Name: Injection ronde de spermatide de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-26T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Découvrez l'injection de spermatides rondes chez la souris pour améliorer l'efficacité du développement embryonnaire. Cette méthode avance la recherche sur l'azoospermie non obstructive et la fécondation assistée.

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<meta charset="utf8"></head><body>Procédure d’injection de spermatides rondes murines pour étudier le développement embryonnaire

<ol><li>Redgrove, K. A., McLaughlin, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+immune+response+in+Chlamydia+trachomatis+infection+of+the+male+genital+tract%3A+A+double-edged+sword%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of the immune response in Chlamydia trachomatis infection of the male genital tract: A double-edged sword.</a> Front Immunol. 5, 534(2014).</li>
<li>Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+injection+of+spermatozoa+and+spermatogenic+cells%3A+Its+biology+and+applications+in+humans+and+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic injection of spermatozoa and spermatogenic cells: Its biology and applications in humans and animals.</a> Reprod Biomed Online. 10 (2), 247-288 (2005).</li>
<li>Palermo, G., Joris, H., Devroey, P., Van Steirteghem, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancies+after+intracytoplasmic+injection+of+single+spermatozoon+into+an+oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte.</a> Lancet. 340 (8810), 17-18 (1992).</li>
<li>Kimura, Y., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+oocytes+injected+with+testicular+spermatozoa+or+round+spermatids+can+develop+into+normal+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mouse oocytes injected with testicular spermatozoa or round spermatids can develop into normal offspring.</a> Development. 121 (8), 2397-2405 (1995).</li>
<li>Tesarik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spermatid+injection+into+human+oocytes.+II.+Clinical+application+in+the+treatment+of+infertility+due+to+non-obstructive+azoospermia%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reprod%22%5BJournal%5D)">Spermatid injection into human oocytes. II. Clinical application in the treatment of infertility due to non-obstructive azoospermia.</a> Human Reprod. 11 (4), 780-783 (1996).</li>
<li>Tesarik, J., Mendoza, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spermatid+injection+into+human+oocytes.+I.+Laboratory+techniques+and+special+features+of+zygote+development%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reprod%22%5BJournal%5D)">Spermatid injection into human oocytes. I. Laboratory techniques and special features of zygote development.</a> Human Reprod. 11 (4), 772-779 (1996).</li>
<li>Hirabayashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+regimens+for+full-term+development+of+rabbit+oocytes+injected+with+round+spermatids%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Activation regimens for full-term development of rabbit oocytes injected with round spermatids.</a> Mol Reprod Dev. 76 (6), 573-579 (2009).</li>
<li>Ogonuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+a+marmoset+following+injection+of+elongated+spermatid+from+a+prepubertal+male%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Birth of a marmoset following injection of elongated spermatid from a prepubertal male.</a> Mol Reprod Dev. 86 (8), 928-930 (2019).</li>
<li>Niederberger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forty+years+of+IVF%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Forty years of IVF.</a> Fertil Steril. 110 (2), 185(2018).</li>
<li>Gross, K. X., Hanson, B. M., Hotaling, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Urol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection.</a> Urol Clin North Am. 47 (2), 175-183 (2020).</li>
<li>Hanson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection+into+human+oocytes%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Androl%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection into human oocytes: a systematic review and meta-analysis.</a> Asian J Androl. 23 (4), 363-369 (2021).</li>
<li>Tekayev, M., Vuruskan, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+values+and+advances+in+round+spermatid+injection+%28ROSI%29%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol%22%5BJournal%5D)">Clinical values and advances in round spermatid injection (ROSI).</a> Reprod Biol. 21 (3), 100530(2021).</li>
<li>Tanaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fourteen+babies+born+after+round+spermatid+injection+into+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fourteen babies born after round spermatid injection into human oocytes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (47), 14629-14634 (2015).</li>
<li>Tanaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ninety+babies+born+after+round+spermatid+injection+into+oocytes%3A+survey+of+their+development+from+fertilization+to+2+years+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Ninety babies born after round spermatid injection into oocytes: survey of their development from fertilization to 2 years of age.</a> Fertil Steril. 110 (3), 443-451 (2018).</li>
<li>Yang, H., Shi, L., Chen, C. D., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+generated+after+round+spermatid+injection+into+haploid+two-cell+blastomeres%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Mice generated after round spermatid injection into haploid two-cell blastomeres.</a> Cell Res. 21 (5), 854-858 (2011).</li>
<li>Moreira, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mouse+offspring+generated+by+ROSI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Transgenic mouse offspring generated by ROSI.</a> J Reprod Dev. 62 (1), 37-42 (2016).</li>
<li>Federici, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection+rescues+female+lethality+of+a+paternally+inherited+Xist+deletion+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection rescues female lethality of a paternally inherited Xist deletion in mouse.</a> PLoS Genet. 12 (10), e1006358(2016).</li>
<li>Sakamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paternally+inherited+H3K27me3+affects+chromatin+accessibility+in+mouse+embryos+produced+by+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Paternally inherited H3K27me3 affects chromatin accessibility in mouse embryos produced by round spermatid injection.</a> Development. 149 (18), 200696(2022).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+multiomics+sequencing+reveals+the+reprogramming+defects+in+embryos+generated+by+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Single-cell multiomics sequencing reveals the reprogramming defects in embryos generated by round spermatid injection.</a> Sci Adv. 8, (2022).</li>
<li>Ward, M. A., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+sperm+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic sperm injection in mice.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2018 (1), (2018).</li>
<li>Yoshida, N., Perry, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezo-actuated+mouse+intracytoplasmic+sperm+injection+%28ICSI%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Piezo-actuated mouse intracytoplasmic sperm injection (ICSI).</a> Nat Protoc. 2 (2), 296-304 (2007).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+selection+of+valuable+mutant+mouse+round+spermatids+and+strain+rescue+via+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">FACS selection of valuable mutant mouse round spermatids and strain rescue via round spermatid injection.</a> Zygote. 23 (3), 336-341 (2013).</li>
<li>Kong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+histone+deacetylase+inhibitor+%27Scriptaid%27+on+the+developmental+competence+of+mouse+embryos+generated+through+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of the histone deacetylase inhibitor 'Scriptaid' on the developmental competence of mouse embryos generated through round spermatid injection.</a> Hum Reprod. 32 (1), 76-87 (2017).</li>
<li>Hosseini, S., Salehi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tricostatin+A-treated+round+spermatid+enhances+preimplantation+embryo+developmental+competency+following+round+spermatid+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">Tricostatin A-treated round spermatid enhances preimplantation embryo developmental competency following round spermatid injection in mice.</a> Zygote. 30 (3), 373-379 (2022).</li>
<li>Kishigami, S., Wakayama, S., Nguyen, V. T., Wakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+time+restriction+for+intracytoplasmic+sperm+injection+and+round+spermatid+injection+into+activated+oocytes+for+efficient+offspring+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Similar time restriction for intracytoplasmic sperm injection and round spermatid injection into activated oocytes for efficient offspring production.</a> Biol Reprod. 70 (6), 1863-1869 (2004).</li>
<li>Tao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+activation+during+round+spermatid+injection%3A+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Oocyte activation during round spermatid injection: state of the art.</a> Reprod Biomed Online. 45 (2), 211-218 (2022).</li>
<li>Ogura, A., Ogonuki, N., Miki, H., Inoue, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinsemination+and+nuclear+transfer+using+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Microinsemination and nuclear transfer using male germ cells.</a> Int Rev Cytol. 246, 189-229 (2005).</li>
<li>Kimura, Y., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+sperm+injection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic sperm injection in the mouse.</a> Biol Reprod. 52 (4), 709-720 (1995).</li>
<li>Ogonuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-speed+congenic+strategy+using+first-wave+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A high-speed congenic strategy using first-wave male germ cells.</a> PLoS One. 4 (3), e4943(2009).</li>
<li>Abdelaal, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertility+preservation+for+pediatric+male+cancer+patients%3A+illustrating+contemporary+and+future+options%3B+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Androl+Urol%22%5BJournal%5D)">Fertility preservation for pediatric male cancer patients: illustrating contemporary and future options; a case report.</a> Transl Androl Urol. 10 (1), 520-526 (2021).</li>
<li>Eyni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+bioengineering+of+male+germ+stem+cells+to+preserve+fertility%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Advanced bioengineering of male germ stem cells to preserve fertility.</a> J Tissue Eng. 12, (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>CaCl22H2O&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>C7902° ;</td><td>Préparation du CZB</td></tr><tr><td>Glucose&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>G6152° ;</td><td>Préparation du CZB</td></tr><tr><td>HEPES-Na (de base)&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>H3784&nbsp ;</td><td>Préparation du CZB</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Beyotime&nbsp ;</td><td>C1025</td><td>FACS</td></tr><tr><td>gonadotrophine chorionique humaine (HCG)</td><td>Ningbo Second Hormone Company</td><td>HCG</td><td>Médicaments favorisant l’ovulation</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma</td><td>H3506</td><td>Élimination des cellules de la granulosa autour de l’ovocyte</td></tr><tr><td>KCl&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>P5405</td><td>Préparation de CZB</td></tr><tr><td>KH2PO4&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>P5655° ;</td><td>Préparation du CZB</td></tr><tr><td>KSOMaa</td><td>Caisson Labs</td><td>IVL04-100ML</td><td>Milieu optimisé pour le potassium simplex complété par des acides aminés</td></tr><tr><td>L-glutamine&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>G8540&nbsp ;</td><td>Préparation du CZB</td></tr><tr><td>M2</td><td>Sigma</td><td>M7167-50ML</td><td>Fluide opératoire</td></tr><tr><td>MgSO47H2O&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>M1880²</td><td>Préparation du CZB</td></tr><tr><td>Na2-EDTA2H2O&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>E5134&nbsp ;</td><td>Préparation du CZB</td></tr><tr><td>NaCl&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>S5886</td><td>Préparation de CZB</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761&nbsp ;</td><td>Préparation du CZB</td></tr><tr><td>Na-lactate 60 % sirop d = 1,32 g/L</td><td>Sigma</td><td>L7900&nbsp ;</td><td>Préparation du CZB</td></tr><tr><td>Na-pyruvate&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>P4562° ;</td><td>Préparation du CZB</td></tr><tr><td>Pointes de foret piézoélectrique (ICSI)</td><td>Eppendorf&nbsp ;</td><td>piezoXpert</td><td>Rupture de la membrane piézoélectrique</td></tr><tr><td>jument gestante gonadotrophine sérique (PMSG)</td><td>Ningbo Second Hormone Company</td><td>PMSG</td><td>Médicaments favorisant l’ovulation</td></tr><tr><td>PVA&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>P8136</td><td>Préparation du CZB</td></tr></tbody></table>

injection ronde de spermatide de souris

Mouse Round Spermatid Injection

Nous avons commencé notre enquête en examinant l’effet de l’AOA sur la capacité de développement des embryons. Une illustration schématique de la conception expérimentale est présentée à la figure 1A. Avant l’injection de spermatozoïdes, les ovocytes subissaient soit un AOA (A-ICSI), soit restaient non traités (ICSI). Des données détaillées sur le développement embryonnaire sont présentées dans le tableau 1. Les résultats n’ont révélé aucune différence significative dans les taux de clivage, de blastocyste ou de natalité entre les groupes A-ICSI et ICSI (P &gt; 0,05 ; Figure 1B). Ces résultats indiquent que l’utilisation de 10 mM de SrCl2 pendant 20 minutes n’a pas affecté le potentiel de développement des embryons.
Il a déjà été signalé qu’il n’y avait pas de différences perceptibles dans l’efficacité du développement des embryons ROSI sélectionnés soit par FACS, soit par examen visuel direct au microscope22. Nos expériences ont utilisé la technologie FACS pour identifier les RS (Figures 2A, B). Au microscope, les spermatides rondes de souris mesuraient environ 10 m de diamètre et présentaient une structure nucléole semblable à une protrusion au milieu (figure 2C). Nous postulons que la sélection par FACS est plus précise qu’un examen visuel direct au microscope. De plus, la littérature soutient l’exploration directe de la RS à travers les différences morphologiques. Les embryons ROSI ont été générés à l’aide de deux méthodes distinctes : le groupe A-ROSI, où les ovocytes ont été soumis à l’AOA avant l’injection ronde de spermatides, et le groupe ROSI-A, où les ovocytes ont été soumis à l’AOA après l’injection ronde de spermatides. Le schéma de principe de la conception expérimentale est illustré à la figure 1C. Notamment, aucune différence significative dans les taux de clivage et de blastocyste n’a été observée entre les groupes A-ROSI, ROSI-A et ICSI (P &gt; 0,05 ; Figure 1D). Les taux de blastocystes des groupes A-ROSI, ROSI-A et ICSI étaient significativement plus élevés que ceux du groupe activation (P &lt; 0,05 ; Figure 1D). Cependant, le taux de natalité du groupe ROSI était inférieur à celui du groupe ICSI, que les ovocytes aient été activés avant ou après l’injection (P &lt; 0,05 ; Figure 1D). Il est important de noter que le taux de natalité du groupe A-ROSI était légèrement supérieur à celui du groupe ROSI-A (figure 1D). Le tableau 1 présente de plus amples détails sur les données sur le développement embryonnaire.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65898/65958fig01.jpg"> 
Figure 1 : Les embryons ROSI ont montré une efficacité de développement réduite par rapport aux embryons ICSI. (A) Illustration schématique du protocole expérimental évaluant l’effet de l’activation sur le développement embryonnaire ICSI. Bleu = Les ovocytes n’étaient pas activés ; Jaune = Les ovocytes ont été activés. (B) Efficacité développementale des embryons issus de l’A-ICSI et de l’ICSI. (C) Illustration schématique du protocole expérimental de génération de différents types d’embryons. (D) Efficacité développementale des embryons dérivés d’A-ROSI, ROSI-A, A et ICSI. **, P &lt; 0,01. Abréviations : A = Activation E = Jour embryonnaire ; ROSI = Injection de spermatides rondes ; ICSI = Injection intracytoplasmique de spermatozoïdes. Les barres d’erreur indiquent l’écart-type. La comparaison des taux est effectuée à l’aide du test du chi carré. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/65958fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65898/65958fig02.jpg"> 
Figure 2 : Les spermatides rondes ont été sélectionnées par tri par cytométrie en flux. (A) Un diagramme de tri par cytométrie en flux a été utilisé pour la sélection des spermatides rondes. (B) Des images représentatives montrant la sélection de spermatides rondes. Barre d’échelle : 10 μm. Abréviations : FSC = Diffusion vers l’avant ; SSC = diffusion latérale ; 355 est la longueur d’onde d’excitation ; 460/50 et 670/30 sont deux canaux de détection sous laser de longueur d’onde 355. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/65958fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Groupe</td>
			<td colspan="3">Développement préimplantatoire</td>
			<td colspan="2">Développement post-implantatoire</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Réplicats</td>
			<td>Taux de clivage ( %)</td>
			<td>Taux de blastocystes ( %)</td>
			<td>Transfert d’embryons à 2 cellules/ N° des destinataires</td>
			<td>Taux de natalité ( %)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-ICSI</td>
			<td>5</td>
			<td>99.33 (149/150)</td>
			<td>75.17 (112/149)</td>
			<td>49/5</td>
			<td>48.98 (24/49)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-ROSI</td>
			<td>5</td>
			<td>99.33 (149/150)</td>
			<td>73.83 (110/149)</td>
			<td>44/5</td>
			<td>18.18 (8/44) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROSI-A</td>
			<td>5</td>
			<td>98.00 (147/150)</td>
			<td>64.63 (95/147)</td>
			<td>45/5</td>
			<td>13.33 (6/45) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activation</td>
			<td>5</td>
			<td>100.00 (150/150)</td>
			<td>12.00 (18/150) **</td>
			<td>51/5</td>
			<td>0.00 (0/51) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICSI</td>
			<td>5</td>
			<td>98.00 (147/150)</td>
			<td>73.47 (108/147)</td>
			<td>46/5</td>
			<td>52.17 (24/46)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 1. L’efficacité développementale des embryons issus de différents groupes.
Tableau supplémentaire 1. La proportion de différentes populations cellulaires triées par cytométrie en flux. La partie P3 est constituée de spermatides rondes. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/Supplementary%20Table%201_RE.zip" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>

Injection ronde de spermatide de souris

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Application des cellules souches embryonnaires haploïdes parthénogénétiques de souris comme substitut du sperme

Cet article rapporte une inhibition in vivo de la CENP-E par chirurgie abdominale et injection testiculaire de GSK923295, un modèle précieux pour la division méiotique masculine. En utilisant les tests d’immunofluorescence, de cytométrie en flux et de microscopie électronique à transmission, nous montrons que l’inhibition de la CENP-E entraîne un désalignement chromosomique et une instabilité du génome dans les spermatocytes de souris.

Évaluation fonctionnelle de la kinésine-7 CENP-E dans les spermatocytes à l’aide de l’inhibition in vivo , de l’immunofluorescence et de la cytométrie en flux

La méthode de manipulation cervicale présentée peut induire une pseudogrossesse chez la souris sans avoir besoin de reproduire des femelles avec des mâles vasectomisés. L’induction de la pseudogrossesse est nécessaire pour le succès du transfert d’embryons non chirurgical et de l’insémination artificielle non chirurgicale, qui sont également présentés.

Induction d’une pseudogrossesse chez les souris femelles sans avoir besoin de mâles vasectomisés avant le transfert d’embryons non chirurgical ou l’insémination artificielle

Le modèle murin AcroSensE et les méthodes d’imagerie de cellules vivantes décrits ici offrent une nouvelle approche pour étudier la dynamique du calcium dans le compartiment subcellulaire de l’acrosome des spermatozoïdes et comment ils régulent les étapes intermédiaires menant à la fusion membranaire et à l’exocytose de l’acrosome.

Imagerie en temps réel de la dynamique acrosomique du calcium et de l’exocytose dans les spermatozoïdes de souris vivants

Ici, nous présentons un protocole pour établir un modèle murin d’injection intracytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI)-transfert d’embryon (ET), nous permettant d’observer les changements liés à l’âge dans le métabolisme du glucose qui peuvent être attribués à l’ICSI, donnant ainsi un aperçu de ses impacts potentiels à long terme sur le développement humain.

Surveillance de la glycémie chez la progéniture de souris après une injection intracytoplasmique de spermatozoïdes

Découvrez l'injection de spermatides rondes chez la souris pour améliorer l'efficacité du développement embryonnaire. Cette méthode avance la recherche sur l'azoospermie non obstructive et la fécondation assistée.

Injection ronde de spermatide de souris

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