Name: Analyse quantitative de la stabilisation de la membrane endoplasmique du réticulum (MAM) associée aux mitochondries dans un modèle neuronal de la maladie d’Alzheimer (MA) (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Découvrez une méthode d'imagerie cellulaire en temps réel pour quantifier la stabilisation des membranes MAM dans les neurones et étudier leur rôle dans la maladie d'Alzheimer.

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<meta charset="utf8"></head><body>Stabilisation des MAM dans un modèle neuronal 3D de la maladie d’Alzheimer

<ol><li>Giacomello, M., Pellegrini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+coming+of+age+of+the+mitochondria-ER+contact%3A+a+matter+of+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">The coming of age of the mitochondria-ER contact: a matter of thickness.</a> Cell Death Differ. 23 (9), 1417-1427 (2016).</li>
<li>Degechisa, S. T., Dabi, Y. T., Gizaw, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mitochondrial+associated+endoplasmic+reticulum+membranes%3A+A+platform+for+the+pathogenesis+of+inflammation-mediated+metabolic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immun+Inflamm+Dis%22%5BJournal%5D)">The mitochondrial associated endoplasmic reticulum membranes: A platform for the pathogenesis of inflammation-mediated metabolic diseases.</a> Immun Inflamm Dis. 10 (7), e647(2022).</li>
<li>Schon, E. A., Area-Gomez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria-associated+ER+membranes+in+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mitochondria-associated ER membranes in Alzheimer disease.</a> Mol Cell Neurosci. 55, 26-36 (2013).</li>
<li>Erpapazoglou, Z., Mouton-Liger, F., Corti, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+dysfunctional+endoplasmic+reticulum-mitochondria+coupling+to+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Int%22%5BJournal%5D)">From dysfunctional endoplasmic reticulum-mitochondria coupling to neurodegeneration.</a> Neurochem Int. 109, 171-183 (2017).</li>
<li>Sala-Vila, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+hepatic+mitochondria-associated+membranes%2C+lipid+metabolism+and+caveolin-1+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Interplay between hepatic mitochondria-associated membranes, lipid metabolism and caveolin-1 in mice.</a> Sci Rep. 6, 27351(2016).</li>
<li>Fujimoto, M., Hayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+role+of+mitochondria-associated+endoplasmic+reticulum+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">New insights into the role of mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane.</a> Int Rev Cell Mol Biol. 292, 73-117 (2011).</li>
<li>Hung, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+mapping+of+cytosol-facing+outer+mitochondrial+and+ER+membranes+in+living+human+cells+by+proximity+biotinylation%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Proteomic mapping of cytosol-facing outer mitochondrial and ER membranes in living human cells by proximity biotinylation.</a> eLife. 6, e24463(2017).</li>
<li>Area-Gomez, E., Schon, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+pathogenesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+The+MAM+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">On the pathogenesis of Alzheimer's disease: The MAM hypothesis.</a> FASEB J. 31 (3), 864-867 (2017).</li>
<li>Rizzuto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Close+contacts+with+the+endoplasmic+reticulum+as+determinants+of+mitochondrial+Ca2%2B+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Close contacts with the endoplasmic reticulum as determinants of mitochondrial Ca2+ responses.</a> Science. 280 (5370), 1763-1766 (1998).</li>
<li>Sukhorukov, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+interactions+between+mitochondria+and+the+endoplasmic+reticulum%3A+A+new+look+at+how+important+cell+functions+are+supported%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of interactions between mitochondria and the endoplasmic reticulum: A new look at how important cell functions are supported.</a> Mol Biol. 56 (1), 59-71 (2022).</li>
<li>Zhang, P., Konja, D., Zhang, Y., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Communications+between+Mitochondria+and+endoplasmic+reticulum+in+the+regulation+of+metabolic+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Communications between Mitochondria and endoplasmic reticulum in the regulation of metabolic homeostasis.</a> Cells. 10 (9), 2195(2021).</li>
<li>Ziegler, D. V., Martin, N., Bernard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence+links+mitochondria-ER+contacts+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence links mitochondria-ER contacts and aging.</a> Commun Biol. 4 (1), 1323(2021).</li>
<li>Csordas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+features+and+significance+of+the+physical+linkage+between+ER+and+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Structural and functional features and significance of the physical linkage between ER and mitochondria.</a> J Cell Biol. 174 (7), 915-921 (2006).</li>
<li>Cieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SPLICS%3A+a+split+green+fluorescent+protein-based+contact+site+sensor+for+narrow+and+wide+heterotypic+organelle+juxtaposition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">SPLICS: a split green fluorescent protein-based contact site sensor for narrow and wide heterotypic organelle juxtaposition.</a> Cell Death Differ. 25 (6), 1131-1145 (2018).</li>
<li>Carpio, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BOK+controls+apoptosis+by+Ca%282%2B%29+transfer+through+ER-mitochondrial+contact+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">BOK controls apoptosis by Ca(2+) transfer through ER-mitochondrial contact sites.</a> Cell Rep. 34 (10), 108827(2021).</li>
<li>Prudent, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAPL+SUMOylation+of+Drp1+stabilizes+an+ER%2Fmitochondrial+platform+required+for+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">MAPL SUMOylation of Drp1 stabilizes an ER/mitochondrial platform required for cell death.</a> Mol Cell. 59 (6), 941-955 (2015).</li>
<li>Zellmer, J. C., Tarantino, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilization+of+mitochondria-associated+endoplasmic+reticulum+membranes+regulates+Abeta+generation+in+a+three-dimensional+neural+model+of+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Alzheimer%E2%80%99s+Dement%22%5BJournal%5D)">Stabilization of mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes regulates Abeta generation in a three-dimensional neural model of Alzheimer’s disease.</a> Alzheimer’s Dement. , 1-20 (2024).</li>
<li>Magalhaes Rebelo, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modulation+of+mitochondria-endoplasmic+reticulum+contact+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Chemical modulation of mitochondria-endoplasmic reticulum contact sites.</a> Cells. 9 (7), 1637(2020).</li>
<li>Berger, S. I., Iyengar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+systems+pharmacology+in+understanding+drug+adverse+events%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Syst+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Role of systems pharmacology in understanding drug adverse events.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 3 (2), 129-135 (2011).</li>
<li>Friedman, J. R., Webster, B. M., Mastronarde, D. N., Verhey, K. J., Voeltz, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ER+sliding+dynamics+and+ER-mitochondrial+contacts+occur+on+acetylated+microtubules%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">ER sliding dynamics and ER-mitochondrial contacts occur on acetylated microtubules.</a> J Cell Biol. 190 (3), 363-375 (2010).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contacts+between+the+endoplasmic+reticulum+and+other+membranes+in+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Contacts between the endoplasmic reticulum and other membranes in neurons.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (24), E4859-E4867 (2017).</li>
<li>Cagin, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+retrograde+signaling+regulates+neuronal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial retrograde signaling regulates neuronal function.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (44), E6000-E6009 (2015).</li>
<li>Choi, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+human+neural+cell+culture+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional human neural cell culture model of Alzheimer's disease.</a> Nature. 515 (7526), 274-278 (2014).</li>
<li>Kim, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+3D+human+neural+cell+culture+system+for+modeling+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A 3D human neural cell culture system for modeling Alzheimer's disease.</a> Nat Protoc. 10 (7), 985-1006 (2015).</li>
<li>Kwak, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid-beta42%2F40+ratio+drives+tau+pathology+in+3D+human+neural+cell+culture+models+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Amyloid-beta42/40 ratio drives tau pathology in 3D human neural cell culture models of Alzheimer's disease.</a> Nat Commun. 11 (1), 1377(2020).</li>
<li>Csordas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+interorganelle+contacts+and+local+calcium+dynamics+at+the+ER-mitochondrial+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Imaging interorganelle contacts and local calcium dynamics at the ER-mitochondrial interface.</a> Mol Cell. 39 (1), 121-132 (2010).</li>
<li>Bhattacharyya, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+generation+of+amyloid-beta+from+palmitoylated+APP+in+mitochondria-associated+endoplasmic+reticulum+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Axonal generation of amyloid-beta from palmitoylated APP in mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes.</a> Cell Rep. 35 (7), 109134(2021).</li>
<li>Tebo, A. G., Gautier, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+split+fluorescent+reporter+with+rapid+and+reversible+complementation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A split fluorescent reporter with rapid and reversible complementation.</a> Nat Commun. 10 (1), 2822(2019).</li>
</ol>

L’inhibition du récepteur sigma-1 (S1R) a régulé à la baisse la stabilisation de la MAM dans les processus neuronaux et a considérablement réduit (~90 %) la génération d’Aβ à partir des axones mais pas du soma d’un système de culture tridimensionnel (3D) de cellules progénitrices neurales humaines (ReN) exprimant des mutations familiales de la MA [FAD] dans le gène de la protéine précurseur de l’amyloïde [APP] (ReN GA)23,24,25,27<sup class="xr...

<table><tbody><tr><td>Plaque inférieure en verre à 6 puits</td><td>Cellvis</td><td>P06-1.5H-N</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Supplement (50X), sans sérum</td><td>Gibco/Thermo Fisher Scientific</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>R& Système D&nbsp ;</td><td>233-FB</td><td></td></tr><tr><td>BSA Fisher</td><td>Scientific</td><td>501781532</td><td></td></tr><tr><td>Lames de chambre de comptage de cellules Countess</td><td>Invitrogen</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 avec L-glutamine&nbsp ;</td><td>Gibco/Thermo Fisher Scientific</td><td>11320-033</td><td></td></tr><tr><td>EDTA&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Life Technologies</td><td>41116134</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>92090408</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 6 Well Plates&nbsp ;</td><td>VWR International</td><td>41122107</td><td></td></tr><tr><td>GAPDH Anticorps polyclonaux</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PA1-988</td><td></td></tr><tr><td>Gélatine&nbsp ;</td><td>VWR International</td><td>9000-70-8</td><td></td></tr><tr><td>Graphpad Prism N/A</td><td>Prism 9, version 9.5.0</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Héparine</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp ;</td><td></td><td></td>H0200000</tr><tr><td>logiciel ImageJ</td><td>ImageJ 1.53a</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel Membrane Matrigel&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Corning</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>mCherry Polyclonal Antibody</td><td>Invitrogen</td><td>PA5-34974</td><td></td></tr><tr><td>MS Excel&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Microsoft Excel, version 2302</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kit de dosage par électrochimiluminescence multi-réseaux</td><td>Meso Scale Diagnostics (MSD)</td><td>K15200E-2</td><td>V-PLEX A&beta ; Panneau peptidique 1 (6E10) kit</td></tr><tr><td>NaCl&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>7647145</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&ndash ; 12 % Bis-Tris gel&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Invitrogen</td><td>NP0321BOX</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine/Amphotéricine B&nbsp ;</td><td>Lonza</td><td>&nbsp ; 17-745E</td><td></td></tr><tr><td>Photoshop</td><td>Adobe Photoshop CC 20.0.10&nbsp ;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Rat Neuron Nucleofector Kit</td><td>Lonza</td><td>VPG-1003</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase&nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCL, pH 7,6 &nbsp ;</td><td>Boston BioProducts</td><td>42000000</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td></td><td>Fisher Scientific 501657287</td><td></td></tr></tbody></table>

analyse quantitative de la stabilisation de la membrane endoplasmique du réticulum (mam) associée aux mitochondries dans un modèle neuronal de la maladie d’alzheimer (ma) 

Quantitative Analysis of Mitochondria-Associated Endoplasmic Reticulum Membrane (MAM) Stabilization in a Neural Model of Alzheimer's Disease (AD)

Des analyses d’imagerie et de kymographie de cellules vivantes ont été réalisées pour mesurer la motilité des mitochondries libres marquées avec Mito-RFP ou des mitochondries liées à RE de largeurs de contact serrées (6 nm ± 1 nm) ou lâches (24 nm ± 3 nm) stabilisées par MAM 1X ou MAM 9X, respectivement, dans le processus neuronal le plus long de chaque neurone ReN GA (AD) ou ReN (naïf) d’au moins 500 nm de long, en le considérant comme un axone (Figure 1 et Figure 2</s...

Analyse quantitative de la stabilisation de la membrane endoplasmique du réticulum (MAM) associée aux mitochondries dans un modèle neuronal de la maladie d’Alzheimer (MA) 

A method to quantitate the stabilization of Mitochondria-Associated endoplasmic reticulum Membranes (MAMs) in a 3-dimensional (3D) neural model of ...

quantitative-analysis-mitochondria-associated-endoplasmic-reticulum

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