçue pour réguler l’épaisseur de la couche de glace vitrée en contrôlant la profondeur du micro-trou avec des fenêtres GO en fonction de la taille du matériau à analyser. Une puce à micro-motifs avec des fenêtres GO a été fabriquée à l’aide d’une série de techniques MEMS et d’une méthode de transfert de nanofeuilles 2D (Figure 1). Le prin...

La microscopie électronique cryogénique (cryo-EM) a été développée pour résoudre la structure tridimensionnelle (3D) des protéines dans leur état natif 1,2,3,4. La technique consiste à fixer des protéines dans une fine couche (10-100 nm) de glace vitrée et à acquérir des images de projection de protéines orientées aléatoirement à l’aide d’un microscope électronique à transmission (TEM), l’échantillon étant maintenu à la température de l’azote liquide. Des milliers à des millions d’images de projection sont acquises et utilisées pour reconstruire une structure 3D de la protéine par des algorithmes de calcul 5,6. Pour une analyse réussie avec cryo-EM, la préparation des cryo-échantillons a été automatisée en gelant l’équipement qui contrôle les conditions de buvardage, l’humidité et la température. La solution d’échantillon est chargée sur une grille TEM avec une membrane de carbone trouée, successivement effacée pour éliminer l’excès de solution, puis congelée avec de l’éthane liquide pour produire de la glace mince et vitreuse 1,5,6. Avec les progrès de la cryo-EM et l’automatisation de la préparation des échantillons7, la cryo-EM a été de plus en plus utilisée pour résoudre la structure des protéines, y compris les protéines d’enveloppe pour les virus et les protéines des canaux ioniques dans la membrane cellulaire 8,9,10. La structure des protéines d’enveloppe des particules virales pathogènes est importante pour comprendre la pathologie de l’infection virale, ainsi que pour développer le système de diagnostic et les vaccins, par exemple le SRAS-CoV-211, qui a causé la pandémie de COVID-19. De plus, les techniques cryo-EM ont récemment été appliquées aux sciences des matériaux, telles que l’imagerie de matériaux sensibles aux faisceaux utilisés dans les batteries 12,13,14 et les systèmes catalytiques 14,15 et l’analyse de la structure des matériaux inorganiques à l’état de solution16.
Malgré les développements notables de la cryo-EM et des techniques pertinentes, il existe des limites dans la préparation des cryo-échantillons, ce qui entrave l’analyse de la structure 3D à haut débit. La préparation d’un film de glace vitreux avec une épaisseur optimale est particulièrement importante pour obtenir la structure 3D de matériaux biologiques à résolution atomique. La glace doit être suffisamment mince pour minimiser le bruit de fond des électrons dispersés par la glace et pour interdire les chevauchements de biomolécules le long du trajet du faisceau d’électrons 1,17. Cependant, si la glace est trop mince, elle peut entraîner l’alignement des molécules de protéines dans les orientations préférées ou dénaturer 18,19,20. Par conséquent, l’épaisseur de la glace vitreuse doit être optimisée en fonction de la taille du matériau d’intérêt. De plus, des efforts considérables sont généralement nécessaires pour la préparation des échantillons et le criblage manuel de l’intégrité de la glace et des protéines sur les grilles TEM préparées. Ce processus prend énormément de temps, ce qui nuit à son efficacité pour l’analyse de structure 3D à haut débit. Par conséquent, l’amélioration de la fiabilité et de la reproductibilité de la préparation des échantillons cryo-EM améliorerait l’utilisation de la cryo-EM en biologie structurale et en découverte commerciale de médicaments, ainsi que pour la science des matériaux.
Ici, nous présentons des procédés de microfabrication pour la fabrication d’une puce à micro-motifs avec des fenêtres en oxyde de graphène (GO) conçues pour le cryo-EM à haut débit avec une épaisseur de glace contrôlée21. La puce à micro-motifs a été fabriquée à l’aide de techniques de système microélectromécanique (MEMS), qui peuvent manipuler la structure et les dimensions de la puce en fonction des objectifs d’imagerie. La puce à micro-motifs avec fenêtres GO a une structure de micropuit qui peut être remplie avec la solution d’échantillon, et la profondeur du micropuit peut être régulée pour contrôler l’épaisseur de la glace vitrée. La forte affinité de GO pour les biomolécules augmente la concentration de biomolécules pour la visualisation, améliorant ainsi l’efficacité de l’analyse de structure. En outre, la puce à micro-motifs est composée d’un cadre En Si, qui offre une grande stabilité mécanique à la grille19, ce qui la rend idéale pour la manipulation de la puce lors des procédures de préparation des échantillons et de l’imagerie cryo-EM. Par conséquent, une puce à micro-motifs avec des fenêtres GO fabriquées par des techniques MEMS assure la fiabilité et la reproductibilité de la préparation des échantillons cryo-EM, ce qui peut permettre une analyse de structure efficace et à haut débit basée sur cryo-EM.

<table><tbody><tr><td>1-méthyl-2-pyrrolidinone (NMP)</td><td>Sigma Aldrich, États-Unis</td><td>443778</td><td></td></tr><tr><td>Acétone</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AFM</td><td>Park Systems, Corée du Sud</td><td>NX-10</td><td></td></tr><tr><td>Aligner</td><td>Midas System, Corée du Sud</td><td>MDA-600S</td><td></td></tr><tr><td>AZ 300 MIF développeur</td><td>AZ Electronic Materials USA Corp., États-Unis</td><td>184411</td><td></td></tr><tr><td>Cryo-EM holder</td><td>Gatan, USA</td><td>626 support cryo-EM à inclinaison simple</td> Machine de cryo-plongée Thermo Fisher SCIENTIFIC, États-Unis Vitrobot Mark IV Microscopie électronique à balayage à faisceau d’ions focalisés (FIB-SEM)FEI Company, États-Unis Helios NanoLab 650 Déchargeur de luminescence Ted Pella Inc., États-Unis PELCO easiGlow Solution d’oxyde de graphène (GO) Sigma Aldrich, États-Unis <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td>763705</tr><tr><td>Hexaméthyldisizazne (HMDS), 98+ %</td><td>Alfa Aesar, États-Unis</td><td>10226590</td><td></td></tr><tr><td>Dépôt chimique en phase vapeur à basse pression (LPCVD)</td><td>Centrotherm, Allemagne</td><td>LPCVD E1200</td><td></td></tr><tr><td>maP1205 positive PR</td><td>Technologie de micro-résine, Allemagne</td><td>A15139</td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de potassium (KOH), flocons</td><td>DAEJUNG CHEMICALS & METALS Co. LTD., Corée du Sud</td><td>6597-4400</td><td></td></tr><tr><td>Spectromètre Raman</td><td>NOST, Corée du Sud</td><td>Micro Raman confocal Système HEDA</td><td></td></tr><tr><td>Graveur d’ions réactifs (RIE)</td><td>Ingénierie scientifique, Corée du Sud</td><td>SEM construit en</td><td></td>laboratoire</tr><tr><td></td><td>Carl Zeiss, Allemagne</td><td>SUPRA 55VP</td><td></td></tr><tr><td>Plaquette Si</td><td>JP COMMERCE, Corée</td><td></td> du Sud <td>Plaquette de silicium 4", type P(B), (100), 1-30ohm.c m, DSP, T :100um</td></tr><tr><td>Spin coater</td><td>Dong Ah Trade Corp., Corée du Sud</td><td>ACE-200</td><td></td></tr><tr><td>TEM</td><td>JEOL, Japon</td><td>JEM-2100F</td><td></td></tr></tbody></table>

fabrication d’une puce à micro-motifs avec épaisseur contrôlée pour la microscopie électronique cryogénique à haut débit

Fabrication of Micro-Patterned Chip with Controlled Thickness for High-Throughput Cryogenic Electron Microscopy

Une limitation majeure pour l’analyse efficace et à haut débit de la structure des biomolécules à l’aide de la microscopie électronique cryogénique (cryo-EM) est la difficulté de préparer des échantillons cryo-EM avec une épaisseur de glace contrôlée à l’échelle nanométrique. La puce à base de silicium (Si), qui a un réseau régulier de micro-trous avec une fenêtre d’oxyde de graphène (GO) modelée sur un film de nitrure de silicium (SixNy) à épaisseur contrôlée, a été développée en appliquant des techniques de système microélectromécanique (MEMS). La photolithographie UV, le dépôt chimique en phase vapeur, la gravure humide et sèche du film mince et la coulée par goutte de matériaux nanofeuilles 2D ont été utilisés pour la production en série des puces à micro-motifs avec des fenêtres GO. La profondeur des micro-trous est régulée pour contrôler l’épaisseur de la glace à la demande, en fonction de la taille de l’échantillon pour l’analyse cryo-EM. L’affinité favorable de GO pour les biomolécules concentre les biomolécules d’intérêt dans le micro-trou lors de la préparation de l’échantillon cryo-EM. La puce à micro-motifs avec fenêtres GO permet une imagerie cryo-EM à haut débit de diverses molécules biologiques, ainsi que de nanomatériaux inorganiques.

Une puce à micro-motifs avec des fenêtres GO a été fabriquée par fabrication MEMS et transfert de nanofeuilles GO 2D. Les puces pour le micro-modelage ont été produites en série, avec environ 500 puces produites à partir d’une plaquette de 4 (Figure 1B et Figure 2A,B). Les conceptions des puces à micro-motifs peuvent être manipulées à l’aide de différents modèles du masque au chrome (Figure 2) au cours de la procédu...

Une puce à micro-motifs nouvellement développée avec des fenêtres en oxyde de graphène est fabriquée en appliquant des techniques de système microélectromécanique, permettant une imagerie efficace et à haut débit par microscopie électronique cryogénique de diverses biomolécules et nanomatériaux.

Fabrication d’une puce à micro-motifs avec épaisseur contrôlée pour la microscopie électronique cryogénique à haut débit

A major limitation for the efficient and high-throughput structure analysis of biomolecules using cryogenic electron microscopy (cryo-EM) is the ...

Ce protocole est important pour réguler l’épaisseur de la taille de l’image à l’échelle nanométrique afin d’observer avec succès des protéines et des nanomatériaux de différentes tailles à l’aide de cryo EM. La technique de fabrication du Mem permet la production en série de la micropuce. Il permet également de sélectionner les profondeurs et les conceptions des puits à micro-motifs. Selon les objectifs expérimentaux.La technique peut contribuer à améliorer l’efficacité de l’analyse de la structure 3D à haut débit des biomolécules qui est utilisée pour la découverte de médicaments commerciaux, puis les plaquettes minces et les micropuces avec des membranes de nitre de silicium tentant à risque peuvent être délicates. Il est important de ne pas plier la plaquette ou d’appliquer des forces perpendiculaires à la fenêtre en nitrate de silicium. Commencez à modeler la photorésine, ou PR en couvrant une plaquette de silicium déposée au nitrure de silicium avec une solution d’hexaméthyldisilazane, puis essorez la plaquette à 3000 tr / min pendant 30 secondes sur un codeur de spin.Cuire la plaquette enduite à 95 degrés Celsius pendant 30 secondes sur une plaque chauffante pour rendre la surface de l’eau hydrophobe et assurer une bonne performance de revêtement avec le PR. Ensuite, enduisez la plaquette avec un PR positif et faites-la cuire à 100 degrés Celsius pendant 90 secondes. Un PR enduit de spin a une épaisseur de 500 nanomètres. Exposez la plaquette enduite de PR à la lumière ultraviolette pendant cinq secondes à travers un masque au chrome à l’aide d’une gouttière.Développer le PR pendant une minute à l’aide d’un révélateur et rincer deux fois en immergeant la plaquette dans de l’eau désionisée. Séchez ensuite la plaquette à motif PR en soufflant de l’azote gazeux sur la surface de l’eau. Suivant le modèle du PR. Utilisez une gravure ionique réactive construite en laboratoire à une puissance de radiofréquence de 50 watts et avec de l’hexafluorure de soufre gazeux à trois centimètres cubes standard par minute.Pour graver le nitrure de silicium exposé à raison de six angströms par seconde. Éliminez le PR en immergeant la plaquette à motifs de nitrure de silicium dans de l’acétone à température ambiante pendant 30 minutes. Ensuite, rincez la plaquette deux fois dans de l’eau désionisée et séchez la plaquette avec de l’azote gazeux.Pour graver le si exposé, immerger la plaquette à motifs de nitrure de silicium dans une solution d’hydroxyde de potassium fraîchement préparée. Sous agitation continue jusqu’à ce que les fenêtres autoportantes en nitrure de silicium puissent être observées du côté opposé de la plaquette à motifs. Nettoyez la plaquette gravée en la trempant plusieurs fois dans un bain-marie désionisé.Séchez ensuite la plaquette à l’air. Pour éliminer les résidus de gravure, appuyez légèrement sur les limites du réseau de puces avec une pince à épiler et obtenez un tableau de puces à micro-motifs. Ensuite, immergez le réseau de puces dans une solution d’hydroxyde de potassium fraîchement préparée pendant 30 secondes, puis rincez deux fois, soufflez les copeaux avec de l’azote gazeux et séchez-les à l’air pendant une heure.Pour un support solide, préparez une tranche de silicium vierge de 525 micromètres avec le revêtement de spin comme démontré précédemment. Attachez au rayon déchiqueteur sur la plaquette de silicium avant de cuire la plaquette et suivez la procédure décrite précédemment pour obtenir la plaquette de silicium micromotif. Éliminer le PR en immergeant la puce de motif dans une solution de méthyle deux littanol pur à 60 degrés Celsius pendant la nuit.Le lendemain, rincez le jeu de copeaux deux fois avec de l’eau désionisée. Après séchage de la puce de motif fixé avec de l’azote, éliminer les résidus de PN avec un procédé plasma d’oxygène en utilisant 100 centimètres cubes standard par minute d’oxygène gazeux à une puissance de radiofréquence de 150 watts pendant une minute avec la graveur d’ions réactifs. Plus tard, immergez les puces micro-structurées dans une solution d’hydroxyde de potassium pendant 30 secondes pour éliminer complètement les résidus de PN.Ensuite, rincez et séchez complètement le jeu de copeaux. Diluer deux milligrammes par millilitre d’oxyde de graphène ou solution 10 fois avec de l’eau désionisée et sonifier la solution diluée pendant 10 minutes pour briser les agrégats des feuilles. Puis centrifuger vers la solution diluée à 300 fois G pendant 30 secondes à température ambiante.Utilisez un déchargeur luminescent à 15 millions d’ampères pour décharger le côté gravé en silicium de la puce à micro-motif pendant une minute et rendre la surface de la puce avec une charge positive. Lorsque vous avez terminé, déposez trois microlitres de la solution sur le côté décharge luminescente de la puce à micromotif. Après une minute, épongez l’excès de solution sur la puce avec du papier filtre.Lavez la puce transférée avec des gouttelettes d’eau désionisées sur un film de paraffine et épongez l’excès avec du papier filtre. Répétez la procédure de coulée de goutte deux fois du côté transféré et une fois du côté opposé. Sécher la puce transférée à température ambiante pendant la nuit.Au cours de la procédure de photolithographie, les conceptions des puces à micro-motif ont été manipulées en utilisant différentes conceptions du masque au chrome. Le nombre et les dimensions des membranes autoportantes de nitrure de silicium ont été contrôlés. Il a été observé que les micropuces fabriquées pouvaient avoir jusqu’à 25 000 trous suspendus.Le spectre des ramen à la fenêtre affichait les pics représentatifs du De plus, les motifs de défraction hexagonale à orientation multiple indiquaient que les fenêtres étaient constituées de la multicouche La structure et la profondeur du micro trou avec des fenêtres ont été étudiées par microscopie électronique à balayage et microscopie à force atomique. Une structure de type puits du micro trou avec la fenêtre a été observée dans les images confirmant la possibilité de la conception de la puce micro motif avec fenêtres. À l’aide de la puce à micromotifs, quelques spécimens biologiques et nanoparticules inorganiques ont été imagés avec le microscope électronique cryo.Il est important d’optimiser les conditions telles que l’épaisseur du revêtement pur en utilisant l’intensité et le temps de développement pour le micro-modelage en fonction de la taille et de la conception des motifs. En appliquant des techniques de nano-pattering telles que FIB ou même le graphène lithographique plus petit, des motifs micrométriques peuvent être produits, ce qui peut élargir les applications de ce micro-dispositif lorsqu’il est utilisé avec d’autres techniques analytiques.

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