Évaluation de l’hypersensibilité mécanique induite par une lésion nerveuse chez le rat à l’aide d’un test de douleur opérante orofaciale

Le dispositif d’évaluation de la douleur orofaciale, ou OPAD, est un outil précieux pour la recherche préclinique sur la douleur, car il utilise un paradigme de conflit de récompense opérant. Cela englobe la nociception, l’apprentissage et la motivation, qui sont importants dans l’expérience de la douleur humaine et l’amélioration de la validité translationnelle. Un avantage significatif de l’OPAD par rapport aux tests traditionnels basés sur les réflexes est qu’il est entièrement automatisé, ce qui élimine la nécessité de retenir les animaux en prévenant les effets de stress connexes, et il réduit également le biais de l’expérimentateur.

Darrice Montgomery, technicien de laboratoire de mon laboratoire, fera la démonstration de la chirurgie CCI du nerf infraorbitaire. Commencez par installer le dispositif d’évaluation de la douleur orofaciale, ou OPAD, en plaçant les plateaux d’égouttage de lait, les cages en plexiglas et les grilles de plancher métalliques. Fixez le câblage aux cages et glissez le porte-bouteille sur le poteau métallique à l’arrière de l’appareil.

Ensuite, placez les bouteilles de lait de récompense sur le porte-biberon de manière à ce que le bec verseur puisse être atteint par l’animal. Serrez le bouton gauche du support pour fixer le flacon en place. Ensuite, allumez le panneau avant et allumez les cages.

Pour configurer le protocole, ouvrez le logiciel, entrez le mot de passe, puis cliquez sur Log Me On ou appuyez sur Entrée. Cliquez sur Nouvelle expérience vide et sur le menu Protocole. Sous Appareil, cliquez sur Protocole sans nom et sélectionnez le mode que ce protocole utilisera.

Sous Modes spécifiques à l’équipement, sélectionnez Mode cage mécanique OPAD et nommez le protocole. Après vous être assuré que toutes les cages sont allumées, ajoutez les cages OPAD en cliquant sur Appareil et Ajouter un élément en haut du volet du protocole, puis sélectionnez Nouvelle cage OPAD et Ajouter toutes les cages OPAD connectées. Pour ajouter les étapes de test d’expérience, accédez à l’onglet Test pour sélectionner les étapes, puis aux onglets Première étape, puis nommez l’étape.

Ajouter 10 minutes comme durée du test. Ajoutez d’autres étapes en cliquant sur Ajouter un onglet Élément, puis sur Nouvelle étape. Ensuite, attribuez les groupes en cliquant sur Informations supplémentaires et Groupes de traitement.

Vérifiez les groupes de traitement utilisés puis sélectionnez l’option L’utilisateur attribuera manuellement les animaux à leurs groupes. Attribuez des identifications d’animaux en cliquant sur le menu Protocole. Sous Informations supplémentaires, cliquez sur ID de l’animal et cochez l’option Utiliser mes identifiants pour faire référence aux animaux.

Définissez l’expérience en tapant le titre de l’expérience avant de cliquer sur Afficher les traitements et de taper les noms des traitements. Ajoutez des animaux et attribuez les traitements et les identifiants d’animaux en cliquant sur Afficher les animaux et Ajouter des animaux. Entrez le nombre d’animaux à tester, suivi de OK.

Une fois que la liste des animaux apparaît, ajoutez l’identification de l’animal et le traitement pour chaque rat. Enregistrez le protocole en cliquant sur le menu Protocole suivi de Enregistrer le protocole. Entrez le nom de fichier et le mot de passe du logiciel, puis cliquez sur Enregistrer.

Ensuite, enregistrez le fichier d’expérience en cliquant sur le fichier, puis sur Enregistrer, en tapant le mot de passe du logiciel et en cliquant sur l’onglet Enregistrer. Après avoir allumé les cages, recherchez la lumière verte sur la cage indiquant que la cage est prête à tester. Ouvrez le fichier d’expérience enregistré en double-clic.

Entrez le mot de passe, cliquez sur Connectez-moi ou appuyez sur Entrée. Sur le côté gauche de l’écran, notez le nombre d’animaux et la cage correspondante, l’étape en cours ce jour-là et l’état des tests. Observez l’identification de l’animal testé sur l’écran de la cage.

Placez le rat dans la cage et appuyez sur le bouton de la cage correspondante. Notez que le voyant vert se transforme en voyant orange une fois le test commencé. Assurez-vous que l’animal peut accéder à la bouteille de récompense tout en établissant un contact suffisant avec les pointes mécaniques.

Sur le côté droit de l’écran, observez le tableau de chaque animal montrant le nombre de coups de langue et de contacts. Un signal sonore se fait entendre lorsque la session de test est terminée. Placez le rat anesthésié sur un établi chirurgical et retenez-le.

Maintenez la température corporelle à 37 degrés Celsius à l’aide d’un coussin chauffant. Appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux pour les empêcher de se dessécher. Utilisez la lame de scalpel 15 pour faire une petite incision entre la gencive dorsale et la lèvre.

Retirez les tissus mous à l’aide de la lame du scalpel et révélez la branche des nerfs infraorbitaires, ou ION. À l’aide d’une aiguille de seringue émoussée courbée, placez deux ligatures intestinales chromiques 5-O autour de l’ION, puis fermez la plaie à l’aide d’adhésif tissulaire. Les tentatives de contact et les données de léchage d’un seul rat opéré par CCI ION et Sham au cours de la séance de test standard de 10 minutes au départ, et deux semaines, quatre semaines et six semaines après la chirurgie sont présentées ici.

Le modèle a révélé que pendant les périodes non nocives, les rats ont de longues séances de boisson. Après la blessure, l’animal ne peut pas maintenir le contact facial avec les barres à pointes pendant une longue durée, ce qui entraîne une diminution du nombre de léchages. Dans le groupe Sham, aucun changement significatif n’a été observé pour la période de consommation d’alcool.

Le nombre moyen de léchages entre les rats ioniques CCI et les rats opérés par simulacre au départ n’a montré aucune différence significative. Cependant, CCI ION a significativement réduit le nombre de léchages jusqu’à quatre semaines après la chirurgie et a augmenté la latence pour le premier léchage au cours de la semaine post-opératoire et une semaine après la lésion nerveuse indiquant une hyperalgésie mécanique. Il n’y a pas eu de changement significatif chez les rats opérés par Sham.

Lors de l’utilisation de l’OPAD, optimisez la distance de la bouteille de lait et la largeur des pointes. Il est important de garder cela cohérent pour réduire les erreurs lors de la collecte de données.