Name: Établissement d’un modèle de cancer de la coloproctite chez la souris et évaluation de l’effet thérapeutique de la médecine chinoise (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-13T12:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Découvrez l'établissement d'un modèle de cancer coloproctique chez la souris et l'évaluation de la médecine traditionnelle chinoise. Cette méthode permet d'étudier l'efficacité de la décoction Liujunzi dans la prévention du cancer colorectal.

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Ce travail a été soutenu par le Département provincial de la science et de la technologie du Jilin (YDZJ202201ZYTS181).

La procédure animale a été approuvée par le comité d’éthique de l’Université de médecine chinoise de Changchun (numéro d’enregistrement : 2021214). Des souris C57BL/6J spécifiques exemptes d’agents pathogènes (8 à 10 semaines, poids de 18 à 22 g), mâles et femelles, ont été logées dans des cages ventilées indépendamment à 22 °C et à 65 % d’humidité relative. Les souris ont commencé l’expérience après 7 jours d’alimentation adaptative, au cours desquels elles avaient libre accès à l’eau et à la nourriture.
1. Préparation du médicament
<ol><li>Préparation du LJZD REMARQUE : Le médicament chinois utilisé a été acheté à l’hôpital affilié de l’Université de médecine chinoise de Changchun et a été identifié comme étant de la médecine chinoise authentique (voir tableau 1).<ol><li>Mettez Dangshen (12 g), Baizhu (12 g), Gancao (6 g), Chenpi (12 g), Jiangbanxia (9 g) dans un pot en céramique spécialisé (voir Tableau des matériaux). Ajouter 1000 mL d’eau distillée et laisser tremper à température ambiante pendant 1 h (voir figure 1A).</li>
		<li>Poudre 12 g Réduire en poudre fine avec un moulin et faire tremper dans 300 mL d’eau distillée dans un autre récipient pendant 1 h à température ambiante.</li>
		<li>Mélangez la médecine chinoise ci-dessus dans le pot en céramique spécialisé. Faire bouillir le mélange et maintenir à feu moyen jusqu’à ce qu’il ne reste que 300 ml de décoction. Utilisez de la gaze médicale pour filtrer et conservez le filtrat à température ambiante.</li>
		<li>Ajouter 1000 mL d’eau distillée et répéter l’opération de décoction ci-dessus une fois de plus. Filtrez à nouveau avec de la gaze médicale. Mélanger le filtrat et le faire bouillir jusqu’à ce qu’il ne reste que 150 ml.</li>
		<li>Centrifuger le liquide concentré à 10 000 x g pendant 5 min et concentrer davantage le surnageant obtenu à 30 mL à feu moyen. Transférez le concentré final dans un plat et séchez-le à l’aide d’un four de séchage électrique jusqu’à ce qu’il ne reste que le soluté sous forme de poudre.</li>
		<li>Peser le solide ci-dessus et le dissoudre dans de l’eau distillée stérile pour obtenir une solution contenant 22,85 mg de médicament par 0,2 mL (114,16 mg/mL), soit la dose quotidienne des souris.</li>
	</ol></li>
	<li>Préparation de l’acide 5-amino-salicylique REMARQUE : L’acide 5-amino-salicylique (5-ASA ; voir tableau des matériaux) a un bon effet préventif sur l’UC-CRC, et il a été utilisé comme médicament positif dans cette étude23.<ol><li>Dissoudre 64 mg de poudre de 5-ASA dans 200 mL d’eau distillée stérile pour obtenir une solution de 5-ASA à 1,82 mg/mL. La dose quotidienne pour une seule souris était de 0,2 ml.</li>
	</ol></li>
	<li>Préparation de la solution d’injection d’AOM<ol><li>Ajouter 2,5 mL d’eau distillée stérile dans de la poudre d’OMA à 25 mg (voir le tableau des matériaux) et mélanger à l’aide d’un mélangeur vortex (voir le tableau des matériaux) pour obtenir une solution mère d’OMA à 10 mg/mL, conserver à -20 °C jusqu’à utilisation.</li>
		<li>Préparer la solution injectable d’OMA en diluant la solution mère d’OMA avec de l’eau distillée stérile à 10 :1 (1 mg/mL).</li>
	</ol></li>
</ol>2. Mise en place du modèle UC-CRC
REMARQUE : L’expérience a été divisée en 4 groupes : contrôle, modèle, LJZD et groupe 5-ASA, 10 souris dans chaque groupe. À l’exception du groupe témoin, les autres groupes ont été traités avec l’AOM et le DSS.
<ol><li>Injection intrapéritonéale de solution injectable d’OMA REMARQUE : Après une alimentation adaptative pendant 7 jours, les souris ont reçu une solution injectable d’OMA (1 mg/mL) par injection intrapéritonéale (voir figure 1B).<ol><li>Tenez la souris avec le ventre vers le haut et la tête légèrement vers le bas. Saisir la peau du dos pour resserrer la peau abdominale et percer la peau à environ 1 cm à droite de l’intersection de la racine des deux cuisses sur la ligne médiane de l’abdomen avec une seringue de 1 mL (voir le tableau des matières).</li>
		<li>Poussez l’aiguille de la seringue de 1 ml à une distance de 3 à 5 mm sous la peau, en la maintenant parallèle à la ligne médiane abdominale, et insérez l’aiguille de 0,3 à 0,5 mm dans la cavité abdominale à 45°.</li>
		<li>Après que la pointe ait traversé le muscle abdominal, l’opérateur détecte une perte soudaine de résistance. Ensuite, tirez la seringue vers l’extérieur et vers l’arrière pour observer si des infiltrations de liquide se produisent. Sinon, pousser lentement la solution injectable d’AOM dans les souris à 0,1 mL/10 g.</li>
	</ol></li>
	<li>Stimulation cyclique d’une solution de SSD à 2 % REMARQUE : Chaque souris induite par l’OMA a reçu 500 ml de solution de DSS aux semaines 3, 6 et 9, et les souris ont bu librement pendant cette période.<ol><li>Préparer une solution de SSD à 2 % en ajoutant 500 mL d’eau distillée stérile à 10 g de DSS (voir le tableau des matières). Mélanger avec un mélangeur vortex et conserver à 4 °C jusqu’à utilisation.</li>
		<li>Chaque souris induite par l’OMA boit 500 mL de solution DSS à 2 % librement pendant 7 jours les semaines 3, 6 et 9 après l’induction de l’OMA.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Traitement médicamenteux
REMARQUE : Les humains adultes ont besoin de 63 g de LJZD par jour. Selon la formule de conversion de la dose expérimentale de médicament chez la souris et chez l’humain, dose expérimentale équivalente pour les souris (mg/kg) = dose humaine (mg/kg)/poids corporel (60 kg) x 9,1, la dose quotidienne des souris était d’environ 9,6 g/kg.
<ol><li>Traiter le groupe LJZD et 5-ASA avec 0,1 mL/10 g de la solution préparée de LJZD et de 5-ASA par gavage gastrique à la semaine 7 et à la semaine 15, respectivement.<ol><li>Pour l’administration intragastrique chez la souris, effectuez la procédure suivante. Tenez la souris dans la main gauche et dans la main droite, tenez l’appareil de perfusion gastrique. Insérez l’aiguille de la seringue dans la bouche et faites-la glisser le long de la paroi arrière du pharynx des souris. Faites glisser le long du pharynx pendant que les souris avalent et continuez à avancer. Lorsqu’il y avait une sensation de résistance et que la seringue pouvait être enfoncée dans le pharynx, retirez l’aiguille et terminez l’injection.</li>
	</ol></li>
	<li>Traitez le groupe témoin et le groupe modèle avec la même quantité de solution saline (voir le tableau des matériaux).</li>
	<li>Traitez les souris de chaque groupe avec un médicament approprié une fois par jour à la même heure pendant la période d’administration.</li>
</ol>4. Évaluation du modèle UC-CRC et efficacité de la LJZD
<ol><li>Score de l’indice d’activité de la maladie REMARQUE : Selon le tableau 2, le score de l’indice d’activité de la maladie (IAD) a été évalué en combinant la perte de poids, la viscosité fécale et le saignement des selles des souris.<ol><li>Enregistrez quotidiennement le poids des souris depuis le début de l’alimentation adaptative jusqu’à la fin du traitement médicamenteux.</li>
		<li>Observez attentivement la consistance fécale de chaque souris expérimentale et notez les selles comme l’une des trois conditions suivantes : selles normales et molles et diarrhée aqueuse.</li>
		<li>Enregistrez les saignements fécaux des animaux de laboratoire comme l’une des trois conditions suivantes : pas de saignement, peu de saignements et du sang visible dans les selles.</li>
	</ol></li>
	<li>Détection du taux d’IL-6 dans le sérum<ol><li>Traiter les souris avec LJZD ou 5-ASA pendant 9 semaines. Fixez les souris en saisissant la peau du cou de la souris avec la main gauche et en appuyant doucement sur la table expérimentale pour prendre la position latérale du décubitus. Coupez les moustaches des souris avec des ciseaux. Coupez soigneusement les moustaches des souris avec des ciseaux (voir le tableau des matériaux) pour éviter la contamination du sang. REMARQUE : Les souris qui ne pouvaient pas se tortiller librement étaient considérées comme correctement fixées. Si cela ne se produit pas, les souris doivent être réparées.</li>
		<li>Anesthésier la souris par inhalation d’isoflurane à 2 %. Stérilisez la peau autour du globe oculaire avec de l’éthanol (voir le tableau des matériaux). Appuyez doucement sur la peau de l’œil sur le côté pour que le globe oculaire soit congestionné et saillant.</li>
		<li>Clampez le globe oculaire avec une pince à épiler et retirez les globes oculaires avec précision et rapidement. Laissez le sang s’égoutter dans le tube centrifuge (voir Tableau des matériaux). Dans le processus, appuyez sur le cœur de la souris pour accélérer la collecte de sang.</li>
		<li>Conservez le sang prélevé à température ambiante pendant 30 min et centrifugez-le à 3 500 x g pendant 10 min. Prélever le surnageant et détecter le niveau d’IL-6 selon les instructions du kit de détection du contenu en IL-6 (voir le tableau des matériaux).</li>
	</ol></li>
	<li>Séparation du tissu colorectal<ol><li>Euthanasier les souris après prélèvement sanguin en inhalant 5 % d’isoflurane surdosé et luxation cervicale (voir tableau des matières) conformément à l’éthique animale.</li>
		<li>Conservez les souris dans un environnement anatomique cryogénique. Immobilisez les souris en position couchée. Coupez les poils du bas-ventre avec des ciseaux et stérilisez-les à l’éthanol.</li>
		<li>Pincez le point d’intersection entre les deux racines de la cuisse et la ligne médiane abdominale avec une pince à paupières (voir tableau des matériaux). Coupez une incision transversale d’environ 1 à 1,5 cm avec des ciseaux.</li>
		<li>Coupez une incision longitudinale le long de la ligne médiane de l’abdomen à partir du milieu de l’incision transversale vers l’apophyse xiphoïde.</li>
		<li>Retirez les tissus péricolorectaux en direction de l’anus pour séparer le colorectum des tissus environnants. Attention à ne pas endommager le colorectum.</li>
		<li>Poussez la peau de l’abdomen sur les côtés pour exposer complètement le colorectum. Retirer le colorectum de la cavité abdominale à l’aide d’une pince à paupières et couper les segments de l’anus au caecum (exclure) ; La longueur totale est d’environ 10 cm. Conserver les tissus colorectaux obtenus dans une solution saline à 4 °C.</li>
	</ol></li>
	<li>Évaluation de la longueur et du poids du rectum<ol><li>Extraire la solution saline à 4 °C avec une aiguille de 5 mL (voir le tableau des matières) pour rincer l’intérieur du colorectum. Ensuite, placez le colorectum sur du papier absorbant pour absorber l’humidité du tissu.</li>
		<li>Pesez les tissus colorectaux puis placez-les sur du papier A4 pour mesurer leur longueur.</li>
	</ol></li>
	<li>Mesurer le nombre de tumeurs dans le colorectum<ol><li>Coupez le colorectum dans le sens de la longueur pour le déplier complètement et observez le nombre et la taille des tumeurs dans le colorectum.</li>
	</ol></li>
	<li>Analyse pathologique du colorectum<ol><li>Fixer le colorectum dans du paraformaldéhyde à 4% pendant 24 h. Incorporer le tissu rectal fixé dans de la paraffine fondue et sectionner en continu sur une épaisseur de 5 μm par un microtome de congélation des tissus.</li>
		<li>Selon la procédure de Hou et al.24, détacher les sections dans du xylène, puis le déshydrater avec des concentrations en série d’éthanol. Après avoir coloré avec une solution d’hématoxyline pendant 5 min, rincez les sections à l’eau pure. Après cela, colorez avec une solution d’éosine à 0,5 % pendant 1 min (voir tableau des matériaux).</li>
		<li>Effectuez à nouveau une déshydratation en gradient et un traitement transparent au xylène. Scellez les coupes et observez-les au microscope optique (voir le tableau des matériaux) et photographiez, comme décrit par Xie et al.25.</li>
	</ol></li>
	<li>Analyse immunohistochimique du colorectum<ol><li>Déparaffinez et déshydratez les sections selon la méthode ci-dessus. Réparer l’antigène dans les sections avec une technique de réparation thermique à haute pression, comme décrit par Gok et al.26.</li>
		<li>Faire tremper les sections dans des bloqueurs de peroxydase endogènes à température ambiante pendant 15 min. Scellez les sections avec du sérum de chèvre (voir le tableau des matériaux).</li>
		<li>Ajouter l’anticorps primaire ZO-1 (1 :1000), l’occludine (1 :1000) et le KI67 (1 :500 ; voir le tableau des matériaux) dans les sections et incuber toute la nuit à 4 °C. Rincer les sections avec un tampon PBS (voir le tableau des matières), y ajouter un anticorps secondaire à usage général (1 :5000 ; voir le tableau des matériaux) et incuber à 37 °C pendant 30 min.</li>
		<li>Ajoutez la solution DAB (voir Tableau des matériaux) aux sections pour le développement des couleurs. Contre-colorez les sections avec une solution d’hématoxyline.</li>
		<li>Déshydratez, transparentisez et scellez à nouveau les sections. Observer l’expression des protéines au microscope optique.</li>
	</ol></li>
</ol>

Décoction de Liujunzi : un traitement efficace pour la prévention de l’UC-CRC

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le CCR est l’un des cancers les plus courants dans le monde, avec environ 1 148 000 nouveaux cas et plus de 576 000 décès chaque année. Le CCR peut être divisé en trois types selon différentes causes, y compris héréditaire, sporadique et UC-CRC31. L’incidence du CCR chez les patients atteints de maladies inflammatoires de l’intestin telles que la colite ulcéreuse est significativement plus élevée que celle de la population générale. La colite ulcéreuse stimule le développement du CCR par la voie i...

Le cancer colorectal (CCR) est une tumeur maligne gastro-intestinale courante, la troisième tumeur maligne la plus fréquente et la deuxième cause de décès dans le monde, représentant 10 % de l’incidence mondiale du cancer et 9,4 % du total des décès liés au cancer 1,2. Des facteurs génétiques, une inflammation chronique, un régime riche en graisses, le diabète et une flore intestinale anormale sont des facteurs de risque de CCR 3,4. Parmi eux, les maladies inflammatoires de l’intestin, en particulier la coloproctite ulcéreuse (CU), sont un facteur de risque évident de CCR 5,6. Le CCR associé à la COLITE ULCÉREUSE (UC-CRC) est un processus de transition de l’inflammation, de l’hyperplasie atypique et du cancer basé sur l’inflammation chronique du colorectum, qui est différent du modèle typique de développement de l’adénome-adénocarcinome du CCR 7,8. Par rapport à la population générale, le risque de CCR est environ 10 à 40 fois plus élevé chez les patients atteints de maladies inflammatoires de l’intestin9.
Actuellement, la chirurgie est toujours le traitement standard du CCR et, selon l’emplacement et le stade de la tumeur, une radiothérapie, un traitement médicamenteux systémique ou une combinaison des deux sont possibles10. Bien que ces modalités de traitement traditionnelles aient fait de grands progrès, en raison de l’hétérogénéité élevée et du taux de récidive du CCR, le pronostic est mauvais et l’effet du traitement n’est pas idéal11,12. Par conséquent, la détection précoce, le diagnostic précoce et le traitement complet sont essentiels pour améliorer le taux de survie des patients atteints de CCR, et il est particulièrement important de prêter attention à la transformation de la colite ulcéreuse en CCR. Au fil des ans, la médecine traditionnelle chinoise (MTC) a attiré beaucoup d’attention dans le traitement de l’UC-CRC ou de la gastrite chronique en raison de ses effets secondaires limités et de son efficacité significative. Sur la base d’un traitement dialectique, les célèbres praticiens de la médecine chinoise de différentes générations ont créé un grand nombre de prescriptions classiques, telles que la décoction Huangqi Jianzhong13, la décoction Sijunzi14 et la pilule Sishen15.
La décoction de Liujunzi (LJZD) est issue des travaux de Yi Xue Zheng Zhuan compilés sous la dynastie Ming et est une prescription classique de la MTC16. Comme le montre le tableau 1, le LJZD se compose de six herbes traditionnelles, dont Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. (Dangshen), Poria cocos (Schw.), Loup (Fuling), Atractylodes macrocephala Koidz. (Baizhu), Glycyrrhiza uralensis Fisch. (Gancao), Citrus reticulata Blanco (Chenpi) et Pinellia ternata (Thunb.) Breit (Banxia), qui a pour effet de reconstituer le qi et de renforcer la rate, d’assécher l’humidité et de résoudre les mucosités. Dans la pratique clinique moderne, il est souvent utilisé pour traiter la gastrite chronique, les ulcères gastriques et les ulcères duodénaux. La recherche pharmacologique moderne a montré que la LJZD et la LJZD modifiée ont une valeur d’application élevée dans le traitement adjuvant de la colite ulcéreuse et du cancer du tube digestif 17,18,19.
À l’heure actuelle, il existe de nombreuses façons de construire des modèles murins UC-CRC, mais le modèle murin induit par l’azoxyméthane (AOM)/sulfate de dextran sodique (DSS) est le modèle UC-CRC le plus largement utilisé ; les symptômes cliniques, les observations morphologiques et pathologiques ont prouvé que le modèle est très similaire à l’UC-CRC humaine20,21. Le principe de base est d’induire d’abord la cancérogenèse avec l’OMA cancérigène chimique, puis d’exposer continuellement les souris à l’environnement de stimulation inflammatoire du DSS pour simuler les dommages continus et la réparation de l’épithélium de la muqueuse intestinale, construisant ainsi un modèle murin UC-CRC22. L’objectif de cette étude est d’établir un modèle murin de CCR-UC par injection intrapéritonéale d’OMA et stimulation cyclique du DSS à court terme et d’évaluer l’effet du médicament et le mécanisme moléculaire de la LJZD sur le CCR-UC afin de fournir une base scientifique pour le traitement du CCR-UC.

<table><tbody><tr><td>Azoxyméthane</td><td>Sigma</td><td>A5486</td><td></td></tr><tr><td>5-amino salicylique</td><td>Acide Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>3819413</td><td></td></tr><tr><td>souris C57BL / 6J</td><td>Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd</td><td>NO 210726210100853716</td><td></td></tr><tr><td>Housse</td><td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td><td>10212432C</td><td></td></tr><tr><td>DAB couleur kit de développement</td><td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td><td>2005289</td><td></td></tr><tr><td>Machine d’assèchement&nbsp ;</td><td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td><td>JJ-12J</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de dextran sodique</td><td>Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd</td><td>MB5535</td><td></td></tr><tr><td>Machine d’enrobage</td><td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td><td>JB-P5</td><td></td></tr><tr><td>Colorant d’hématoxyline-éosine</td><td>Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd</td><td>B1000</td><td></td></tr><tr><td>IL-6</td><td>Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd</td><td>MM-0163M2</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD Life Science Co., Ltd</td><td>R510-22-10</td><td></td></tr><tr><td>KI67 anticorps primaire</td><td>Google Biotechnology Inc</td><td>GB121141</td><td></td></tr><tr><td>Neutral gum</td><td>Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd</td><td>10004160</td><td></td></tr><tr><td>Object slide</td><td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td><td>10212432A</td><td></td></tr><tr><td>Occludin Anticorps primaire</td><td>Affnity</td><td>DF7504</td><td></td></tr><tr><td>Microscope optique orthostatique</td><td>Nikon</td><td>Nikon Eclipse CI</td><td></td></tr><tr><td>Microtome pathologique</td><td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td><td>RM2016</td><td></td></tr><tr><td>ZO-1 anticorps primaire</td><td>Abcam</td><td>ab221547</td><td></td></tr></tbody></table>

Établissement d’un modèle de cancer de la coloproctite chez la souris et évaluation de l’effet thérapeutique de la médecine chinoise

Establishment of Coloproctitis Cancer Model in Mice and Evaluation of Therapeutic Effect of Chinese Medicine

Le cancer colorectal (CCR) est une tumeur maligne courante du système digestif et est devenu la troisième tumeur maligne la plus fréquente dans le monde et la deuxième cause de décès par malignité. La coloproctite ulcéreuse (CU) est une lésion précancéreuse, et le CCR associé à la COLITE ULCÉREUSE (CCR-UC) est le sous-type le plus courant de CCR. Par conséquent, un modèle raisonnable de CCR-UC est la pierre angulaire et la garantie du développement de nouveaux médicaments. La médecine traditionnelle chinoise (MTC) a été largement utilisée dans le traitement de l’UC-CRC en raison de sa bonne efficacité. En tant que prescription tonique classique de la MTC, la décoction de Liujunzi (LJZD) a été largement utilisée dans le traitement de l’UC-CRC. Dans cette étude, un modèle UC-CRC a été établi en combinant l’azométhane et le sulfate de dextran sodique, et le LJZD a été administré. Les données ont confirmé que le LJZD peut inhiber efficacement la transition du cancer dans l’UC-CRC en utilisant le poids corporel de la souris, la longueur colorectale, les facteurs pathologiques et inflammatoires, la fonction de barrière colorectale et les marqueurs du cancer. Ce protocole fournit un système d’évaluation de l’efficacité de la MTC dans la prévention et le traitement de l’UC-CRC.

La décoction de LJZD a été préparée selon le rapport de composition des médicaments du tableau 1 et la méthode de décoction de la MTC de la figure 1A. Selon le point temporel indiqué à la figure 1B, des souris ont reçu une injection intrapéritonéale de 1 mg/mL d’OMA le 7e jour, et les souris ont eu libre accès à de l’eau potable contenant 2 % de DSS au cours des 3e, 6e et 9esemaines. Le modèle murin UC...

Ce protocole fournit un modèle murin de cancer colorectal associé à la coloproctite ulcéreuse induit par l’azométhane combiné à du sulfate de dextran sodique. Le modèle a été utilisé pour évaluer l’efficacité des composés de la médecine traditionnelle chinoise dans la prévention et le traitement du cancer colorectal.

Colorectal cancer (CRC) is a common malignancy of the digestive system and has become the third most common malignancy worldwide and the second leading ...

Cette étude portait sur la prévention et le traitement du cancer de la coloproctite avec la médecine traditionnelle chinoise. Nous visons à établir un modèle murin pour le cancer de la coloproctite et à évaluer les indicateurs de la médecine traditionnelle chinoise. Nous avons confirmé que la décoction de Liujunzi de médecine chinoise est un traitement efficace pour la prévention du cancer de la coloproctite.À l’avenir, nous travaillerons à identifier des biomarqueurs plus sensibles pour le cancer du côlon et du rectum et à dépister la décoction de Liujunzi pour des cibles thérapeutiques.

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Établissement d’un modèle de cancer de la coloproctite chez la souris et évaluation de l’effet thérapeutique de la médecine chinoise (Vidéo) | JoVE Journal

Établissement d’un modèle de cancer de la coloproctite chez la souris et évaluation de l’effet thérapeutique de la médecine chinoise

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