Name: Production de sérum conditionné autologue modifié et évaluation ex vivo de son potentiel de guérison dans l’épithélium cornéen murin (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-24T14:15:00.000+00:00
Duration: 3 min 55 s
Description: Découvrez la préparation de sérum conditionné autologue modifié pour la cicatrisation cornéenne ex vivo chez la souris. Cette méthode simplifiée réduit les coûts et améliore l'accessibilité des traitements pour les patients.

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Les auteurs remercient Ya-Lan Chien et-Ying Lee pour leur excellente assistance technique, et OnLine English Company pour l’édition linguistique. Cette étude a été financée en partie par Chang Gung Medical Research Project (subvention n° CMRPG3L1491).

La recherche a été effectuée conformément aux lignes directrices institutionnelles au début de la section du protocole. Tous les protocoles et procédures ont été mis en œuvre conformément à la Déclaration d’Helsinki et ont été examinés et approuvés par le Comité d’examen institutionnel de la Fondation médicale Chang Gung. Tous les volontaires ont été informés de la nature de cette étude et ont signé un formulaire de consentement éclairé avant leur inclusion. Les consommables nécessaires à l’ensemble de la procédure expérimentale sont présentés à la figure 1 et à la figure 2, ainsi que dans le tableau des matériaux.
1. Préparation des matériaux nécessaires à la production de gouttes ophtalmiques mACS
<ol><li>Préparer 250 mL de solution de glycérol à 10 % et conserver un ensemble de perfusion à ailes papillon de 21 g, une seringue de 3 mL sans aiguille et six tubes vacutainer de 10 ml contenant de l’héparine 158 unités USP (Figure 1).</li>
	<li>Connectez l’aiguille de prélèvement sanguin de 21 G à la seringue de 3 mL et retirez 3 mL de solution de glycérol à 10 % dans la seringue préparée. REMARQUE : Tous les matériaux doivent être stérilisés avant l’insertion de l’aiguille.</li>
	<li>Répartir la solution de glycérol à 10 % dans les tubes vacutainer en séquence, avec environ 0,5 mL de solution de glycérol à 10 % dans chacun (Figure 3A). REMARQUE: En raison de la pression négative dans le tube à essai, l’aiguille doit sortir immédiatement après son entrée pour répartir uniformément 3 mL de solution de glycérol dans les six tubes à essai.</li>
	<li>Stérilisez la peau du patient avec des cotons-tiges stériles à 75% d’alcool. Percez la veine superficielle des membres supérieurs du patient avec l’aiguille de prélèvement sanguin de 18 G. Prélever 60 à 70 mL de sang veineux de la veine superficielle au total.</li>
</ol>2. Préparation pour les gouttes ophtalmiques mACS
<ol><li>Injecter séquentiellement 10 mL du sang veineux prélevé dans chacun des six tubes vacutainer (figure 3B). REMARQUE: Cette étape repose sur la pression négative du vide pour remplir les tubes. Pour éviter la perturbation des cellules sanguines et l’hémolyse, n’appliquez aucune pression positive.</li>
	<li>Placer les six tubes vacutainer dans l’incubateur à température constante de 37 °C pendant 4 h (figure 3C). REMARQUE: L’état hypoxique est maintenu et stabilisé par la pression négative restante dans un tube scellé qui a reçu du glycérol.</li>
	<li>Sortez les tubes de l’incubateur après 4 h et centrifugez-les à 3 500 × g pendant 10 min à température ambiante.</li>
	<li>À ce stade, préparez le matériel pour l’extraction du mACS, y compris les flacons de gouttes ophtalmiques stérilisés, une seringue de 3 ml avec l’aiguille, un filtre de 0,22 μm, une aiguille de 18 g et une paire de gants stériles (figure 2). REMARQUE: La table d’opération doit être essuyée avec de l’alcool à 75% pour assurer un environnement aseptique. Le surnageant, après centrifugation, est déjà un produit semi-fini de mACS.</li>
	<li>Placez les six tubes sur la grille à tubes et ouvrez les bouchons après une centrifugation complète (Figure 3D). REMARQUE: La stérilité n’est pas requise dans cette étape.</li>
	<li>Mettez des gants stériles et retirez le mACS un par un à l’aide d’une seringue de 3 ml avec une aiguille de 18 g. REMARQUE : Veillez à ne pas prélever la couche inférieure de cellules sanguines au cours de cette étape (Figure 3E).</li>
	<li>Retirez l’aiguille, branchez-la au filtre de 0,22 μm et connectez l’aiguille de prélèvement sanguin de 23 G, 1,5 po avec la seringue originale de 3 mL à la sortie ci-dessous (Figure 3F).</li>
	<li>Poussez doucement l’aiguille à travers le filtre de 0,22 μm dans les flacons de gouttes ophtalmiques stériles préparés (Figure 3G).</li>
	<li>Répétez les étapes ci-dessus jusqu’à ce que tous les mACS aient été filtrés et stockés dans des flacons de gouttes ophtalmiques (Figure 3H).</li>
	<li>Conservez les gouttes ophtalmiques mACS à 4 °C pour une utilisation immédiate; conserver à -20 °C pour une conservation à long terme. NOTE: Ne pas les conserver plus de 2 semaines à 4 °C ou plus de 3 mois à -20 °C 9,19.</li>
</ol>3. Modèle de cicatrisation ex vivo de l’épithélium cornéen murin
NOTE: Le modèle animal ex vivo suivant était basé sur l’expérience antérieure de Hung et al. sur les lésions mécaniques de l’épithélium cornéen20. Les étapes suivantes doivent être effectuées au microscope pour créer une plaie épithéliale cornéenne bien circonscrite et cohérente.
<ol><li>Anesthésier les souris C57BL/6 avec 3 % à 4 % d’isoflurane. Indenter le poinçon de biopsie cutanée sur la cornée centrale murine, en laissant un cercle peu profond sur l’épithélium comme une marge uniforme de la plaie. REMARQUE: Soyez doux pour éviter la rupture du globe oculaire.</li>
	<li>Débrider l’épithélium cornéen dans la zone confirmée jusqu’à la couche de Bowman, avec un dissolvant de l’anneau de rouille cornéenne équipé d’une bavure de 0,5 mm.</li>
	<li>Pour établir le modèle animal ex vivo de la plaie cornéenne mécanique, récoltez le globe oculaire et préparez bien la culture.<ol><li>Euthanasier les souris en premier; Ensuite, appuyez doucement sur les bords orbitaux supérieurs et inférieurs des souris, introduisez la pointe de la pince sur l’espace rétrobulbaire, puis sortez le globe oculaire et tenez-le par la pince.</li>
		<li>Coupez le nerf optique et les tissus mous périorbitaires avec des ciseaux cornéens pour isoler parfaitement le globe oculaire.</li>
		<li>Préparez une assiette de 96 puits avec de la cire fondue à l’intérieur. Créez rapidement un trou rond à l’aide des pointes des pinces, puis attendez la solidification.</li>
	</ol></li>
	<li>Préparer les milieux à tester : 0,5 % mACS, 0,5 % AS à titre de comparaison, solution saline normale comme témoin négatif et milieu d’Eagle modifié de Dulbecco (DMEM). REMARQUE: mACS est obtenu en utilisant le protocole mentionné ci-dessus.</li>
	<li>Pour la culture ex vivo , placer le globe oculaire récolté sur la plaque préparée à 96 puits. Ajouter 200 μL de chaque milieu dans la plaque de 96 puits.</li>
	<li>Placer la plaque de culture de 96 puits dans l’incubateur à 37 °C avec 5% de CO2. Assurez-vous que les milieux de culture sont changés toutes les 24 heures.</li>
	<li>Pour confirmer l’effet séquentiel de cicatrisation, surveiller la zone de la plaie épithéliale au microscope toutes les 8 heures par coloration à la fluorescéine.<ol><li>Dissoudre la fluorescéine sur le papier fluorescéine avec une solution saline normale.</li>
		<li>Déposez le colorant fluorescéine sur la cornée centrale murine, puis observez-le et documentez-le au microscope. Un résultat typique est illustré à la figure 4. REMARQUE : Une goutte (environ 0,05 mL) de colorant fluorescéine suffit pour l’observation.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Fox, R. I., Chan, R., Michelson, J. B., Belmont, J. B., Michelson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effect+of+artificial+tears+made+with+autologous+serum+in+patients+with+keratoconjunctivitis+sicca%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Beneficial effect of artificial tears made with autologous serum in patients with keratoconjunctivitis sicca.</a> Arthritis and Rheumatology. 27 (4), 459-461 (1984).</li>
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</ol>

Tous les auteurs déclarent qu’il n’y a pas de conflit d’intérêts.

Dans cette étude, un protocole pour la préparation du mACS est décrit et le bénéfice des gouttes ophtalmiques mACS dans la cicatrisation des plaies de modèles animaux est également démontré. La modification cruciale de ce protocole mACS est l’ajout d’environ 0,5 mL de solution de glycérol à 10% dans chaque tube à essai, ce qui crée des conditions hypoxiques appropriées pendant l’incubation de 4 heures à 37 °C. Ce réglage fournit à l’AS un stress approprié et incite les cellules à sécréter les facteurs de croissance néce...

Les effets thérapeutiques du sérum autologue (SA) dans les maladies de la sécheresse oculaire ont été signalés pour la première fois dans les années 1980 par Fox et coll.1. On pense que la propriété lubrifiante et les composants biochimiques épithéliotropes essentiels de la SA, imitant les larmes naturelles, favorisent la prolifération des cellules épithéliales cornéennes. Au cours des dernières décennies, plusieurs études ont été réalisées sur cette base. Les composants trophiques comprennent le facteur de croissance épidermique (EGF), la vitamine A, le facteur de croissance transformant β (TGF-β) et d’autres cytokines. Fait intéressant, le sérum est riche en TGF-β et en vitamine A, qui joueraient un rôle central dans la prolifération épidermique 2,3,4,5. En outre, lors du traitement de patients atteints de maladies de la surface oculaire, plusieurs études ont montré certains avantages des gouttes ophtalmiques SA dans les résultats rapportés par les patients, d’autres paramètres objectifs de sécheresse oculaire 6,7 et des résultats microscopiques tels que la densité cellulaire8. Les études de méta-analyse ont révélé qu’il pourrait y avoir certains avantages à améliorer les syndromes des patients avec le traitement par gouttes ophtalmiques SA, mais les résultats et les observations à long terme font encore défaut 9,10.
Contrairement à la SA, le plasma riche en plaquettes (PRP) est dérivé de l’ajout d’un anticoagulant pendant la préparation, avec une centrifugation différentielle supplémentaire et une activation chimique des plaquettes. Par rapport à la SA, de nombreux produits chimiques et facteurs de croissance, tels que le TGF-β, le facteur de croissance de l’endothélium vasculaire (VEGF) et l’EGF, sont présents dans le PRP. Il a également été appliqué aux maladies de la surface oculaire avec des avantages cliniques dans le soulagement des symptômes11.
La réticulation entre les défauts épithéliaux et l’inflammation est complexe. Notamment, l’immunophysiopathologie est un autre problème important dans les maladies de la surface oculaire. Les cytokines pro-inflammatoires, telles que l’IL-1β et l’IFN-γ, seraient des médiateurs essentiels dans les cascades inflammatoires12. De nouvelles pistes de traitement s’ouvrent ainsi à partir de la compréhension du mécanisme immunitaire. Les stratégies visant à arrêter ce processus inflammatoire, y compris la production d’antagoniste des récepteurs de l’interleukine-1 (IL-1Ra) et d’autres cytokines anti-inflammatoires, peuvent également jouer un rôle important dans les maladies de la surface oculaire13,14,15.
Depuis 1998, Orthokine, un sérum conditionné autologue commercialisé (SCA), est utilisé cliniquement chez les patients orthopédiques souffrant d’arthrose, de polyarthrite rhumatoïde (PR) et de troubles de la colonne vertébrale13. Par rapport à l’AS et au PRP, le traitement avec des billes de verre enduites chimiquement et l’incubation hypoxique pour activer les monocytes sont les caractéristiques spécifiques de l’ACS16. Théoriquement, plus de facteurs anti-inflammatoires peuvent être sécrétés en ajoutant un stress de survie aux cellules, ce qui entraîne une concentration plus élevée de composants immunomodulateurs essentiels, y compris l’IL-1Ra. L’amélioration des bénéfices thérapeutiques du SCA dans l’arthrose, par rapport à la SA, a également été rapportée17. Les maladies de la surface oculaire partagent des antécédents immunitaires similaires à ceux des maladies inflammatoires orthopédiques à certains égards. Par conséquent, sur la base des résultats positifs de la thérapie dérivée du sang humain dans le domaine orthopédique, ACS pourrait présenter des avantages par rapport aux traitements conventionnels en pratique clinique par des propriétés épithéliotropes et immunomodulatrices. Bien que le SCA ait été largement utilisé dans les maladies inflammatoires orthopédiques, ses applications cliniques en ophtalmologie doivent encore être explorées, ce qui peut être entravé par son coût élevé, le manque de support documentaire et le manque de normalisation du processus de préparation, ce qui entraîne des performances diverses.
Dans cet article vidéo, une méthode novatrice, rentable et pratique a été démontrée pour générer l’ACS modifié (mACS), ou plasma riche en facteurs de croissance (PRGF), produisant une solution de gouttes oculaires avec une valeur pratique comparable aux ACS commercialisés. Les idées clés de l’ajout d’anticoagulants et du déclenchement de la sécrétion de cytokines anti-inflammatoires par incubation stressée par les cellules sanguines ont été retenues, mais contrairement aux méthodes induites chimiquement, telles que celles basées sur des perles de verre enduites de CrSO4 et des kits commerciaux, le statut de stress critique est physiquement induit par l’incubation hypoxique dans cette méthode. De plus, le glycérol a été ajouté pour fournir des avantages supplémentaires, y compris une augmentation de la stabilité de la membrane des cellules sanguines, le maintien d’une pression de fluide extracellulaire osmotiqueappropriée 18 et une source appropriée de nutriments dans des conditions hypoxiques qui évitent de surcharger les cellules.

<table><tbody><tr><td>&nbsp ; Plaque de culture 96 puits</td><td>Merck KGaA, Allemagne</td><td>CLS3997</td><td></td></tr><tr><td>Couvercle Barraquer spéculum</td><td>katena</td><td>K1-5355</td><td>15 mm</td></tr><tr><td>Porte-aiguille Barraquer</td><td>Katena</td><td>K6-3310</td><td>sans serrure.</td></tr><tr><td>Barron Vacuum Punch 8,0 mm</td><td>katena</td><td>K20-2108</td><td>pour la coupe du papier filtre</td></tr><tr><td>BD 10,0 mL tubes vacutainer contenant de l’héparine 158 unités USP</td><td>Becton, Dickinson and Company, US</td><td>367880</td><td>Au moins 6 tubes, nécessaires pour prélever du sang pour les expériences ultérieures et pour éviter l’agglutination du sang</td></tr><tr><td>BD 21 G Kit de perfusion à ailes papillon</td><td>Becton, Dickinson and Company, États-Unis</td><td>367281</td><td>Pour une distribution uniforme de la solution de glycérol</td></tr><tr><td>C57BL/6 souris&nbsp ;</td><td>National Laboratory Animal Center</td><td>RMRC11005</td><td>pour modèle de souris</td></tr><tr><td>Castroviejo pince 0,12 mm</td><td>katena&nbsp ;</td><td>Centrifugeuse K5-2500</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf, Allemagne</td><td>5811000428</td><td>3 500 x g pendant 10 min</td></tr><tr><td>Cheng Yi 10,0 mL stérilisé flacon compte-gouttes oculaire Cheng</td><td>Yi Chemical, Taiwan</td><td>CP405141</td><td>Doit être stérile et comme récipient de stockage pour le produit final</td></tr><tr><td>Dissolvant d’anneau de rouille cornéenne avec meule de 0,5 mm</td><td>Algerbrush IITM ; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TX</td><td>CHI-675</td><td>pour le débridement de l’épithélium cornéen</td></tr><tr><td>Milieu essentiel minimal modifié de Dulbecco</td><td>Merck KGaA, Allemagne</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>Papier filtre&nbsp ;</td><td>Toyo Roshi Kaisha, Ltd.</td><td>1.11</td><td></td></tr><tr><td>Bandelettes ophtalmiques à la fluorescéine sodique U.S.P</td><td>OPTITECH</td><td></td><td>OPTFL100 coloration pour défaut épithélial cornéen&nbsp ;</td></tr><tr><td>Incubateur</td><td>Firstek, Taïwan</td><td>S300S</td><td>37 &deg ; C pour 4 h</td></tr><tr><td>Kanam gants stériles Kanam</td><td>Latex Industries, Inde</td><td>EN455</td><td>Pour un fonctionnement aseptique</td></tr><tr><td>Merck 0.22 &micro ; Filtre m</td><td>Merck KGaA, Allemagne</td><td>PR05359</td><td>Au moins 2 filtres pour la filtration mACS</td></tr><tr><td>Nang Kuang 250 mL 10 % de solution glycérolique</td><td>Nang Kuang Pharmaceutical, Taiwan</td><td>19496</td><td>Pour offrir un effet de stabilisation membranaire approprié et une pression osmotique extracellulaire pour les cellules sanguines</td></tr><tr><td>Saline normale</td><td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td><td>100-120-1101</td><td></td></tr><tr><td>Poinçon de biopsie cutanée 2mm</td><td>STIEFEL</td><td>22650</td><td></td></tr><tr><td>Stéréomicroscope</td><td>Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA</td><td>Microscope SV11</td><td>pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Terumo Aiguille 18 G</td><td>Terumo, Taiwan</td><td>Seringue SMACF0120-18BX</td><td>3.0 mL avec aiguille 18 G pour extraire le surnageant après centrifugation</td></tr><tr><td>Seringue Terumo 20.0 mL</td><td>Terumo, Taiwan</td><td>MDSS20ES</td><td>Pourrait être utilisé pour collecter le sérum après la centrifugation initiale et l’utiliser pour la centrifugation secondaire.</td></tr><tr><td>La seringue Terumo de 3,0 mL avec l’aiguille de 23 G</td> de <td>Terumo, Taïwan</td><td>MDSS03S2325</td><td>seringue de 3,0 mL est utilisée pour extraire le surnageant après centrifugation. Connectez ensuite le filtre et l’aiguille 23 G pour l’injection dans les flacons de gouttes ophtalmiques.</td></tr><tr><td>Ciseaux de ténotomie Westcott Medium</td><td>katena</td><td>K4-3004</td><td></td></tr></tbody></table>

production de sérum conditionné autologue modifié et évaluation ex vivo de son potentiel de guérison dans l’épithélium cornéen murin

Production of Modified Autologous Conditioned Serum and Ex Vivo Assessment of Its Healing Potential in Murine Corneal Epithelium

Les thérapies topiques dérivées du sang humain ont été une aubaine pour les cliniciens au cours des dernières décennies. Le sérum autologue (SA) et le plasma riche en plaquettes (PRP) sont enrichis en facteurs de croissance épithéliotropes essentiels à la cicatrisation des plaies cornéennes. Contrairement à la SA, le PRP est basé sur un système de centrifugation différentielle, produisant davantage de facteurs de croissance dérivés des plaquettes. Le sérum conditionné autologue (ACS) préserve non seulement la préparation de la SA et du PRP, mais se concentre également sur les propriétés immunomodulatrices, qui sont importantes dans les maladies inflammatoires.
L’absence de protocoles normalisés et les coûts de préparation élevés sont des limites pour l’application clinique du SCA. Cette expérience vidéo démontre une procédure opératoire standard pour la préparation de gouttes ophtalmiques à sérum conditionné autologue modifié (mACS). Tout d’abord, le glycérol a été ajouté dans les seringues d’héparine comme stabilisateur des cellules sanguines pendant l’incubation hypoxique. Pour activer les cellules sanguines, une incubation de 4 h à 37 °C a été initiée. Ensuite, les échantillons de sang ont été centrifugés à 3 500 × g pendant 10 min à température ambiante. Après filtration du surnageant à travers un filtre de 0,22 μm, les gouttes ophtalmiques mACS ont été entièrement préparées.
Un essai provisoire de l’effet thérapeutique du mACS a montré qu’il pourrait avoir des avantages concurrentiels par rapport à la SA conventionnelle dans la cicatrisation des plaies cornéennes dans les yeux de souris ex vivo . La SA utilisée dans cette étude a été préparée en fonction des études publiées et de la pratique clinique dans notre hôpital. Par conséquent, l’efficacité du mACS sur les maladies de la surface oculaire pourrait être évaluée dans de futures recherches par le biais d’études in vivo sur des animaux et d’essais cliniques.

Les figures 1 et 2 montrent les matériaux nécessaires à l’expérience, et la figure 3 montre les étapes séquentielles et les produits intermédiaires réussis lors de la préparation du mACS. Tout d’abord, 0,5 mL de solution de glycérol à 10 % a été ajouté dans chaque tube à essai stérile de 10 mL (figure 3A). Ensuite, 60 à 70 mL de sang veineux ont été obtenus du patient, et 10 mL de sang ont été injectés ...

Cet article décrit un protocole visant à simplifier le processus et à rendre la préparation du sérum conditionné autologue (ACS) moins coûteuse. Aucune seringues spéciales ou perles de verre revêtues en surface n’est nécessaire. De plus, l’ACS modifié (mACS) présente des avantages concurrentiels par rapport au sérum autologue conventionnel dans la cicatrisation des plaies cornéennes des yeux murins ex vivo.

Production de sérum conditionné autologue modifié et évaluation ex vivo de son potentiel de guérison dans l’épithélium cornéen murin

Human blood-derived topical therapies have been a boon to clinicians in recent decades. Autologous serum (AS) and platelet-rich plasma (PRP) are enriched ...

Ce procédé présente un produit innovant dérivé du sang appelé mACS, qui ne nécessite aucun traitement technique complexe. Il accélère également la cicatrisation des plaies dans une plus grande mesure que le sérum autologue conventionnel. En plus de fournir un processus de préparation standardisé, cette technique peut également réduire le coût des gouttes ophtalmiques sériques, améliorant ainsi l’accessibilité du patient à une option de traitement plus abordable.Cette technique peut être appliquée dans les domaines qui nécessitent de favoriser la régénération des plaies ou des tissus, la réparation et l’anti-inflammation. Cette technique sera un grand avantage pour les plaies difficiles à guérir et les maladies inflammatoires chroniques telles que les maladies graves de la surface oculaire. Pour commencer, injectez 10 millilitres du sang veineux humain précédemment prélevé dans chacun des six tubes de vacutainer.Placez les tubes dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant quatre heures, puis centrifugez les tubes à 3 500 G pendant 10 minutes à température ambiante. Décapsulez les tubes après les avoir placés sur la grille. Après avoir mis des gants stériles, utilisez une seringue de trois millilitres équipée d’une aiguille de calibre 18 pour extraire le mACS de chaque tube.Retirez l’aiguille et fixez un filtre de 0,22 micromètre. Connectez l’aiguille de prélèvement sanguin de calibre 23 de 1,5 pouce avec la seringue originale de trois millilitres à la sortie du filtre. Poussez doucement l’aiguille à travers le filtre dans les flacons de gouttes ophtalmiques stériles préparés pour une utilisation immédiate, conservez les gouttes oculaires à quatre degrés Celsius.Dans le modèle de cicatrisation de surface ex-vivo, les sujets traités avec les gouttes ophtalmiques ont montré une cicatrisation cornéenne supérieure à ceux traités avec les gouttes de sérum autologues. À 16 heures, les plaies cornéennes de tous les groupes guérissaient plus lentement que celle traitée avec 0,5%mACS. La cornée murine des groupes DMEM et le sérum autologue à 24 heures ont démontré une cicatrisation comparable à celle du mACSS à 32 heures, sauf pour le groupe salin normal.Tous les autres groupes se sont presque complètement rétablis. L’étape la plus importante consiste à suivre les procédures aseptiques pendant le processus. Les produits sériques sont riches en nutriments, de sorte que l’utilisation de produits contaminés sur la cornée peut causer de graves ulcères cornéens.Ce produit peut être utilisé pour évaluer la cicatrisation des plaies et l’amélioration des symptômes des maladies de la surface oculaire. L’analyse du composant cytokine et la réalisation d’essais contrôlés randomisés à plus grande échelle sur le mACS sont essentielles pour la poursuite des recherches.

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Combinaison de Microstéréolithographie et Électrofilage à produire des membranes Equipé Niches pour la régénération de la cornée

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Un protocole pour un ancien modèle de culture de cornée orgue vivo utile pour la cicatrisation des études est exposée. Ce système de modèle peut servir à évaluer les effets des agents pour favoriser la guérison régénératrice ou toxicité des médicaments dans un environnement 3D organisé de multicellulaire.

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Ici, nous présentons un protocole pour détacher les cellules endothéliales cornéennes (CEC) de la membrane de Descemet (DM) à l’aide d’un neodymium:YAG (Nd:YAG) laser comme modèle de maladie ex vivo pour la kératompathie bullous (BK).

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Ici, des modèles animaux basés sur la souris et le lapin sont développés pour les lésions mécaniques et chimiques de l’épithélium cornéen afin de cribler de nouveaux traitements et le mécanisme sous-jacent.

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Le Stripping Only de Descemet est une procédure expérimentale dans laquelle les patients atteints de guttase cornéenne centrale résultant d’une dystrophie cornéenne endothéliale de Fuchs ont la membrane de Descemet dépouillée pour que les cellules périphériques régénèrent la couche endothéliale. Nous présentons une nouvelle méthodologie simulant le DSO dans les cornées humaines dystrophiques ex vivo avec une guérison accélérée stimulée par eFGF1 (NM141).

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Évaluation de la toxicité thérapeutique et chimique à l’aide de cornées porcines cultivées sur des organes et de la cicatrisation des plaies épithéliales

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Fabrication et application chirurgicale d’hydrogels enrichis photo-reticulés gélatine-riboflavine pour la réparation des plaies cornéennes chez les lapins

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Production de sérum conditionné autologue modifié et évaluation ex vivo de son potentiel de guérison dans l’épithélium cornéen murin (Vidéo) | JoVE Journal

Production de sérum conditionné autologue modifié et évaluation ex vivo de son potentiel de guérison dans l’épithélium cornéen murin

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