Name: Dissection et isolement de tissu pulmonaire décellularisé spécifique à une région (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-29T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 25 s
Description: Découvrez l'isolement de tissu pulmonaire décellularisé spécifique à une région pour étudier la matrice extracellulaire et les interactions cellule-matrice. Cette méthode permet d'analyser les signatures protéomiques distinctes des régions pulmonaires saines et pathologiques.

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Les auteurs remercient les services d’autopsie de l’UVM pour l’obtention de poumons humains et Robert Pouliot PhD pour leurs contributions à l’ensemble des techniques de dissection. Ces études ont été appuyées par R01 HL127144-01 (DJW).

Toutes les études animales ont été réalisées conformément à l’IACUC de l’Université du Vermont (UVM). Tous les poumons humains ont été acquis auprès des services d’autopsie UVM et des études connexes ont été réalisées conformément aux directives de l’IRB de l’UVM.
NOTE: La décellularisation des poumons de porc et humain a déjà été décrite par notre groupe 7,8,9,10,21. En bref, les lobes pulmonaires entiers sont décellularisés par perfusion séquentielle des voies respiratoires et du système vasculaire avec une série de solutions détergentes et enzymatiques de 2 L à l’aide d’une pompe péristaltique : 0,1% Triton-X 100, désoxycholate de sodium 2%, chlorure de sodium 1 M, 30 μg/mL DNase/1,3 mM MgSO4/2 mM CaCl2, acide peracétique 0,1%/éthanol 4%, et un lavage à l’eau désionisée. Les méthodes standard pour confirmer une décellularisation efficace comprennent la détermination de <50 ng / mg d’ADN double brin résiduel dans les poumons décellularisés et l’absence de fragments d’ADN par électrophorèse sur gel, et la coloration nucléaire par coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H & E) 9,21.
1. Configuration
<ol><li>Rassemblez tout l’équipement nécessaire à la procédure de dissection, y compris une cocotte en verre, deux paires de pinces chirurgicales, une paire de pinces et une paire de ciseaux chirurgicaux, ainsi qu’un autoclave avant utilisation.</li>
	<li>Procurez-vous une section du poumon, placez-la dans la cocotte en verre et orientez-la de manière à ce que l’extrémité supérieure des voies respiratoires puisse être vue clairement.</li>
	<li>Identifiez l’extrémité proximale du système vasculaire et gardez-la intacte jusqu’aux étapes ultérieures. L’extrémité du système vasculaire doit être clairement visible et de couleur blanche entièrement opaque.</li>
	<li>À l’aide d’une pince à épiler et de ciseaux chirurgicaux, retirez toute plèvre qui pourrait tapisser l’extérieur du poumon et jetez-la.</li>
</ol>2. Exposition des voies respiratoires
<ol><li>À l’aide d’une technique d’étalement avec les ciseaux chirurgicaux, travaillez doucement pour exposer les voies respiratoires supplémentaires.<ol><li>Localisez la plus grande voie respiratoire, qui aura généralement un diamètre d’environ 2 à 4 cm. Une autre façon d’identifier une voie respiratoire consiste à observer des anneaux cartilagineux, qui peuvent être détectés visuellement ou par palpation du tissu.</li>
		<li>À l’aide d’une paire de pinces, palper le long des voies respiratoires afin de déterminer l’emplacement des voies respiratoires invisibles à une profondeur d’environ 1 po. REMARQUE: Étant tapissée d’anneaux cartilagineux, les voies respiratoires sont généralement plus dures que les autres tissus pulmonaires. En tant que tel, trouver et palper les voies respiratoires invisibles devrait être relativement simple.</li>
		<li>En tenant les ciseaux chirurgicaux parallèles aux voies respiratoires, insérez les extrémités fermées dans le tissu entourant directement les voies respiratoires invisibles.</li>
		<li>Ouvrez lentement les ciseaux chirurgicaux pour séparer doucement la membrane environnante. Par la suite, retirez les ciseaux chirurgicaux et évitez de couper quelque tissu que ce soit.</li>
		<li>Répétez ce processus par intermittence tout au long de la procédure de dissection pour continuer à exposer les voies respiratoires.</li>
	</ol></li>
	<li>À l’aide des ciseaux chirurgicaux, coupez les voies respiratoires aux points de ramification et disséquez indépendamment l’une ou l’autre branche. REMARQUE : Un embranchement est un endroit où une voie aérienne se divise en deux voies respiratoires distinctes.</li>
	<li>Sectionner les régions des voies respiratoires une fois confiant que les extrémités intactes resteront identifiables et facilement localisées pour une dissection ultérieure.</li>
	<li>Placez les régions sectionnées des voies respiratoires dans le tube correspondant. La taille des régions sectionnées varie selon l’échantillon mais, en général, varie entre 1 et 5 cm de longueur. La largeur varie en fonction de l’emplacement relatif le long de l’arbre des voies respiratoires, les régions distales conservant des largeurs plus petites que les régions plus proximales.</li>
</ol>3. Exposer et exciser les régions du système vasculaire
<ol><li>Appliquez une légère pression sur le système vasculaire et éloignez-vous lentement des voies respiratoires. Laissez le système vasculaire s’étirer légèrement et utilisez des ciseaux chirurgicaux pour séparer davantage le système vasculaire des voies respiratoires. NOTE: Trop de pression déchirera le système vasculaire. Si le système vasculaire se déchire, placez simplement cette section du système vasculaire dans le tube étiqueté correspondant et identifiez son extrémité intacte.</li>
	<li>Lorsqu’un point de ramification de l’arbre vasculaire a été exposé, utilisez des ciseaux chirurgicaux et une pince à épiler pour exposer des régions plus inférieures du système vasculaire.<ol><li>Commencez par insérer les extrémités fermées des ciseaux chirurgicaux juste en dessous d’un point de ramification et entre les deux régions vasculaires correspondantes.</li>
		<li>Ouvrez lentement les ciseaux pour écarter les tissus sous-jacents.</li>
		<li>Par intermittence, utilisez une pince à épiler pour enlever le tissu qui a été écarté à l’aide des ciseaux chirurgicaux, ainsi que tout autre tissu entourant directement le système vasculaire.</li>
	</ol></li>
	<li>Lorsque le système vasculaire couvre des régions des voies respiratoires ou devient encombrant à n’importe quelle étape de la procédure de dissection, coupez le système vasculaire à un point de ramification et disséquez davantage le long de l’une ou l’autre branche indépendamment.</li>
	<li>Séparer les régions du système vasculaire une fois confiant que les extrémités intactes resteront identifiables et facilement localisées pour une dissection ultérieure.</li>
</ol>4. Identification et excision du tissu alvéolaire
<ol><li>À l’aide d’une paire de pinces ou d’une pince à épiler, pincez puis arrachez doucement de petites régions de tissu alvéolaire.<ol><li>Localisez une région de tissu qui n’est pas à proximité directe des voies respiratoires ou du système vasculaire.</li>
		<li>À l’aide de la pince à épiler, pincez une petite région du tissu qui semble être dépourvue de tout système vasculaire ou des voies respiratoires.</li>
		<li>Déchirez la région pincée du tissu du poumon.</li>
	</ol></li>
	<li>Observez la région du tissu prélevé et confirmez s’il s’agit ou non de tissu alvéolaire. REMARQUE: Le tissu alvéolaire est présent dans tout le poumon, de sorte qu’il peut et doit être enlevé tout au long de la procédure de dissection. Tout tissu qui ne peut pas être facilement identifié comme étant principalement des alvéoles, des systèmes vasculaires ou des voies respiratoires doit être classé comme tissu en vrac et placé dans le tube marqué correspondant.</li>
</ol>

Isolement régional de tissu pulmonaire décellularisé pour étudier les interactions cellule-cellule et cellule-ECM

<ol><li>López-Campos, J. L., Tan, W., Soriano, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Global burden of COPD.</a> Respirology. 21 (1), 14-23 (2016).</li>
<li>Raherison, C., Girodet, P. -O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Review%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of COPD.</a> European Respiratory Review. 18 (114), 213-221 (2009).</li>
<li>Glass, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+pulmonary+fibrosis%3A+Current+and+future+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22The+Clinical+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Idiopathic pulmonary fibrosis: Current and future treatment.</a> The Clinical Respiratory Journal. 16 (2), 84-96 (2022).</li>
<li>Dickinson, K. M., Collaco, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics+in+Review%22%5BJournal%5D)">Cystic Fibrosis.</a> Pediatrics in Review. 42 (2), 55-67 (2021).</li>
<li>DeFreitas, M. R., McAdams, H. P., Azfar Ali, H., Iranmanesh, A. M., Chalian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+lung+transplantation%3A+update+on+imaging+manifestations+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%3A+Cardiothoracic+Imaging%22%5BJournal%5D)">Complications of lung transplantation: update on imaging manifestations and management.</a> Radiology: Cardiothoracic Imaging. 3 (4), e190252(2021).</li>
<li>Young, K. A., Dilling, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">The future of lung transplantation.</a> Chest. 155 (3), 465-473 (2019).</li>
<li>Wagner, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+decellularization+and+recellularization+of+normal+versus+emphysematous+human+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Comparative decellularization and recellularization of normal versus emphysematous human lungs.</a> Biomaterials. 35 (10), 3281-3297 (2014).</li>
<li>Booth, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acellular+normal+and+fibrotic+human+lung+matrices+as+a+culture+system+for+in+vitro+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acellular normal and fibrotic human lung matrices as a culture system for in vitro investigation.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 186 (9), 866-876 (2012).</li>
<li>Uhl, F. E., Wagner, D. E., Weiss, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+decellularized+lung+matrices+for+cell+culture+and+protein+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Preparation of decellularized lung matrices for cell culture and protein analysis.</a> Methods in Molecular Biology. 1627, 253-283 (2017).</li>
<li>Wagner, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+scaffolds+of+acellular+human+and+porcine+lungs+for+high+throughput+studies+of+lung+disease+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional scaffolds of acellular human and porcine lungs for high throughput studies of lung disease and regeneration.</a> Biomaterials. 35 (9), 2664-2679 (2014).</li>
<li>Uhl, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+role+of+glycosaminoglycans+in+decellularized+lung+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Functional role of glycosaminoglycans in decellularized lung extracellular matrix.</a> Acta Biomaterialia. 102, 231-246 (2020).</li>
<li>Saldin, L. T., Cramer, M. C., Velankar, S. S., White, L. J., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+hydrogels+from+decellularized+tissues%3A+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix hydrogels from decellularized tissues: structure and function.</a> Acta Biomaterialia. 49, 1-15 (2017).</li>
<li>Giobbe, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+hydrogel+derived+from+decellularized+tissues+enables+endodermal+organoid+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix hydrogel derived from decellularized tissues enables endodermal organoid culture.</a> Nature Communications. 10 (1), 5658(2019).</li>
<li>Petrou, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clickable+decellularized+extracellular+matrix+as+a+new+tool+for+building+hybrid-hydrogels+to+model+chronic+fibrotic+diseases+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry.+B%22%5BJournal%5D)">Clickable decellularized extracellular matrix as a new tool for building hybrid-hydrogels to model chronic fibrotic diseases in vitro.</a> Journal of Materials Chemistry. B. 8 (31), 6814-6826 (2020).</li>
<li>Nizamoglu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+of+fibrosis+using+crosslinked+native+extracellular+matrix-derived+hydrogels+to+modulate+biomechanics+without+changing+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">An in vitro model of fibrosis using crosslinked native extracellular matrix-derived hydrogels to modulate biomechanics without changing composition.</a> Acta Biomaterialia. 147, 50-62 (2022).</li>
<li>Marhuenda, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+extracellular+matrix+hydrogels+enhance+preservation+of+type+ii+phenotype+in+primary+alveolar+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Lung extracellular matrix hydrogels enhance preservation of type ii phenotype in primary alveolar epithelial cells.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (9), 4888(2022).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+tissue+extracellular+matrix-derived+hydrogels+protect+against+radiation-induced+lung+injury+by+suppressing+epithelial-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Lung tissue extracellular matrix-derived hydrogels protect against radiation-induced lung injury by suppressing epithelial-mesenchymal transition.</a> Journal of Cellular Physiology. 235 (3), 2377-2388 (2020).</li>
<li>Pouliot, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+a+naturally+derived+lung+extracellular+matrix+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of a naturally derived lung extracellular matrix hydrogel.</a> Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 104 (8), 1922-1935 (2016).</li>
<li>Pouliot, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+lung-derived+extracellular+matrix+hydrogel+properties+are+dependent+on+pepsin+digestion+time%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Porcine lung-derived extracellular matrix hydrogel properties are dependent on pepsin digestion time.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 26 (6), 332-346 (2020).</li>
<li>de Hilster, R. H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+lung+extracellular+matrix+hydrogels+resemble+the+stiffness+and+viscoelasticity+of+native+lung+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Human lung extracellular matrix hydrogels resemble the stiffness and viscoelasticity of native lung tissue.</a> American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 318 (4), L698-L704 (2020).</li>
<li>Hoffman, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+and+disease+specific+human+lung+extracellular+matrix+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Regional and disease specific human lung extracellular matrix composition.</a> Biomaterials. 293, 121960(2023).</li>
<li>Sicard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+and+anatomical+variations+in+lung+tissue+stiffness%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Aging and anatomical variations in lung tissue stiffness.</a> American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 314 (6), L946-L955 (2018).</li>
</ol>

Aucun des auteurs n’a de conflit d’intérêts.

Les tissus décellularisés provenant d’humains et d’autres espèces sont fréquemment utilisés comme biomatériaux pour étudier la composition de la MEC ainsi que les interactions cellule-MCE dans des modèles de culture ex vivo, y compris les hydrogels 3D12,13. À l’instar d’autres organes, les poumons décellularisés ont déjà été utilisés pour déterminer les différences de composition de la MCE dans les poumons sains par rapport aux poumons malades (c.-à-d. e...

Les maladies pulmonaires, y compris la bronchopneumopathie chronique obstructive (MPOC), la fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) et la fibrose kystique (FK), demeurent actuellement sans remède 1,2,3,4. La transplantation pulmonaire est souvent la seule option pour les patients à un stade avancé, mais cela reste une option limitée à la fois en raison de l’approvisionnement en poumons de donneurs appropriés et du rejet aigu et chronique après la transplantation 3,5,6. En tant que tel, il existe un besoin critique de nouvelles stratégies de traitement. Une approche prometteuse en bio-ingénierie respiratoire est l’application d’échafaudages dérivés de tissus préparés à partir de tissus pulmonaires natifs décellularisés. Comme les échafaudages pulmonaires entiers acellulaires conservent une grande partie de la complexité de la composition et de la bioactivité de la matrice extracellulaire native (ECM), ils ont été étudiés de manière intensive pour l’ingénierie des organes entiers et comme modèles améliorés pour étudier les mécanismes des maladies pulmonaires 7,8,9,10. Parallèlement, on s’intéresse de plus en plus à l’utilisation de tissus décellularisés provenant de différents organes, y compris les poumons, comme hydrogels et autres substrats pour étudier les interactions cellule-cellule et cellule-ECM dans les modèles organoïdes et autres modèles de culture tissulaire 11,12,13,14,15,16,17 . Ceux-ci fournissent des modèles plus pertinents que les substrats disponibles dans le commerce, tels que Matrigel, dérivés de sources tumorales. Cependant, les informations sur les hydrogels d’origine pulmonaire humaine sont relativement limitées à l’heure actuelle. Nous avons déjà décrit des hydrogels dérivés de poumons de porcs décellularisés et avons caractérisé à la fois leurs propriétés mécaniques et matérielles, ainsi que démontré leur utilité en tant que modèles de culture cellulaire18,19. Un rapport récent a détaillé la caractérisation mécanique et viscoélastique initiale des hydrogels dérivés de poumons humains normaux et malades décellularisés (BPCO, FPI)20. Nous avons également présenté des données initiales caractérisant la teneur en glycosaminoglycanes des poumons humains normaux et des BPCO décellularisés, ainsi que leur applicabilité pour étudier les interactions cellule-cellule et cellule-ECM11.
Ces exemples illustrent la puissance de l’utilisation d’ECM pulmonaires humains décellularisés à des fins d’investigation. Cependant, le poumon est un organe complexe, et la structure et la fonction varient dans différentes régions du poumon, y compris la composition ECM et d’autres propriétés telles que la rigidité21,22. En tant que tel, il est intéressant d’étudier l’ECM dans des régions individuelles du poumon, y compris la trachée et les grandes voies respiratoires, les voies respiratoires de taille moyenne et petite, et les alvéoles, ainsi que les grands, moyens et petits vaisseaux sanguins. À cette fin, nous avons développé une méthode fiable et reproductible pour disséquer les poumons humains et porcins décellularisés et isoler ensuite chacune de ces régions anatomiques. Cela a permis une analyse différentielle détaillée de la teneur en protéines régionales dans les poumons normaux et malades21.

<table><tbody><tr><td>Bonn Ciseaux</td><td>Fine Science Tools</td><td>14184-09</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 - Pince</td> fine <td>Fine Science Tools</td><td>11254-02</td><td></td></tr><tr><td>Pince, courbée, S/S, émoussée, dentelée - 130mm</td><td>CellPath</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux fins trempés</td><td>Outils de science fine</td><td>14090-11</td><td></td></tr><tr><td>Pince à iris Moria</td><td>Outils de science fine</td><td>11373-22</td><td></td></tr><tr><td>Cocotte en verre Pyrex</td><td>Cole-Parmer</td><td>3175-10</td><td></td></tr></tbody></table>

dissection et isolement de tissu pulmonaire décellularisé spécifique à une région

Dissection and Isolation of Region-Specific Decellularized Lung Tissue

La transplantation pulmonaire est souvent la seule option pour les patients aux derniers stades d’une maladie pulmonaire grave, mais elle est limitée à la fois en raison de l’approvisionnement en poumons de donneurs appropriés et du rejet aigu et chronique après la transplantation. Il est impératif de déterminer de nouvelles approches de bio-ingénierie pour le remplacement des poumons malades afin d’améliorer la survie des patients et d’éviter les complications associées aux méthodologies actuelles de transplantation. Une approche alternative implique l’utilisation de poumons entiers décellularisés dépourvus de constituants cellulaires qui sont généralement la cause du rejet aigu et chronique. Étant donné que le poumon est un organe si complexe, il est intéressant d’examiner les composants de la matrice extracellulaire de régions spécifiques, y compris le système vasculaire, les voies respiratoires et le tissu alvéolaire. Le but de cette approche est d’établir des méthodes simples et reproductibles par lesquelles les chercheurs peuvent disséquer et isoler des tissus spécifiques à une région à partir de poumons entièrement décellularisés. Le protocole actuel a été conçu pour les poumons de porc et d’homme, mais peut également être appliqué à d’autres espèces. Pour ce protocole, quatre régions du tissu ont été spécifiées: les voies respiratoires, le système vasculaire, les alvéoles et le tissu pulmonaire en vrac. Cette procédure permet d’obtenir des échantillons de tissus qui représentent plus précisément le contenu du tissu pulmonaire décellularisé par opposition aux méthodes traditionnelles d’analyse en vrac.

Un schéma général du protocole est illustré à la figure 1. Une fois maîtrisée, la dissection régionale du tissu pulmonaire décellularisé est facilement reproductible. La détermination de la catégorisation de chaque échantillon de tissu sectionné est impérative pour le succès de la procédure de dissection. Le tissu vasculaire est beaucoup plus élastique que les voies respiratoires, de sorte que l’utilisation de forceps pour étirer le tissu est souvent un indicateur fort de savoir si un échant...

Un protocole pour l’isolement du tissu pulmonaire décellularisé régional est présenté ici. Ce protocole fournit un outil puissant pour étudier les complexités de la matrice extracellulaire et des interactions cellule-matrice.

Dissection et isolement de tissu pulmonaire décellularisé spécifique à une région

Lung transplantation is often the only option for patients in the later stages of severe lung disease, but this is limited both due to the supply of ...

Les organes décellularisés sont continuellement utilisés dans une variété d’applications d’ingénierie tissulaire. Cependant, la plupart de ces études considèrent l’organe dans son ensemble et non les régions anatomiques individuelles. Nous avons développé cette méthode pour examiner les régions anatomiques individuelles des poumons humains décellularisés pour des systèmes modèles plus précis pour les applications en aval.Lors du développement de systèmes modèles, il est important de prendre en compte différents aspects de la conception afin que votre système récapitule au mieux la biologie normale. Pour les poumons, cela comprend des facteurs tels que le stress environnemental, le stress mécanique cyclique et l’élasticité, qui peuvent différer entre les régions indépendantes du poumon. En utilisant cette méthode, nous avons pu montrer que la matrice extracellulaire dérivée de régions pulmonaires anatomiques individuelles de poumons sains et malades a des signatures protéomiques distinctes.Cela nous permet de mieux comprendre les maladies pulmonaires et potentiellement de trouver de nouvelles avenues thérapeutiques. Pour poursuivre cette recherche, notre laboratoire développe actuellement des hydrogels tridimensionnels à partir de matrice extracellulaire pulmonaire saine et malade. Ces hydrogels nous permettent d’effectuer une modélisation organoïde in vitro afin d’élucider le rôle des interactions de la matrice extracellulaire sur le comportement cellulaire correspondant.

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Bioingénierie

Nous avons développé une matrice extracellulaire et des poumons décellularisé bioréacteur roman biomimétiques qui peuvent être utilisés pour générer des tissus pulmonaires fonctionnelles. Par ensemencement des cellules dans la matrice et la culture dans le bioréacteur, nous générons des tissus qui démontre les échanges gazeux efficaces lorsqu'elles sont transplantées in vivo pour de courtes périodes de temps.

Procédure pour l&#39;ingénierie du poumon

Une préparation hautement purifiée de cellules de souris pulmonaires dendritiques est décrite. Un accent particulier est donné à l'isolement de sous-ensemble de cellules dendritiques conventionnelles.

L&#39;isolement des cellules de souris poumon dendritiques

Cette vidéo présente une méthode de production d’échafaudages à matrice extracellulaire décellularisée ou ECM en appliquant une perfusion antérograde de détergents à travers le système vasculaire. Les échafaudages structurels de la MEC peuvent ensuite être utilisés pour analyser le remodelage de la MEC associé aux maladies cardiopulmonaires.

Décellularisation du complexe cardio-pulmonaire : une technique de décellularisation du cœur et des poumons à partir d’un modèle murin

La décellularisation de l’organe entier produit des échafaudages biologiques naturels qui peuvent être utilisés pour la médecine régénérative. La description d’un modèle de primate non humain de régénération pulmonaire dans lequel des poumons entiers sont décellularisés, puis ensemencés avec des cellules souches adultes et des cellules endothéliales dans un bioréacteur qui facilite la circulation vasculaire et la ventilation des milieux liquides, est présentée.

Décellularisation et recellularisation pulmonaires de primates non humains à l’aide d’un bioréacteur spécialisé à grands organes

Ce protocole dirige efficacement la souris souches embryonnaires endoderme définitif dérivé des cellules matures voies respiratoires cellules épithéliales. Cette technique de différenciation utilise trois dimensions échafauds pulmonaires décellularisé pour diriger la spécification de la lignée de poumon, dans un environnement de culture exempt de sérum défini.

Génération de cellules de souris Airway épithéliales ESC dérivés Utilisation décellularisé Lung échafauds

Nous présentons ici un protocole pour un ex vivo du poumon Cancer du modèle qui imite les étapes de la progression tumorale et contribue à isoler une tumeur primaire, diffuser les cellules tumorales et les lésions métastatiques.

Cellulaire et acellulaire poumon modèle pour étudier les métastases tumorales

Ce protocole vise à décellulariser le cœur et les poumons des souris. Les échafaudages de matrice extracellulaire (ECM) qui en résultent peuvent être immunocolorés et imagés pour cartographier l’emplacement et la topologie de leurs composants.

Décellularisation du complexe cardiopulmonaire murin

Ce protocole décrit une méthode pour générer des tissus pulmonaires modifiés reproductibles à petite échelle, en repeuplant des tranches pulmonaires décellularisées coupées avec précision avec des cellules épithéliales alvéolaires de type 2, des fibroblastes et des cellules endothéliales.

Tissus pulmonaires modifiés préparés à partir de tranches pulmonaires décellularisées

Le protocole élucide deux méthodologies de décellularisation distinctes appliquées aux tissus pulmonaires bovins natifs, fournissant un compte rendu complet de leurs caractérisations respectives.

Développement et caractérisation d’hydrogels à matrice extracellulaire pulmonaire décellularisée

Cet article décrit comment créer des poumons de souris issus de la bio-ingénierie à l’aide de méthodes de décellularisation et de recellularisation. Il détaille également la transplantation pulmonaire orthotopique ultérieure.

Transplantation de poumon issu de la bio-ingénierie à l’aide de poumons de souris décellularisés et de cellules endothéliales humaines primaires

Le protocole décrit ci-dessous est un moyen simple et efficace d’isoler des cellules contenant des rétinoïdes dans des populations de cellules pulmonaires très hétérogènes en utilisant l’autofluorescence rétinoïde spécifique et en utilisant le tri cellulaire activé par fluorescence.

Isolement de cellules contenant des rétinoïdes pulmonaires par tri cellulaire

Découvrez l'isolement de tissu pulmonaire décellularisé spécifique à une région pour étudier la matrice extracellulaire et les interactions cellule-matrice. Cette méthode permet d'analyser les signatures protéomiques distinctes des régions pulmonaires saines et pathologiques.

Dissection et isolement de tissu pulmonaire décellularisé spécifique à une région

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