Name: Thrombose artérielle induite par le chlorure ferrique et prélèvement d’échantillons pour analyse en microscopie électronique 3D (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-17T13:45:00.000+00:00
Duration: 3 min 57 s
Description: Découvrez une méthode au chlorure ferrique pour induire une thrombose artérielle et prélever des échantillons pour analyse en microscopie électronique. Cette technique permet d'étudier l'architecture et la croissance du thrombus à différents stades.

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Les auteurs remercient les membres du Laboratoire Whiteheart pour leur lecture attentive de ce manuscrit. Le travail a été soutenu par des subventions du NIH, NHLBI (HL56652, HL138179 et HL150818), et une bourse du mérite du ministère des Anciens Combattants à S.W.W., R01 HL 155519 à B.S., et une subvention du programme intra-muros NIBIB à R.D.L.

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<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombotic+therapy+by+regulating+the+ROS-mediated+thrombosis+microenvironment+and+specific+nonpharmaceutical+thrombolysis+Using+Prussian+blue+nanodroplets%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Antithrombotic therapy by regulating the ROS-mediated thrombosis microenvironment and specific nonpharmaceutical thrombolysis Using Prussian blue nanodroplets.</a> Small. 18 (15), 2106252(2022).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+membrane+cloaked+nanotubes+to+accelerate+thrombolysis+by+thrombus+clot-targeting+and+penetration%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Platelet membrane cloaked nanotubes to accelerate thrombolysis by thrombus clot-targeting and penetration.</a> Small. , 2205260(2022).</li>
<li>Refaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+light-responsive+liposomes+for+protein+delivery%3A+Towards+bleeding-free+photothermally-assisted+thrombolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Near-infrared light-responsive liposomes for protein delivery: Towards bleeding-free photothermally-assisted thrombolysis.</a> Journal of Controlled Release. 337, 212-223 (2021).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+nanoplatelets+to+target+delivery+hirudin+for+site-specific+photothermal%2Fphotodynamic+thrombolysis+and+preventing+venous+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Biomimetic nanoplatelets to target delivery hirudin for site-specific photothermal/photodynamic thrombolysis and preventing venous thrombus formation.</a> Small. 18 (51), 2203184(2022).</li>
<li>Subramaniam, S., Kanse, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Mouse+Biology%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced arterial thrombosis in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 4 (4), 151-164 (2014).</li>
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<li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonparametric-estimation+from+incomplete+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Statistical+Association%22%5BJournal%5D)">Nonparametric-estimation from incomplete observations.</a> Journal of the American Statistical Association. 53 (282), 457-481 (1958).</li>
<li>Chauhan, A. K., Kisucka, J., Lamb, C. B., Bergmeier, W., Wagner, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((von+Willebrand+factor+and+factor+VIII+are+independently+required+to+form+stable+occlusive+thrombi+in+injured+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">von Willebrand factor and factor VIII are independently required to form stable occlusive thrombi in injured veins.</a> Blood. 109 (6), 2424-2429 (2007).</li>
<li>Andre, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40L+stabilizes+arterial+thrombi+by+a+beta3+integrin--dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">CD40L stabilizes arterial thrombi by a beta3 integrin--dependent mechanism.</a> Nature Medicine. 8 (3), 247-252 (2002).</li>
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<li>Shim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+model+of+mice+and+the+role+of+red+blood+cells+in+thrombosis+acceleration%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Characterization of ferric chloride-induced arterial thrombosis model of mice and the role of red blood cells in thrombosis acceleration.</a> Yonsei Medical Journal. 62 (11), 1032-1041 (2021).</li>
<li>Ghosh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+prothrombotic+potential+of+four-factor+prothrombin+complex+concentrate+%284F-PCC%29+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the prothrombotic potential of four-factor prothrombin complex concentrate (4F-PCC) in animal models.</a> PLoS One. 16 (10), 0258192(2021).</li>
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<li>Jacob-Ferreira, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombotic+activity+of+Batroxase%2C+a+metalloprotease+from+Bothrops+atrox+venom%2C+in+a+model+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Antithrombotic activity of Batroxase, a metalloprotease from Bothrops atrox venom, in a model of venous thrombosis.</a> International Journal of Biological Macromolecules. 95, 263-267 (2017).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rabbit+model+of+cerebral+microembolic+signals+for+translational+research%3A+preclinical+validation+for+aspirin+and+clopidogrel%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">A rabbit model of cerebral microembolic signals for translational research: preclinical validation for aspirin and clopidogrel.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 14 (9), 1855-1866 (2016).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+evodiamine+on+collagen-induced+platelet+activation+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Effect of evodiamine on collagen-induced platelet activation and thrombosis.</a> BioMed Research International. 2022, 4893859(2022).</li>
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<li>Li, W., Nieman, M., Sen Gupta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+murine+thrombosis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced murine thrombosis models.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54479(2016).</li>
<li>Holly, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ether+lipid+metabolism+by+AADACL1+regulates+platelet+function+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">Ether lipid metabolism by AADACL1 regulates platelet function and thrombosis.</a> Blood Advances. 3 (22), 3818-3828 (2019).</li>
<li>Bird, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+the+therapeutic+index+of+marketed+anti-coagulants+and+anti-platelet+agents+by+guinea+pig+models+of+thrombosis+and+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Prediction of the therapeutic index of marketed anti-coagulants and anti-platelet agents by guinea pig models of thrombosis and hemostasis.</a> Thrombosis Research. 123 (1), 146-158 (2008).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts lié à cette étude.
Profils ORCID : S.J. : 0000-0001-6925-2116; S.W.W.: 00000-0001-5577-0473.

L’application topique de FeCl3 au système vasculaire pour induire la thrombose est une technique largement utilisée et a joué un rôle déterminant dans l’établissement des rôles de divers récepteurs plaquettaires, des voies de signalisation des ligands et de leurs inhibiteurs20,21,22,23. Le mécanisme par lequel FeCl3 provoque la thrombose est multiforme; Auparavant, la dénu...

La thrombose est la formation d’un caillot sanguin qui bloque partiellement ou complètement un vaisseau sanguin, entravant la circulation naturelle du sang. Cela conduit à des événements cardiovasculaires graves et mortels, tels que les cardiopathies ischémiques et les accidents vasculaires cérébraux. Les maladies cardiovasculaires sont la principale cause de morbidité et de mortalité, et causent un décès sur quatre dans le monde 1,2,3. Bien que la thrombose se manifeste par un dysfonctionnement du système vasculaire, elle pourrait être le résultat d’une infection microbienne ou virale sous-jacente, d’un trouble immunitaire, d’une tumeur maligne ou d’une affection métabolique. La circulation sanguine est maintenue par l’interaction complexe entre divers composants du système vasculaire, y compris les cellules endothéliales, les globules rouges / blancs, les plaquettes et les facteurs de coagulation4. En cas de lésion vasculaire, les plaquettes interagissent avec les protéines adhésives de la matrice sous-endothéliale et libèrent leur contenu granulaire, ce qui recrute plus de plaquettes5. Parallèlement, la cascade de coagulation est activée, conduisant à la formation et au dépôt de fibrine. En fin de compte, un caillot se forme, contenant des plaquettes et des globules rouges piégés dans un maillage de fibrine6. Bien que des médicaments antiplaquettaires et anticoagulants soient disponibles pour moduler la thrombose, les saignements parasites demeurent une préoccupation majeure avec ces thérapies, nécessitant un réglage fin des dosages et des combinaisons de ces médicaments. Ainsi, il est toujours urgent de découvrir de nouveaux médicaments anti-thrombotiques7.
La thrombose est étudiée à l’aide de plusieurs méthodes pour infliger des lésions vasculaires: mécanique (ligature des vaisseaux), thermique (lésion au laser) et chimique (application FeCl3 / Rose Bengal). La nature de la thrombose varie en fonction de l’emplacement (artériel vs veineux), de la méthode ou de l’étendue de la blessure. Parmi tous ces types, les lésions vasculaires induites par FeCl3 sont la méthode la plus utilisée. Il a été employé chez les souris, les rats, les lapins, les cobayes et les chiens 8,9,10,11,12. La méthode est relativement simple, facile à utiliser et, si les principaux paramètres sont normalisés, elle est sensible et reproductible dans divers systèmes vasculaires (p. ex. artères [carotides et fémorales], veines [jugulaires] et artérioles [cremaster et mésentérique]) (tableau supplémentaire 1).
Ce modèle peut également être utilisé pour approfondir notre compréhension de la mécanique et de la morphologie de la formation des caillots. Cette technique offre uniquement l’avantage d’arrêter la thrombose à différents points de débit, pour étudier les étapes intermédiaires du processus avant qu’il ne devienne occlusif. Les progrès récents de la recherche sur la thrombose ont utilisé ce modèle pour attirer l’attention sur les méthodes non pharmacologiques de thrombolyse13 ou l’administration non invasive d’agents antithrombotiques et/ou fibrinolytiques14,15. Plusieurs groupes ont montré que, lorsque les membranes plaquettaires sont recouvertes de ces traitements, les médicaments peuvent être activés par stimulation thermique pour cibler les caillots16. Les techniques décrites ici peuvent être utiles à des études telles que la validation de leurs résultats au niveau plaquettaire unique. Dans ce manuscrit, le protocole 1 décrit la procédure de base de lésion vasculaire médiée par FeCl3, tandis que le protocole 2 décrit la méthode de collecte et de fixation de l’échantillon de lésion vasculaire pour une analyse plus approfondie par microscopie électronique.

<table><tbody><tr><td>0,9 % de solution saline&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>BP358-212</td><td>NaCl utilisé pour faire une solution de solution saline à 0,9 %&nbsp ;</td></tr><tr><td>Seringue de 1 ml&nbsp ;</td><td>Becton, Dickinson et Cie.</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>Éthanol 190 proof&nbsp ;</td><td>KOPTEC</td><td>V1101&nbsp ;</td><td>Utilisé pour fabriquer une solution d’éthanol à 70 % à utiliser pour préparer la souris à la chirurgie.</td></tr><tr><td>2,2,2 Tribromoéthanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>48402</td><td></td></tr><tr><td>25 Yard Noir Tressé Suture en Soie (5-0)</td><td>DEKNATEL</td><td>136082-1204</td><td></td></tr><tr><td>26G x 3/8 Aiguille&nbsp ;</td><td>Becton, Dickinson et Cie.</td><td>305110</td><td></td></tr><tr><td>2-méthyl-2-butanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>240486</td><td></td></tr><tr><td>Pipette de transfert de 7,5 ml, graduée à 3 mL</td><td>Globe Scientific Inc.</td><td>135010</td><td></td></tr><tr><td>Tampons de préparation à l’alcool (alcool isopropylique à 70 %)</td><td>Medline</td><td>MDS090735</td><td></td></tr><tr><td>Araldite GY 502&nbsp ;</td><td>Services de microscopie électronique&nbsp ;</td><td>10900</td><td></td></tr><tr><td>Plat de culture cellulaire 35mm x 10mm&nbsp ;</td><td>Corning Incorporated&nbsp ;</td><td></td><td></td>430165</tr><tr><td>Balance compacte</td><td>Ward’s Science&nbsp ;</td><td>470314-390</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux de dissection, longueur 12,5 cm</td><td>World Precision Instrument</td><td>15922-G</td><td></td></tr><tr><td>DMP-30 activateur&nbsp ;</td><td>Services de microscopie électronique&nbsp ;</td><td>13600</td><td></td></tr><tr><td>Anhydride dodénylsuccinique/ DDSA</td><td>Services de microscopie électronique&nbsp ;</td><td>13700</td><td></td></tr><tr><td>Doggy Poo Bags/sac d’élimination de carcasse d’animal</td><td>Crown Products&nbsp ;</td><td>PP-RB-200</td><td></td></tr><tr><td>Doppler FlowProbe</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td>MA0.5PSB</td><td></td></tr><tr><td>EMBED 812 résine&nbsp ;</td><td>Services de microscopie électronique&nbsp ;</td>Alcool éthylique <td>14900</td><td></td></tr><tr><td>, anhydre 200 proof&nbsp ;</td><td>Services de microscopie électronique&nbsp ;</td><td>15055</td><td></td></tr><tr><td>Pince à pansement oculaire, 4" entièrement incurvée, standard, pointes larges de 0,8 mm</td><td>Integra Miltex</td><td>18-784</td><td></td></tr><tr><td>Papier filtre&nbsp ;</td><td>VWR</td><td>28310-106</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux fins - Outils</td><td>de science fine tranchants</td> et émoussés.<td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Poinçons d’oreille à boucle de doigt</td><td>Outils de science fine&nbsp ;</td><td>24212-01</td><td></td></tr><tr><td>Éponges de gaze 2 » x 2 » &ndash ; 12 plis&nbsp ;</td><td>Dukal Corporation</td><td>2128</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldéhyde (solution à 10 %)</td><td>Services de microscopie électronique&nbsp ;</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex Lame chirurgicale en acier au carbone #10</td><td>Integra&reg ; Miltex&reg ;</td><td>4110</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de fer (III)&nbsp ;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>157740-100G</td><td></td></tr><tr><td>Manche de couteau Miltex&reg ; Acier inoxydable extra fin taille 3</td><td>Integra Lifesciences&nbsp ;</td><td>157510</td><td></td></tr><tr><td>Acide L-aspartique</td><td>Sigma&nbsp ; Fisher</td><td>&nbsp ; A93100</td><td></td></tr><tr><td>Acide L-aspartique</td><td>Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>BP374-100</td><td></td></tr><tr><td>Nitrate de plomb</td><td>Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>L-62</td><td></td></tr><tr><td>LEICA S8AP0 Microscope</td><td>LEICA</td><td>N’est plus disponible</td><td>N’est plus disponible chez le fabricant</td></tr><tr><td>LEICA S8AP0 Microscope Stand&nbsp ;</td><td>LEICA</td><td>10447255</td><td>N’est plus disponible auprès de l’entreprise</td></tr><tr><td>Essuie-tout léger&nbsp ;</td><td>VWR</td><td>82003-822</td><td></td></tr><tr><td>Micro pince à dissectionnement ; 1x2 dents, pleine courbure ; largeur de pointe de 0,8 mm ; longueur de 4</td><td>" Roboz Surgical Instrument Company</td><td>RS-5157</td><td></td></tr><tr><td>Tétroxyde d’osmium 4 % solution aqueuse&nbsp ;</td><td>Services de microscopie électronique&nbsp ;</td><td>19150</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde (solution à 16 %)</td><td>Microscopie électronique Services&nbsp ;</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Ferricyanure de potassium</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P-8131</td><td></td></tr><tr><td>Oxyde de propylène, réactif ACS&nbsp ;</td><td>Services de microscopie électronique&nbsp ;</td><td>20401</td><td></td></tr><tr><td>Pipette classique Rainin PR-10</td><td>Débitmètre</td><td>de recherche 17008649</td><td></td>Rainin</tr><tr><td>&nbsp ;</td><td>Systèmes Transonic Inc.</td><td>Modèle T402B01481</td><td>: T402</td></tr><tr><td>Scotch Magic Invisible Tape, 3/4 » x 1000 »,</td><td>transparent</td><td></td><td></td>305289</tr><tr><td>Coussin chauffant pour petits animaux</td><td>K& H Manufacturing Inc.</td><td>Modèle : HM10</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de cacodylate de sodium 0.2M, pH7.4</td><td>Microscopie électronique Services&nbsp ;</td><td>11623</td><td></td></tr><tr><td>Applicateurs stériles à pointe de coton&nbsp ;</td><td>Produits Médicaux Puritains&nbsp ;</td><td>25-806 1WC</td><td></td></tr><tr><td>Illuminateur Steromaster&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>12-562-21</td><td>N’est plus disponible chez l’entreprise</td></tr><tr><td>Surgical Dumont #7 Forceps&nbsp ;</td><td>Outils de science fine&nbsp ;</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Thiocarbohydrazide (TCH)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>88535</td><td></td></tr><tr><td>Recharge universelle à faible rétention de l’embout de pipette (0,1-10 & micro ; L)</td><td>VWR</td><td>76323-394</td><td></td></tr><tr><td>Acétate d’uranyle</td><td>Services de microscopie électronique&nbsp ;</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>Veet Gel Cream Épilateur</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>3116875</td><td></td></tr><tr><td>Blanc Antistatique Hexagonal Pesées Bateaux, Moyen, 64 x 15 x 19 mm</td><td>Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>S38975</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel WinDAQ/100 pour Windows</td><td>DATAQ Instruments, Inc.</td><td>Version 3.38</td><td>Disponible en téléchargement gratuit. https://www.dataq.com/products/windaq/</td></tr> <tr><td>ZEISS AxioCam Icc 1</td><td>ZEISS</td><td>57615</td><td></td></tr></tbody></table>

thrombose artérielle induite par le chlorure ferrique et prélèvement d’échantillons pour analyse en microscopie électronique 3d

Ferric Chloride-Induced Arterial Thrombosis and Sample Collection for 3D Electron Microscopy Analysis

Les maladies cardiovasculaires sont l’une des principales causes de mortalité et de morbidité dans le monde. La thrombose aberrante est une caractéristique commune des affections systémiques comme le diabète et l’obésité, et des maladies inflammatoires chroniques comme l’athérosclérose, le cancer et les maladies auto-immunes. En cas de lésion vasculaire, le système de coagulation, les plaquettes et l’endothélium agissent généralement de manière orchestrée pour prévenir les saignements en formant un caillot sur le site de la blessure. Les anomalies de ce processus entraînent soit des saignements excessifs, soit une thrombose incontrôlée / une activité antithrombotique insuffisante, ce qui se traduit par une occlusion des vaisseaux et ses séquelles. Le modèle de lésion carotidienne induite par FeCl3 est un outil précieux pour sonder comment la thrombose commence et progresse in vivo. Ce modèle implique des dommages endothéliaux/dénudation et la formation subséquente de caillots sur le site blessé. Il fournit un test quantitatif très sensible pour surveiller les dommages vasculaires et la formation de caillots en réponse à différents degrés de dommages vasculaires. Une fois optimisée, cette technique standard peut être utilisée pour étudier les mécanismes moléculaires sous-jacents à la thrombose, ainsi que les changements ultrastructuraux dans les plaquettes dans un thrombus en croissance. Ce test est également utile pour étudier l’efficacité des agents antithrombotiques et antiplaquettaires. Cet article explique comment initier et surveiller la thrombose artérielle induite par FeCl3 et comment prélever des échantillons pour analyse par microscopie électronique.

Les données sont généralement présentées comme le temps jusqu’à l’occlusion, ou le temps nécessaire pour former un thrombus complètement occlusif. Ces données peuvent être tracées sous la forme d’une courbe de survie de Kaplan-Meier (Figure 4A)19, d’un diagramme à points avec des barres montrant le flux sanguin terminal au moment de l’arrêt du flux sanguin ou de la fin d’une expérience (Figure 4B), ou sous forme de graphique linéaire (Figure 4C).<...

Le présent protocole décrit comment utiliser une lésion médiée par FeCl3 pour induire une thrombose artérielle, et comment collecter et préparer des échantillons de lésions artérielles à différents stades de la thrombose pour l’analyse en microscopie électronique.

Thrombose artérielle induite par le chlorure ferrique et prélèvement d’échantillons pour analyse en microscopie électronique 3D

Cardiovascular diseases are a leading cause of mortality and morbidity worldwide. Aberrant thrombosis is a common feature of systemic conditions like ...

Avec cette méthode, on peut déterminer quels composants des plaquettes et du système hémostatique sont importants pour la thrombose. De plus, cette méthode peut déterminer comment la croissance et l’architecture du thrombus sont affectées au niveau cellulaire. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet une manière reproductible d’étudier de nombreux stades de thrombose au niveau structurel.Une personne novice dans cette technique devrait éviter de trop manipuler le tissu dans la zone chirurgicale. Cela peut entraîner des saignements et compliquer à l’excès l’identification de l’artère carotide. Commencez à marquer le site de la blessure après avoir exposé l’artère carotide en encerclant lâchement la région entre deux fils chirurgicaux d’une taille de 0,1 millimètre.Placez la sonde sous l’artère distale du filetage inférieur. Insérez le morceau de plastique sous l’artère entre les deux fils pour marquer le site des dommages causés par le chlorure de fer. Prenez des mesures de débit avant d’effectuer une blessure pour noter l’écoulement basal.Effectuez la blessure en plaçant du papier filtre imbibé de chlorure de fer sur l’artère pendant trois minutes. Retirez le papier filtre après trois minutes pour éviter l’étendue variable de la blessure et faciliter le comptage du débit par la sonde. Ajouter une solution saline sur le site de la blessure pour éliminer tout excès de chlorure de fer résiduel.Surveillez la lecture du flux. Lorsque le débit tombe en dessous de 50 % de la valeur initiale, retirez la sonde. Séchez rapidement la zone et ajoutez le fixateur pour fixer la zone de blessure à l’extérieur.Ensuite, tenez rapidement l’artère près de la zone de blessure avec des forceps. Couper en aval du filetage inférieur et en amont du fil supérieur. Placez le tissu sur la boîte de culture de tissus en plastique dans la même orientation que celle qui a été recueillie et ajoutez quelques gouttes du fixateur.À l’aide d’un scalpel, nettoyez le tissu supplémentaire autour de l’artère. Assurez-vous d’enregistrer l’orientation du flux sanguin en coupant une extrémité horizontalement et l’autre effilée ou oblique. Placer l’échantillon dans un fixateur pendant une heure à température ambiante, puis stocker l’échantillon dans du paraformaldéhyde à 1% à 4 degrés Celsius jusqu’à ce qu’il soit envoyé dans de la glace humide pour analyse par microscopie électronique.Les données ont été tracées sous la forme d’une courbe de survie de Kaplan-Meier, un diagramme à points avec des barres montrant le flux sanguin terminal au moment de l’arrêt du flux sanguin ou de la fin d’une expérience, ou sous forme de graphique linéaire. Le flux sanguin a augmenté soudainement dans certains cas après une diminution progressive pendant quelques minutes, indiquant une excrétion partielle du thrombus en croissance et a été considéré comme un événement d’embolisation. La morphologie du thrombus occlusif a également été étudiée à l’aide de cette méthode.Le prélèvement rapide de l’échantillon pendant le processus de thrombose est l’étape la plus importante, car un retard dans ce processus peut entraîner une mauvaise interprétation de notre analyse structurelle.

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Le modèle de thrombose induite par FeCl3 chez la souris est décrit ici. Une méthode de surveillance de la croissance d’un thrombus par observation par microscopie intravitale sur un vaisseau mésentérique et par mesure du débit sanguin dans l’artère carotide est présentée.

Chlorure ferrique induite souris thrombose type sur l&#39;artère carotide et Mesentery navire

Nos objectifs étaient de concevoir, fabriquer et tester stents ferromagnétiques pour la capture des cellules endothéliales. Dix stents ont été testés pour la fracture et 10 autres stents ont été testés pour le magnétisme retenu. Enfin, 10 stents ont été testés in vitro et 8 autres stents ont été implantés dans 4 porcs pour montrer capture et la conservation cellule.

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Ce protocole décrit l'application de la tomographie combinée fluorescent proche infrarouge (NIRF) imagerie et micro-ordinateur (microCT) pour la visualisation de thromboembolie cérébrale. Cette technique permet la quantification de la charge de thrombus et d'évolution. La technique d'imagerie marqué par fluorescence NIRF visualise un thrombus dans le cerveau excisé, alors que la technique de thrombus à l'intérieur de la microCT visualise les animaux vivants en utilisant des nanoparticules d'or.

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Présentées ici sont deux méthodes qui peuvent être utilisés individuellement ou en combinaison pour analyser l’effet de la protéine bêta-amyloïde sur structure de caillot de fibrine. Inclus est un protocole créant un caillot de fibrine in vitro , suivie de turbidité de caillot et la microscopie électronique à balayage méthodes.

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Découvrez une méthode au chlorure ferrique pour induire une thrombose artérielle et prélever des échantillons pour analyse en microscopie électronique. Cette technique permet d'étudier l'architecture et la croissance du thrombus à différents stades.

Thrombose artérielle induite par le chlorure ferrique et prélèvement d’échantillons pour analyse en microscopie électronique 3D

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