Name: Prélèvement de liquide céphalorachidien et de sang de la veine caudale latérale chez le rat pendant les enregistrements EEG (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-01T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 46 s
Description: Apprenez le prélèvement simultané de liquide céphalorachidien et de plasma chez le rat épileptique pendant l'EEG vidéo. Cette méthode optimise la qualité des échantillons sans hémolyse pour l'identification de biomarqueurs épileptiques fiables.

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Cette étude a été financée par une subvention du programme de travail Horizon 2020 de l’Union européenne (appel H2020-FETOPEN-2018-2020) dans le cadre de la convention de subvention 964712 (PRIME ; à M. Simonato).

Prélèvement de liquide céphalo-rachidien et de sang chez le rat avec enregistrement EEG simultané

<ol><li>Hanin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+and+blood+biomarkers+of+status+epilepticus%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid and blood biomarkers of status epilepticus.</a> Epilepsia. 61 (1), 6-18 (2020).</li>
<li>Pitkänen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+development+of+biomarkers+for+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Advances in the development of biomarkers for epilepsy.</a> The Lancet Neurology. 15 (8), 843-856 (2016).</li>
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<li>Lorenzo, N. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intractable+frontal+lobe+epilepsy%3A+pathological+and+MRI+features%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+research%22%5BJournal%5D)">Intractable frontal lobe epilepsy: pathological and MRI features.</a> Epilepsy research. 20 (2), 171-178 (1995).</li>
<li>van Dellen, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epilepsy+surgery+outcome+and+functional+network+alterations+in+longitudinal+MEG%3A+a+minimum+spanning+tree+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroImage%22%5BJournal%5D)">Epilepsy surgery outcome and functional network alterations in longitudinal MEG: a minimum spanning tree analysis.</a> NeuroImage. 86, 354-363 (2014).</li>
<li>Shah, A. K., Mittal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+electroencephalography+monitoring%3A+Indications+and+presurgical+planning%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Indian+Academy+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Invasive electroencephalography monitoring: Indications and presurgical planning.</a> Annals of Indian Academy of Neurology. 17 (Suppl 1), S89-S94 (2014).</li>
<li>Whiting, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+review+of+the+effectiveness+and+cost-effectiveness+of+neuroimaging+assessments+used+to+visualise+the+seizure+focus+in+people+with+refractory+epilepsy+being+considered+for+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Health+technology+assessment%22%5BJournal%5D)">A systematic review of the effectiveness and cost-effectiveness of neuroimaging assessments used to visualise the seizure focus in people with refractory epilepsy being considered for surgery.</a> Health technology assessment. 10 (4), 1-iv (2006).</li>
<li>Lenkov, D. N., Volnova, A. B., Pope, A. R., Tsytsarev, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+and+limitations+of+brain+imaging+methods+in+the+research+of+absence+epilepsy+in+humans+and+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience+methods%22%5BJournal%5D)">Advantages and limitations of brain imaging methods in the research of absence epilepsy in humans and animal models.</a> Journal of neuroscience methods. 212 (2), 195-202 (2013).</li>
<li>Leach, J. P., Stephen, L. J., Salveta, C., Brodie, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Which+electroencephalography+%28EEG%29+for+epilepsy%3F+The+relative+usefulness+of+different+EEG+protocols+in+patients+with+possible+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurology%2C+neurosurgery%2C+and++psychiatry%22%5BJournal%5D)">Which electroencephalography (EEG) for epilepsy? The relative usefulness of different EEG protocols in patients with possible epilepsy.</a> Journal of neurology, neurosurgery, and psychiatry. 77 (9), 1040-1042 (2006).</li>
<li>Huppertz, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+interictal+delta+and+epileptiform+EEG+activity+associated+with+focal+epileptogenic+brain+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroImage%22%5BJournal%5D)">Localization of interictal delta and epileptiform EEG activity associated with focal epileptogenic brain lesions.</a> NeuroImage. 13 (1), 15-28 (2001).</li>
<li>Linder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+dried+blood+spot+and+plasma+sampling+for+therapeutic+drug+monitoring+of+antiepileptic+drugs+in+children+with+epilepsy%3A+A+step+towards+home+sampling%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+biochemistry%22%5BJournal%5D)">Comparison between dried blood spot and plasma sampling for therapeutic drug monitoring of antiepileptic drugs in children with epilepsy: A step towards home sampling.</a> Clinical biochemistry. 50 (7-8), 418-424 (2017).</li>
<li>Wegner, I., Wilhelm, A. J., Lambrechts, D. A., Sander, J. W., Lindhout, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+oral+contraceptives+on+lamotrigine+levels+depends+on+comedication%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+neurologica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Effect of oral contraceptives on lamotrigine levels depends on comedication.</a> Acta neurologica Scandinavica. 129 (6), 393-398 (2014).</li>
<li>Palmio, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CSF+and+plasma+adipokines+after+tonic-clonic+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22Seizure%22%5BJournal%5D)">CSF and plasma adipokines after tonic-clonic seizures.</a> Seizure. 39, 10-12 (2016).</li>
<li>Hogg, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevation+in+plasma+tRNA+fragments+precede+seizures+in+human+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Elevation in plasma tRNA fragments precede seizures in human epilepsy.</a> Journal of Clinical Investigation. 129 (7), 2946-2951 (2019).</li>
<li>Ellul, M., Solomon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+encephalitis+-+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+medicine%22%5BJournal%5D)">Acute encephalitis - diagnosis and management.</a> Clinical medicine. 18 (2), 155-159 (2018).</li>
<li>Diamond, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1%CE%B2+associations+with+posttraumatic+epilepsy+development%3A+a+genetics+and+biomarker+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">IL-1β associations with posttraumatic epilepsy development: a genetics and biomarker cohort study.</a> Epilepsia. 55 (7), 1109-1119 (2014).</li>
<li>Auvin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+clinical+trials+to+investigate+clinical+and+molecular+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Prospective clinical trials to investigate clinical and molecular biomarkers.</a> Epilepsia. 58 (Suppl 3), 20-26 (2017).</li>
<li>Weber, Y. G., Nies, A. T., Schwab, M., Lerche, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+biomarkers+in+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Genetic biomarkers in epilepsy.</a> Neurotherapeutics. 11 (2), 324-333 (2014).</li>
<li>Fornari, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+stereotaxic+surgery+and+animal+welfare+outcome+improvements+for+behavioral+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Rodent stereotaxic surgery and animal welfare outcome improvements for behavioral neuroscience.</a> Journal of Visualized Experiments. (59), e3528(2012).</li>
<li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survivable+stereotaxic+surgery+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Survivable stereotaxic surgery in rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (20), e880(2008).</li>
<li>Gardiner, T. W., Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotactic+Surgery+and+Long-Term+Maintenance+of+Cranial+Implants+in+Research+Animals%5BTitle%5D)+AND+%22Contemporary+Topics+in+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Stereotactic Surgery and Long-Term Maintenance of Cranial Implants in Research Animals.</a> Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 38 (1), 56-63 (1999).</li>
<li>Westergren, I., Johansson, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+physiological+parameters+of+rat+cerebrospinal+fluid+during+chronic+sampling%3A+evaluation+of+two+sampling+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Changes in physiological parameters of rat cerebrospinal fluid during chronic sampling: evaluation of two sampling methods.</a> Brain Research Bulletin. 27 (2), 283-286 (1991).</li>
<li>Soukupová, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impairment+of+GABA+release+in+the+hippocampus+at+the+time+of+the+first+spontaneous+seizure+in+the+pilocarpine+model+of+temporal+lobe+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Impairment of GABA release in the hippocampus at the time of the first spontaneous seizure in the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy.</a> Experimental Neurology. 257, 39-49 (2014).</li>
<li>Soukupová, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+of+Excitatory+Amino+Acids+During+EEG+Recordings+in+Freely+Moving+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (141), e58455(2018).</li>
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<li>Zeller, W., Weber, H., Panoussis, B., Bürge, T., Bergmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refinement+of+blood+sampling+from+the+sublingual+vein+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal%22%5BJournal%5D)">Refinement of blood sampling from the sublingual vein of rats.</a> Laboratory Animal. 32 (4), 369-376 (1998).</li>
<li>Wang, D., Zhao, Y., Yang, Y., Xie, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+assessment+of+multiple+repeated+percutaneous+punctures+for+the+collection+of+cerebrospinal+fluid+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Medical+and+Biological+Research%22%5BJournal%5D)">Safety assessment of multiple repeated percutaneous punctures for the collection of cerebrospinal fluid in rats.</a> Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 54 (6), e10032(2021).</li>
<li>Möller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+repeated+kindled+seizures+on+heart+rate+rhythms%2C+heart+rate+variability%2C+and+locomotor+activity+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsy+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Impact of repeated kindled seizures on heart rate rhythms, heart rate variability, and locomotor activity in rats.</a> Epilepsy & Behavior. 92, 36-44 (2019).</li>
<li>Espinosa-Garcia, C., Zeleke, H., Rojas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Stress+on+Epilepsy%3A+Focus+on+Neuroinflammation-A+Mini+Review%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Impact of Stress on Epilepsy: Focus on Neuroinflammation-A Mini Review.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (8), 4061(2021).</li>
<li>Cassar, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+levels+of+biochemical+markers+in+CSF+from+cannulated+and+non-cannulated+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparing levels of biochemical markers in CSF from cannulated and non-cannulated rats.</a> Journal of Neuroscience Methods. 192 (2), 249-253 (2010).</li>
<li>Huang, Y. L., Säljö, A., Suneson, A., Hansson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+among+different+approaches+for+sampling+cerebrospinal+fluid+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Comparison among different approaches for sampling cerebrospinal fluid in rats.</a> Brain Research Bulletin. 41 (5), 273-279 (1996).</li>
<li>Hattori, N., Takumi, A., Saito, K., Saito, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+serial+cervical+or+tail+blood+sampling+on+toxicity+and+toxicokinetic+evaluation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Toxicological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Effects of serial cervical or tail blood sampling on toxicity and toxicokinetic evaluation in rats.</a> Journal of Toxicological Sciences. 45 (10), 599-609 (2020).</li>
<li>Roncon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+profiles+in+hippocampal+granule+cells+and+plasma+of+rats+with+pilocarpine-induced+epilepsy--comparison+with+human+epileptic+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">MicroRNA profiles in hippocampal granule cells and plasma of rats with pilocarpine-induced epilepsy--comparison with human epileptic samples.</a> Scientific Reports. 5, 14143(2015).</li>
<li>van Vliet, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+procedure+for+plasma+biomarker+analysis+in+rat+models+of+epileptogenesis%3A+Focus+on+circulating+microRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Standardization procedure for plasma biomarker analysis in rat models of epileptogenesis: Focus on circulating microRNAs.</a> Epilepsia. 58 (12), 2013-2024 (2017).</li>
<li>Kirschner, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haemolysis+during+sample+preparation+alters+microRNA+content+of+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Haemolysis during sample preparation alters microRNA content of plasma.</a> PLoS One. 6 (9), e24145(2011).</li>
<li>Grimm, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancing+the+3Rs%3A+innovation%2C+implementation%2C+ethics+and+society%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Advancing the 3Rs: innovation, implementation, ethics and society.</a> Frontiers in Veterinary Science. 10, 1185706(2023).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le présent travail illustre une technique facile à maîtriser de LCR et de prélèvement sanguin chez le rat, qui peut être utile non seulement pour des études sur des modèles d’épilepsie, mais aussi pour d’autres affections ou maladies neurologiques telles que la maladie d’Alzheimer, la maladie de Parkinson ou la sclérose en plaques. Dans la recherche sur l’épilepsie, les deux procédures d’échantillonnage couplées à l’EEG vidéo sont idéales lorsqu’une corrélation entre les niveaux de différentes molécules solubles et l’act...

Le liquide céphalorachidien (LCR) et les prélèvements sanguins sont importants pour identifier et valider les biomarqueurs de l’épilepsie, tant dans la recherche préclinique que clinique 1,2. De nos jours, le diagnostic de l’épilepsie et la plupart des recherches sur les biomarqueurs de l’épilepsie se concentrent sur l’EEG et la neuroimagerie 3,4,5. Ces approches présentent toutefois plusieurs limites. Outre les mesures de routine du cuir chevelu, dans de nombreux cas, l’EEG nécessite des techniques invasives telles que les électrodes de profondeur6. Les méthodes d’imagerie cérébrale ont une faible résolution temporelle et spatiale et sont relativement coûteuses et prennent beaucoup de temps 7,8. Pour cette raison, l’identification de biomarqueurs non invasifs, peu coûteux et à base de biofluides constituerait une alternative très intéressante. De plus, ces biomarqueurs biofluides pourraient être combinés avec les approches diagnostiques disponibles pour affiner leur prédictivité.
Les patients diagnostiqués avec l’épilepsie sont systématiquement soumis à un EEG 9,10 et à des prélèvements sanguins 11,12,13,14, et beaucoup d’entre eux sont également soumis à un retrait du LCR pour exclure les causes potentiellement mortelles (c’est-à-dire les infections aiguës, l’encéphalite auto-immune)15. Ces échantillons de sang et de LCR peuvent être utilisés dans la recherche clinique visant à identifier des biomarqueurs de l’épilepsie. Par exemple, Hogg et ses collègues ont découvert qu’une augmentation de trois fragments d’ARNt plasmatiques précède l’apparition de crises dans l’épilepsie humaine14. De même, les taux d’interleukine-1bêta (IL-1β) dans le LCR humain et le sérum, exprimés par le rapport des taux d’IL-1β dans le LCR par rapport au sérum, peuvent prédire le développement de l’épilepsie post-traumatique après un traumatisme crânien16. Ces études soulignent l’importance de l’échantillonnage des biofluides pour la recherche sur les biomarqueurs de l’épilepsie, mais elles se heurtent à de multiples limites intrinsèques aux essais cliniques, par exemple, le facteur cofondateur des médicaments antiépileptiques (DEA) dans le sang, le manque fréquent d’informations sur l’étiologie, les contrôles inadéquats, le nombre modeste de patients, etc. 17,18.
La recherche préclinique offre d’autres possibilités d’étudier les molécules dans les biofluides en tant que biomarqueurs potentiels de l’épilepsie. En fait, il est possible de prélever du plasma et/ou du LCR sur des animaux lors d’enregistrements EEG. De plus, l’échantillonnage peut être effectué à plusieurs reprises sur plusieurs jours de l’expérience, et un certain nombre de témoins appariés en fonction de l’âge, du sexe et de l’agression épileptique peuvent être utilisés pour améliorer la robustesse de l’étude. Ici, une technique flexible pour obtenir du LCR à partir de la citerne magna avec retrait parallèle de plasma de la veine caudale chez des rats surveillés par EEG est décrite en détail. La technique présentée présente plusieurs avantages par rapport aux méthodes alternatives. En utilisant une approche à l’aiguille papillon, il est possible de prélever plusieurs fois le LCR sans compromettre la fonction des électrodes EEG ou des implants crâniens similaires. Il s’agit d’un raffinement des procédures de retrait des cathéters intrathécaux, qui sont associées à un risque relativement élevé d’infection. De plus, l’approche de chute libre utilisée pour le prélèvement sanguin est supérieure aux autres approches de prélèvement sanguin dans la veine caudale en raison du risque d’hémolyse très réduit, dû au fait que le sang ne passe pas à travers la tubulure et qu’aucune pression de vide n’est appliquée. S’il est effectué dans des conditions strictes exemptes de germes, le risque d’infection est particulièrement faible pour les animaux. De plus, en commençant les prélèvements sanguins à l’extrémité de la queue des animaux, les prélèvements peuvent être répétés plusieurs fois. Ces techniques sont faciles à maîtriser et peuvent être appliquées dans de nombreuses études précliniques sur les troubles du système nerveux central.

<table><tbody><tr><td>Kit de prélèvement sanguin BD Vacutainer Safety-Lok</td><td>BD Italy SpA, Milan, Italie</td><td>367246</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Tubes de prélèvement sanguin (Microtainer K2E)</td><td>BD Italy SpA, Milan, Italie</td><td>365975</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Kit de perfusion ailée papillon 23G x 3/4'' 0,6 x 19 mm</td><td>Nipro, Osaka, Japon&nbsp ;</td><td>PSY-23-ET-ICU</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Centrifugeuse réfrigérée ALC PK 130R</td><td>DJB Labcare Ltd, Buckinghamshire, Angleterre</td><td>112000033</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Suture en coton 3-0</td><td>Ethicon, Johnson & Johnson surgical technologies, Raritan, New Jersey, États-Unis</td><td>7343H</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Diazépam 5 mg/2ml, Solupam</td><td>Dechra Veterinary Products, Turin, Italie</td><td>105183014 (AIC)</td><td>Solution</td></tr> Vidéo <tr><td>numérique Système d’enregistrement multimédia à 8 canaux de télémétrie EEG configuré</td><td>Data Sciences International (DSI), St Paul, MN, USA</td><td>PNM-VIDEO-008</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Système de vidéosurveillance numérique de EEG connecté mis en place</td><td>EZVIZ Network, Hangzhou, Cina</td><td>EZVIZ (V5.3.2)</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Désinfectant à base de peroxydes stabilisés et d’activité de l’ammonium quaternaire</td><td>Laboratoire Garcin-Bactinyl, France</td><td>LB 920111</td><td>Solution</td></tr><tr><td>Canule de guidage factice 8 mm</td><td>Agn Tho’s, Lindig&ouml ;, Suède</td><td>CXD-8</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Électrode 3 canaux bi-torsadé</td><td>Invivo1, Plastic One, Roanoke, Virginie, États-Unis</td><td>MS333/3-B/SPC</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Porte-électrode pour chirurgie stéréotxique</td><td>Agn Tho’s, Lindig&ouml ;, Suède</td><td>1776-P1</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Eppendorf BioSpectrometer basic</td><td>Eppendorf AG, Hambourg, Allemagne</td><td>6137</td><td>Équipement</td></tr><tr><td> Eppendorf PCR Tubes 0,2 mL</td><td>Eppendorf Srl, Milan, Italie</td><td>30124332</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Eppendorf &mu ; Cuvette G1.0</td><td>Eppendorf AG, Hambourg, Allemagne</td><td>6138</td><td></td></tr><tr><td>Équipement Aiguille d’alimentation flexible 17G pour rat</td><td>Agn Tho’s, Lindig&ouml ; Suède</td><td>7206</td><td></td></tr><tr><td>Matériau Appareil Grass</td><td>Technology Grass Technologies, Natus Neurology Incorporated, Pleasanton, Californie, États-Unis</td><td>M665G08</td><td>Équipement (amplificateur AS40, boîte de tête, câbles d’interconnexion, téléfacteur modèle RPSA S40)</td></tr><tr><td>Isoflurane 100 %, IsoFlo</td><td>Zoetis, Rome, Italie</td><td>103287025 (AIC)</td><td></td></tr><tr><td>Kétamine en solution (Imalgene)</td><td>Mériale, Toulouse, France</td><td>221300288 ( AIC)</td><td>Solution</td></tr><tr><td>Chlorure de lithium&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich, Milan, Italie</td><td>L9650</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Canule de micro-injection 31G 9 mm</td><td>Agn Tho’s, Lindig&ouml ; Suède</td><td>CXMI-9</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>MP150 : acquisition de données modulaire et&nbsp ; système d’analyse&nbsp ;</td><td>Biopac, Goleta, Californie, États-Unis</td><td>MP150WSW</td><td>Equipment</td></tr><tr><td>Pommade vétérinaire ophtalmique, Hylo night</td><td>Ursapharm, Milan, Italie</td><td>941791927 (AIC)</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Chlorhydrate de pilocarpine</td><td>Sigma-Aldrich, Milan, Italie</td><td>P6503</td><td></td></tr><tr><td>Matériau Tube PTFE avec joint</td><td>Agn Tho’s, Lindig&ouml ;, Suède</td><td>JT-10</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Saline</td><td>0,9 % NaCl, pH ajusté à 7.0</td><td></td><td>Solution</td></tr><tr><td>Bromhydrate de scopolamine trihydraté</td><td>Sigma-Aldrich, Milan, Italie</td><td>S2250</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Scopolamine méthyl nitrate</td><td>Sigma-Aldrich, Milan, Italie</td><td>S1876</td><td></td></tr><tr><td>Matériau Argent&nbsp ; sulfadiazine 1 % crème&nbsp ;</td><td>Sofar, Trezzano Rosa, Milan, Italie</td><td>025561010 (AIC)</td><td>Matériau</td></tr><tr><td>Ciment méthacrylique dentaire rapide simplex&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Kemdent, Associated Dental Products Ltd, Swindon, Royaume-Uni</td><td>ACR811</td><td></td></tr><tr><td>Matériau Appareil stéréotaxique</td><td>David Kopf Instruments, Los Angeles, CA, États-Unis</td><td>Modèle 963</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Solution de saccharose</td><td>10 % de saccharose dans de l’eau distillée</td><td>Seringue</td> de <td>solution</td>faite maison</tr><tr><td>1 mL&nbsp ;</td><td>Biosigma, Cona, Venezia, Italie</td><td>20,71,26,03,00,350</td><td></td></tr><tr><td>Télémètres</td> de matériaux <td>Data Sciences International (DSI), St Paul, MN, USA</td><td>CTA-F40</td><td></td></tr><tr><td>Analyseur de traces EEG de télémétrie</td> de matériaux <td>Data Sciences International (DSI), St Paul, MN, États-Unis</td><td>NeuroScore v3-0</td><td></td></tr><tr><td>Système de télémétrie d’équipement</td><td>Data Sciences International (DSI), St Paul, MN, États-Unis</td><td>Matériel et logiciel Ponemah core 6.51</td><td>Équipement</td></tr><tr><td>Chlorhydrate de xylazine</td><td>Sigma-Aldrich, Milan, Italie</td><td>X1251</td><td>Matériau</td></tr></tbody></table>

prélèvement de liquide céphalorachidien et de sang de la veine caudale latérale chez le rat pendant les enregistrements eeg

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Parce que la composition des fluides corporels reflète de nombreuses dynamiques physiologiques et pathologiques, des échantillons de liquides biologiques sont couramment obtenus dans de nombreux contextes expérimentaux pour mesurer des molécules d’intérêt, telles que des hormones, des facteurs de croissance, des protéines ou de petits ARN non codants. Un exemple concret est l’échantillonnage de liquides biologiques dans la recherche de biomarqueurs de l’épilepsie. Dans ces études, il est souhaitable de comparer les niveaux de molécules dans le liquide céphalorachidien (LCR) et dans le plasma, en prélevant le LCR et le plasma en parallèle et en tenant compte de la distance temporelle de l’échantillonnage entre et les crises. La combinaison de l’échantillonnage du LCR et du plasma, couplée à la surveillance vidéo-EEG chez les animaux épileptiques, est une approche prometteuse pour la validation de biomarqueurs diagnostiques et pronostiques putatifs. Ici, une procédure de retrait combiné du LCR de la citerne magna et d’un prélèvement sanguin de la veine latérale de la queue chez des rats épileptiques qui sont surveillés en permanence par vidéo-EEG est décrite. Cette procédure offre des avantages significatifs par rapport à d’autres techniques couramment utilisées. Il permet un prélèvement rapide avec un minimum de douleur ou d’invasivité, et une durée d’anesthésie réduite. De plus, il peut être utilisé pour obtenir des échantillons de LCR et de plasma chez des rats captifs et enregistrés par télémétrie EEG, et il peut être utilisé à plusieurs reprises sur plusieurs jours d’expérience. En minimisant le stress dû à l’échantillonnage en raccourcissant l’anesthésie à l’isoflurane, on s’attend à ce que les mesures reflètent plus précisément les niveaux réels des molécules étudiées dans les biofluides. En fonction de la disponibilité d’un test analytique approprié, cette technique peut être utilisée pour mesurer les niveaux de plusieurs molécules différentes tout en effectuant un enregistrement EEG en même temps.

Le résultat de différentes procédures de LCR et de prélèvement sanguin effectuées chez 9 rats témoins et 18 rats épileptiques chroniques, tous implantés avec des électrodes à 1 mois après l’ES, est rapporté en termes de taux de réussite. Après l’implantation, tous les rats ont fait l’objet d’une vidéo-EEG pendant 1 mois, au cours de laquelle le LCR et le sang ont été prélevés 5 fois tous les 3 jours pendant les deux dernières semaines de l’expérience (c’est-à-dire aux jours 52, 55, 58, 61 et 64 après l’ES ; dpSE). Des do...

Le protocole montre des prélèvements répétés de liquide céphalorachidien et de sang de rats épileptiques effectués en parallèle avec une surveillance continue du vidéo-électroencéphalogramme (EEG). Ceux-ci sont essentiels pour explorer les liens possibles entre les changements dans diverses molécules de fluides corporels et l’activité convulsive.

Prélèvement de liquide céphalorachidien et de sang de la veine caudale latérale chez le rat pendant les enregistrements EEG

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Dans nos recherches, nous visons à trouver des biomarqueurs diagnostiques et pronostiques de l’épilepsie. Afin de les valider dans les liquides biologiques, nous comparons les niveaux de substances spécifiques dans le liquide céphalo-rachidien et le plasma avec la survenue de crises spontanées chez le rat. Aujourd’hui, certains petits acides ribonucléiques non codants comme les miARN ou les fragments d’ARNt ont été identifiés comme un biomarqueur circulant de l’épilepsie, mais leur utilité en tant qu’outil de diagnostic ou de pronostic efficace et fiable dans l’épilepsie doit être confirmée.différents marqueurs circulants de l’épilepsie, nous prélevons régulièrement du plasma et du LCR de rats épileptiques. Lors de l’enregistrement EEG, l’élève trouve des crises spontanées. Au fur et à mesure que nous répétons l’échantillonnage sur plusieurs jours, nous pouvons corréler les niveaux de marqueurs avec la survenue d’une seule crise ou leur effet cumulatif.Le défi actuel est d’obtenir un volume suffisant d’échantillons de haute qualité pour les procédures analytiques suivantes sans induire de crises provoquées par le stress chez les animaux causées par leur manipulation, ce qui pourrait interférer avec les niveaux de molécules à l’étude. Il existe un besoin médical urgent non satisfait de découvrir des biomarqueurs pour les personnes atteintes d’épilepsie, en particulier les pronostiques et les risques à risque. Le prélèvement de plasma et de LCR en parallèle à la surveillance des crises EEG permet de réaliser une avancée significative pour trouver le marqueur approprié.Notre technique de prélèvement sanguin de la veine de la queue permet d’obtenir des échantillons de plasma sans hémolyse de haute qualité, car elle ne nécessite pas de vide ni de traite de la queue. La ponction Cisterna magna que nous utilisons pour prélever le LCR a une meilleure stérilité et un risque plus faible de perte de l’implant crânien par rapport à un système canulé.

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JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Modèles de souris transgéniques (Tg) de AD offrent une excellente occasion d'examiner comment et pourquoi les niveaux de Aß ou de tau dans le LCR changements que la maladie progresse chez les patients humains. Ici, nous démontrons une technique raffinée cisterna magna perforation pour l'échantillonnage CSF de série de la souris.

Une technique de recueil de série du liquide céphalorachidien de la grande citerne de souris

Cette vidéo montre la procédure d’enregistrement simultané d’électroencéphalographie (EEG) co-localisée et de potentiels de champ local (LFP) chez un rat anesthésié. Le processus consiste à préparer le rat et à fixer des électrodes stimulantes à ses coussinets de moustaches. Une électrode EEG araignée est placée sur le crâne du rat pour les mesures EEG de surface. Dans le même temps, une microélectrode multicanal est insérée dans une région spécifique du cerveau à travers un trou de bavure dans...

Enregistrements simultanés d’électroencéphalographie et de potentiel de champ local chez un rat anesthésié

Cette vidéo présente les procédures de préparation, d’enregistrement et d’analyse de source d’EEG à haute résolution sur des rats sous sédation avec un modèle préclinique particulier d’épilepsie focale dans des conditions non invasives.

Cerveau Imaging Source dans des modèles précliniques de Rat épilepsie focale utilisant haute résolution EEG Recordings

Les échantillons de sang sont utiles pour évaluer les biomarqueurs des états physiologiques ou de la maladie in vivo. Nous décrivons ici la méthodologie d’échantillonnage du sang de la veine latérale de la queue chez le rat. Cette méthode permet d’obtenir des échantillons rapides avec un minimum de douleur et d’invasivité.

L&#39;échantillonnage de sang de la veine caudale latérale de la Rat

Ce protocole décrit une méthode simple pour l’enregistrement simultané de co localisée électroencéphalographie (EEG) et multi-laminaire champ local potentiel chez un rat anesthésié. Un trou foré dans le crâne pour l’insertion d’une microélectrode est montré pour produire une distorsion négligeable du signal EEG.

Enregistrement simultané d’électroencéphalographie co localisée et le potentiel de champ Local dans rongeurs

Cette étude présente une méthode pour l’enregistrement simultané des potentiels de champs locaux dans le cerveau, les électrocardiogrammes, les électromyogrammes et respiration des signaux d’un rat librement mobile. Cette technique, ce qui réduit les coûts de l’expérimentales et simplifie l’analyse des données, contribuera à la compréhension des interactions entre le cerveau et les organes périphériques.

Enregistrements simultanés des potentiels corticaux champ Local, électrocardiogramme, électromyogramme et respiration rythmique d’un Rat librement mobile

Nous décrivons ici une méthode pour en vivo microdialyse analyser le communiqué de l’aspartate et du glutamate dans l’hippocampe ventral de rats épileptiques et non-épilepsie, en combinaison avec des enregistrements EEG. Les concentrations extracellulaires de l’aspartate et le glutamate peuvent être corrélées avec les différentes phases de la maladie.

Microdialyse d’acides aminés excitateurs durant les enregistrements EEG en se déplaçant librement des Rats

Le protocole fournit ici un échantillonnage dynamique détaillé en temps réel du liquide extracellulaire de l’hippocampe de rats éveillés à l’aide d’un système de microdialyse.

Collecte dynamique en temps réel de liquide extracellulaire hippocampique de rats conscients à l’aide d’un système de microdialyse

Une méthode d’isolement de cellules souches neurales et de cellules progénitrices d’oligodendrocytes à partir du cerveau de rats vivants est présentée ici en détail expérimental. Il permet de multiples prélèvements de ces cellules chez les mêmes animaux sans compromettre leur bien-être.

La méthode de « traite cérébrale » pour l’isolement de cellules souches neurales et de cellules progénitrices d’oligodendrocytes provenant de rats vivants

Dans cet article, nous avons décrit la procédure de chirurgie et de la manutention des conseils pour l'implantation de l'ultra-mince matrice de microélectrodes à base de polyimide (PBM-array) sur le crâne de la souris pour l'acquisition de haute densité encéphalographie (EEG) dans un modèle murin.

Haute densité enregistrements EEG des souris se déplacent librement à l&#39;aide à base de polyimide microélectrodes

Apprenez le prélèvement simultané de liquide céphalorachidien et de plasma chez le rat épileptique pendant l'EEG vidéo. Cette méthode optimise la qualité des échantillons sans hémolyse pour l'identification de biomarqueurs épileptiques fiables.

Prélèvement de liquide céphalorachidien et de sang de la veine caudale latérale chez le rat pendant les enregistrements EEG

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