Name: Une approche d’imagerie intravitale fluorescente pour étudier la dynamique de la signalisation calcique induite par la charge dans les ostéocytes de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-24T14:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 3 s
Description: Découvrez une méthode d'imagerie intravitale par microscopie biphotonique pour étudier la signalisation calcique des ostéocytes de souris sous charge mécanique. Cette technique permet l'observation en temps réel dans leur environnement physiologique natif.

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<ol><li>Lu, X. L., Huo, B., Park, M., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+response+in+osteocytic+networks+under+steady+and+oscillatory+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Calcium response in osteocytic networks under steady and oscillatory fluid.</a> Bone. 51 (3), 466-473 (2012).</li>
<li>Wu, D., Schaffler, M. B., Weinbaum, S., Spray, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-dependent+adhesion+mediates+network+responses+to+physiological+stimulation+of+the+osteocyte+cell+process%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Matrix-dependent adhesion mediates network responses to physiological stimulation of the osteocyte cell process.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (29), 12096-12101 (2013).</li>
<li>Verbruggen, S. W., Vaughan, T. J., McNamara, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+flow+in+the+osteocyte+mechanical+environment%3A+A+fluid-structure+interaction+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">Fluid flow in the osteocyte mechanical environment: A fluid-structure interaction approach.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 13 (1), 85-97 (2013).</li>
<li>Genetos, D. C., Kephart, C. J., Zhang, Y., Yellowley, C. E., Donahue, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+fluid+flow+activation+of+gap+junction+hemichannels+induces+atp+release+from+MLO-Y4+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Oscillating fluid flow activation of gap junction hemichannels induces atp release from MLO-Y4 osteocytes.</a> Journal of Cellular Physiology. 212 (1), 207-214 (2007).</li>
<li>Lu, X. L., Huo, B., Chiang, V., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocytic+network+is+more+responsive+in+calcium+signaling+than+osteoblastic+network+under+fluid+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Osteocytic network is more responsive in calcium signaling than osteoblastic network under fluid flow.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 27 (3), 563-574 (2012).</li>
<li>Schaffler, M. B., Kennedy, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+signaling+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Osteoporosis+Reports%22%5BJournal%5D)">Osteocyte signaling in bone.</a> Current Osteoporosis Reports. 10 (2), 118-125 (2012).</li>
<li>Kramer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+Wnt%2F+-Catenin+signaling+is+required+for+normal+bone+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Osteocyte Wnt/ -Catenin signaling is required for normal bone homeostasis.</a> Molecular and Cellular Biology. 30 (12), 3071-3085 (2010).</li>
<li>Nakashima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+osteocyte+regulation+of+bone+homeostasis+through+RANKL+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Evidence for osteocyte regulation of bone homeostasis through RANKL expression.</a> Nature Medicine. 17 (10), 1231-1234 (2011).</li>
<li>Kennedy, O. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+resorption+in+fatigue-loaded+bone+involves+both+apoptosis+and+active+pro-osteoclastogenic+signaling+by+distinct+osteocyte+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Activation of resorption in fatigue-loaded bone involves both apoptosis and active pro-osteoclastogenic signaling by distinct osteocyte populations.</a> Bone. 50 (5), 1115-1122 (2012).</li>
<li>Rawlinson, S. C. F., Wheeler-Jones, C. P. D., Lanyon, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arachidonic+acid+for+loading+induced+prostacyclin+and+prostaglandin+E2+release+from+osteoblasts+and+osteocytes+is+derived+from+the+activities+of+different+forms+of+phospholipase+A2%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Arachidonic acid for loading induced prostacyclin and prostaglandin E2 release from osteoblasts and osteocytes is derived from the activities of different forms of phospholipase A2.</a> Bone. 27 (2), 241-247 (2000).</li>
<li>David, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+bone+formation+in+bovine+trabecular+bone+cultured+in+a+dynamic+3D+bioreactor+is+enhanced+by+compressive+mechanical+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Ex vivo bone formation in bovine trabecular bone cultured in a dynamic 3D bioreactor is enhanced by compressive mechanical strain.</a> Tissue Engineering Part A. 14 (1), 117-126 (2008).</li>
<li>Davies, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+loaded+ex+vivo+bone+culture+system+%26%2334%3BZetos%26%2334%3B%3A+systems+and+culture+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Cell+%26+Materials%22%5BJournal%5D)">Mechanically loaded ex vivo bone culture system &#34;Zetos&#34;: systems and culture preparation.</a> European Cell & Materials. 11, 57-75 (2006).</li>
<li>Adachi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+calcium+signaling+response+to+bone+matrix+deformation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Osteocyte calcium signaling response to bone matrix deformation.</a> Journal of Biomechanics. 42 (15), 2507-2512 (2009).</li>
<li>Huo, B., Lu, X. L., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+calcium+wave+propagation+in+linear+and+circuit-like+bone+cell+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+A%3A+Mathematical%2C+Physical+and+Engineering+Sciences%22%5BJournal%5D)">Intercellular calcium wave propagation in linear and circuit-like bone cell networks.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society A: Mathematical, Physical and Engineering Sciences. 368 (1912), 617-633 (2010).</li>
<li>Morrell, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+induced+Ca2%2B+oscillations+in+osteocytes+release+extracellular+vesicles+and+enhance+bone+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanically induced Ca2+ oscillations in osteocytes release extracellular vesicles and enhance bone formation.</a> Bone Research. 6, 6(2018).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+intracellular+calcium+oscillations+in+osteocytes+in+intact+mouse+long+bones+under+dynamic+mechanical+loading%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">In situ intracellular calcium oscillations in osteocytes in intact mouse long bones under dynamic mechanical loading.</a> FASEB Journal. 28 (4), 1582-1592 (2014).</li>
<li>Chen, T. -W., Wardill, T. J., Sun, Y., Pulver, S. R., Renninger, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-sensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultra-sensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li>
<li>Jacobs, C. R., Temiyasathit, S., Castillo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+mechanobiology+and+pericellular+mechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Osteocyte mechanobiology and pericellular mechanics.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 12, 369-400 (2010).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+properties+of+intracellular+calcium+signaling+in+osteocytic+and+osteoblastic+cell+networks+under+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal properties of intracellular calcium signaling in osteocytic and osteoblastic cell networks under fluid.</a> Bone. 53 (2), 531-540 (2013).</li>
<li>Thi, M. M., Suadicani, S. O., Schaffler, M. B., Weinbaum, S., Spray, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensory+responses+of+osteocytes+to+physiological+forces+occur+along+processes+and+not+cell+body+and+require+%CE%B1V%CE%B23+integrin%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Mechanosensory responses of osteocytes to physiological forces occur along processes and not cell body and require αVβ3 integrin.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (52), 21012-21017 (2013).</li>
<li>Wang, Y., McNamara, L. M., Schaffler, M. B., Weinbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+the+role+of+integrins+in+flow+induced+mechanotransduction+in+osteyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A model for the role of integrins in flow induced mechanotransduction in osteyocytes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (40), 15941-15946 (2007).</li>
<li>McNamara, L. M., Majeska, R. J., Weinbaum, S., Friedrich, V., Schaffler, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attachment+of+osteocyte+cell+processes+to+the+bone+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Attachment of osteocyte cell processes to the bone matrix.</a> The Anatomical Record. 292 (3), 355-363 (2009).</li>
<li>Franz-Odendaal, T. A., Hall, B. K., Witten, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buried+alive%3A+How+osteoblasts+become+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Buried alive: How osteoblasts become osteocytes.</a> Developmental Dynamics. 235 (1), 176-190 (2005).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+application+to+bone+and+dental+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its application to bone and dental tissues.</a> Journal of Dental Research. 98 (6), 621-631 (2019).</li>
<li>Lewis, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+calcium+signals+encode+strain+magnitude+and+loading+frequency+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Osteocyte calcium signals encode strain magnitude and loading frequency in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (44), 11775-11780 (2017).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DMP1-targeted+Cre+expression+in+odontoblasts+and+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">DMP1-targeted Cre expression in odontoblasts and osteocytes.</a> Journal of Dental Research. 86 (4), 320-325 (2007).</li>
<li>Rubin, C. T., Lanyon, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+strain+similarity+in+vertebrates%3B+an+alternative+to+allometric+limb+bone+scaling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Theoretical+Biology%22%5BJournal%5D)">Dynamic strain similarity in vertebrates; an alternative to allometric limb bone scaling.</a> Journal of Theoretical Biology. 107 (2), 321-327 (1984).</li>
<li>Jacobs, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effect+of+steady+versus+oscillating+flow+on+bone+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Differential effect of steady versus oscillating flow on bone cells.</a> Journal of Biomechanics. 31 (11), 969-976 (1998).</li>
<li>Kato, Y., Windle, J. J., Koop, B. A., Mundy, G. R., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+osteocyte-like+cell+line%2C+MLO-Y4%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Establishment of an osteocyte-like cell line, MLO-Y4.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 12 (12), 2014-2023 (1997).</li>
<li>Kato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+osteoid+preosteocyte-like+cell+MLO-A5+that+spontaneously+mineralizes+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Establishment of an osteoid preosteocyte-like cell MLO-A5 that spontaneously mineralizes in culture.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 16 (9), 1622-1633 (2001).</li>
<li>Woo, S. M., Rosser, J., Dusevich, V., Kalajzic, I., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+line+IDG-SW3+replicates+osteoblast-to-late-osteocyte+differentiation+in+vitro+and+accelerates+bone+formation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Cell line IDG-SW3 replicates osteoblast-to-late-osteocyte differentiation in vitro and accelerates bone formation in vivo.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 26 (11), 2634-2646 (2011).</li>
<li>vander Plas, A., Nijweide, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+purification+of+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation and purification of osteocytes.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 7 (4), 389-396 (1992).</li>
<li>Gu, G., Nars, M., Hentunen, T. A., Metsikkö, K., Väänänen, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+primary+osteocytes+express+functional+gap+junctions+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Isolated primary osteocytes express functional gap junctions in vitro.</a> Cell and Tissue Research. 323 (2), 263-271 (2006).</li>
<li>Paic, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+differentially+expressed+genes+between+osteoblasts+and+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Identification of differentially expressed genes between osteoblasts and osteocytes.</a> Bone. 45 (4), 682-692 (2009).</li>
<li>Tian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neural+activity+in+worms%2C+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nature Methods. 6 (12), 875-881 (2009).</li>
<li>Grienberger, C., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+calcium+in+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging calcium in neurons.</a> Neuron. 73 (5), 862-885 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#3 Scalpel à poignée</td><td>Microscopie électronique Sciences</td><td>72040-03</td><td>Fournitures chirurgicales</td></tr><tr><td>20x Objectif à immersion dans l’eau</td><td>Olympus</td><td>XLUMPLFLN20XW</td><td>Il s’agit d’un objectif 20x, mais 40x peut également être utilisé pour ce protocole. Nous recommandons les immersions dans l’eau car il doit être plongé dans le bain pendant l’imagerie, de sorte qu’un objectif en plein air peut provoquer des aberrations</td></tr><tr><td>A.M. Bickford Omnicon F/AIR</td><td>AM Bickford</td><td>80120</td><td>Une réponse sensée aux problèmes de gaz d’anesthésie dans la salle d’opération, le filtre à gaz d’anesthésie F/AIR a été spécialement conçu pour éliminer les gaz d’anesthésie résiduaires tels que l’isoflurane, Halothane, Enflurane, etc. de l’environnement de la salle d’opération.</td></tr><tr><td>A.M. Bickford Omnicon F/AIR Kit&nbsp ;</td><td>AM Bickford</td><td>80000</td><td>Un kit complet avec tube et adaptateurs pour connecter F/AIR à la configuration</td></tr><tr><td>B6J. Cg-Gt(ROSA)26Sortm95.1(CAG-GCaMP6f)Hze/MwarJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>28865</td><td>GCaMP6f Souris croisées avec des souris Dmp1-Cre</td></tr><tr><td>B6N. FVB-Tg(Dmp1-cre)1Jqfe/BwdJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>23047</td><td>Dmp1-Cre Souris pour croisement avec des souris GCaMP6f&nbsp ;</td></tr><tr><td>Capteur de charge</td><td>à compression FUTEK Advanced Sensor Technology, Inc.</td><td>905898</td><td>LCM100 , 1000 g , Capteur de charge en traction et compression subminiature (fileté miniature/en ligne) , RoHS sans plomb, Matériau - 17-4 PH S.S. , Fil M3x0,5 , Câble en polyester tressé à 4 conducteurs 34 Awg , 5 pieds de long</td></tr><tr><td>Corning 500 mL DPBS (solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco), 1x [+] calcium, magnésium</td><td>VWR International</td><td>21-030-CV</td><td>Un bain équilibré ioniquement contenant du calcium submerge le métatarsien pendant l’imagerie</td></tr><tr><td>Outil de pic dentaire</td><td>Microscopie électronique Sciences</td><td></td><td>Fournitures chirurgicales</td></tr><tr><td>Alcool éthylique pur 200 proof Réactif ACS >99.5 %</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SIAL-459844-500ML</td><td>Finalisation de la stérilisation</td></tr><tr><td>Pivot Pivot</td><td>Fathom</td><td>N/A</td><td>Fabriqué par frittage laser 3D direct d’acier inoxydable (alliage PH1) à partir de fichiers 3D SolidWorks STL. Le fournisseur d’origine était GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc, maintenant acquis par FATHOM, les spécifications sont fournies dans le document précédemment publié</td></tr> Kit de <tr><td>sortie USB220 haute résolution et vitesse</td><td>FUTEK Advanced Sensor Technology, Inc.</td><td>717435</td><td>Utilisé pour connecter le capteur de charge à l’ordinateur portable</td></tr><tr><td>ImageJ 1.53t avec Java 1.8.0_172 (pour Windows 64-bit)</td><td>NIH</td><td>N/A</td><td>Installer ici https://imagej.nih.gov/ij/</td></tr> <tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical Care</td><td>66794-013-25</td><td>100 % inhalation de vapeur</td></tr><tr><td>de liquide Support de charge</td><td>Fathom</td><td>N/A</td><td>Fabriqué par frittage laser 3D direct d’acier inoxydable (alliage PH1) à partir de fichiers 3D SolidWorks STL. Le fournisseur d’origine était GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc, maintenant acquis par FATHOM, les spécifications sont fournies dans le document précédemment publié</td></tr><tr><td>MATLAB R2019a</td><td>MathWorks</td><td></td><td>Pour faire fonctionner le dispositif de chargement</td></tr><tr><td>Vaporisateur Matrx VIP 3000 bien remplir isoflurane</td><td>Butler Schein Animal Health</td><td>14309</td><td>Vaporisateur pour oxymètre de</td></tr><tr><td>pouls anesthésique Nonin Modèle 2500A Vet</td><td></td><td>2500A Vet</td><td></td></tr><tr><td>Piezo servo contrôleur</td><td>PI-USA</td><td>E-625</td><td>Composant électronique recommandé par l’entreprise pour être utilisé avec l’actionneur</td></tr><tr><td>Actionneur piézoélectrique linéaire à haute rigidité PiezoMove</td><td>PI-USA</td><td>P-602.5SL</td><td>Actionneur pour le dispositif de chargement</td></tr><tr><td>Lames de scalpel, n° 10 pour la poignée n° 3, paquet de 100</td><td>Microscopie électronique Sciences</td><td>72044-10</td><td>Fournitures chirurgicales</td></tr><tr><td>Pince à épiler en acier inoxydable à pointes fines et tranchantes. Longueur : 120 mm</td><td>Microscopie électronique Sciences</td><td>78326-42</td><td>Fournitures chirurgicales</td></tr><tr><td>Thorlabs Bergamo microscope multiphotonique</td><td>ThorLabs</td><td>N/A</td><td>Il s’agit uniquement du système d’imagerie et n’a pas le laser inclus, bien que ThorLabs ait des options laser si vous le souhaitez</td></tr><tr><td>Titanium-Saphire Chameleon Discovery NX avec contrôle de puissance total (TPC)</td><td>Cohérent</td><td>N/A</td><td>Ce système dispose techniquement de deux lasers, un laser accordable et un laser fixe. Cependant, pour le protocole, seul l’accordable est nécessaire.</td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort Vannas - Tranchant de 4 mm</td><td>Outils de science fine</td><td>15018-10</td><td>Fournitures chirurgicales</td></tr><tr><td>Bain d’eau</td><td>Fathom</td><td>N/A</td><td>Fabriqué par frittage laser 3D direct d’acier inoxydable (alliage PH1) à partir de fichiers 3D SolidWorks STL. Le fournisseur d’origine était GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc, maintenant acquis par FATHOM, les spécifications sont fournies dans le document précédemment publié</td></tr></tbody></table>

une approche d’imagerie intravitale fluorescente pour étudier la dynamique de la signalisation calcique induite par la charge dans les ostéocytes de souris

A Fluorescent Intravital Imaging Approach to Study Load-Induced Calcium Signaling Dynamics in Mouse Osteocytes

Nous présentons ici une méthodologie pour étudier la signalisation calcique dans les ostéocytes intégrés in vivo à l’aide d’une préparation chirurgicale aiguë et de l’imagerie fluorescente multiphotonique. Un signal fluorescent vert peut être observé à partir d’indicateurs calciques génétiquement codés dans les ostéocytes via l’expression de DMP1-Cre. La figure 4 est une image monoplane d’ostéocytes intégrés. Notez que toutes les cellules sont marquées et expriment une fluo...

Une approche d’imagerie intravitale fluorescente pour étudier la dynamique de la signalisation calcique induite par la charge dans les ostéocytes de souris

Bone tissue is exquisitely sensitive to differences in mechanical load magnitude. Osteocytes, dendritic cells that form a syncytium throughout the bone, ...

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Basées sur la fluorescence de mesure de l&#39;entrée du calcium magasin fonctionnant dans des cellules vivantes: à partir de cellules cancéreuses en culture de fibre musculaire squelettique

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Imagerie par fluorescence de la dynamique calcique au niveau des jonctions neuromusculaires du diaphragme d’une souris transgénique

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Imagerie directe du calcium ER avec Targeted-estérase colorant induit Chargement (TED)

Nous présentons ici des techniques d’imagerie des événements Ca2+ médiés par IP3 locaux à l’aide de la microscopie à fluorescence dans des cellules de mammifères intactes chargées d’indicateurs Ca2+ ainsi qu’un algorithme qui automatise l’identification et l’analyse de ces événements.

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Nous présentons ici un protocole au calcium image de signalisation dans les populations de types de cellules individuelles à la jonction neuromusculaire murine.

Ex Vivo Imagerie du Calcium cellulaire spécifique de signalisation à la Synapse Tripartite du diaphragme souris

Nous présentons la méthodologie pour l'isolement des myocytes murines et comment obtenir des traces de tension ou de calcium simultanément avec des traces de raccourcissement sarcome à l'aide de la photométrie fluorescence avec des mesures numériques simultanées de géométrie cellulaire.

Imagerie optique des myocytes ventriculaires murines isolés

Nous présentons un protocole pour exposer le tronc cérébral de la souris adulte du côté ventral. En utilisant une lentille à indice de réfraction gradient avec un microscope miniature, l’imagerie au calcium peut être utilisée pour examiner l’activité de la somata neuronale olive inférieure in vivo.

In vivo Imagerie du calcium chez la souris Olive inférieure

Deux méthodes connexes sont décrites pour visualiser les événements subcellulaires nécessaires à la transmission synaptique. Ces protocoles permettent de surveiller en temps réel la dynamique de l’afflux de calcium présynaptique et de la fusion de la membrane des vésicules synaptiques à l’aide de l’imagerie cellulaire vivante de neurones cultivés in vitro .

Mesure fluorescente en temps réel des fonctions synaptiques dans les modèles de sclérose latérale amyotrophique

Le protocole décrit la méthode de chargement d’un colorant calcique fluorescent à travers le nerf coupé dans les terminaisons nerveuses motrices de souris. En outre, une méthode unique d’enregistrement rapide des transitoires de calcium dans les terminaisons nerveuses périphériques à l’aide de la microscopie confocale est présentée.

Enregistrement des transitoires calciques dans la jonction neuromusculaire de souris à haute résolution temporelle par microscopie confocale

Cette étude décrit la méthode de visualisation et de développement de modèles tridimensionnels (3D) d’ostéocytes au sein du réseau lacunaire-canaliculaire (LCN) pour l’analyse de la dynamique des fluides numérique (CFD). Les modèles générés à l’aide de cette méthode aident à comprendre la mécanosensation des ostéocytes dans les os sains ou malades.

Analyse et imagerie des ostéocytes

Découvrez une méthode d'imagerie intravitale par microscopie biphotonique pour étudier la signalisation calcique des ostéocytes de souris sous charge mécanique. Cette technique permet l'observation en temps réel dans leur environnement physiologique natif.

Une approche d’imagerie intravitale fluorescente pour étudier la dynamique de la signalisation calcique induite par la charge dans les ostéocytes de souris (Vidéo) | JoVE Journal

Une approche d’imagerie intravitale fluorescente pour étudier la dynamique de la signalisation calcique induite par la charge dans les ostéocytes de souris

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