Immunohistochimie par fluorescence cyclique multiplex
26 janvier 2024
L’immunohistochimie cyclique multiplex permet la détection in situ de plusieurs marqueurs simultanément en utilisant l’incubation répétée d’antigène-anticorps, le balayage d’images et l’alignement et l’intégration d’images. Nous présentons ici le protocole opératoire pour identifier les substrats des cellules immunitaires avec cette technologie dans des échantillons de cancer du poumon et de métastases cérébrales appariées.
Le défi de l’immunohistochimie est de choisir les espèces d’anticorps monoclonaux primaires et secondaires pour éviter la réactivité croisée et obtenir une meilleure spécificité et répétabilité. La décision en matière de sexe est nécessaire pour optimiser le taux de dilution des anticorps. Pendant ce temps, un autre défi consiste à aligner la localisation et les sous-structures.
L’utilisation de ce protocole répond à l’évolution technique de la distribution de trois sous-populations lymphocytaires, telles que CT 3, CT 3 positif, 8 positif et 20 positif en fonction du nombre de cellules et de l’expression des protéines dans les tissus conservés, le niveau d’infiltration peut également être observé. Dans notre protocole, les anticorps de paramètre et les anticorps secondaires Fluor dérivent de différentes espèces au mélange iso, ce qui nous rend efficace. Cette mesure montre également une mesure spécifique entre l’anticorps et l’antigène.
Aperçu
Cet article présente un protocole d'immunohistochimie cyclique multiplexe, permettant la détection simultanée de plusieurs marqueurs dans des échantillons de cancer du poumon et de métastases cérébrales. La méthode répond aux défis liés à la spécificité des anticorps et à la localisation des sous-populations de cellules immunitaires.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Immunohistochimie
- Oncologie
- Neurosciences
Contexte
- L'immunohistochimie exige une sélection minutieuse des anticorps afin d'éviter les réactions croisées.
- La normalisation de la dilution des anticorps est essentielle pour obtenir des résultats optimaux.
- L'alignement des structures cellulaires est nécessaire pour une analyse précise.
- Ce protocole se concentre sur les sous-populations lymphocytaires dans les tissus tumoraux.
Objectif de l'étude
- Proposer un protocole détaillé pour l'immunohistochimie cyclique multiplex.
- Améliorer la spécificité de la détection des cellules immunitaires dans les échantillons tumoraux.
- Faciliter l'étude de l'infiltration lymphocytaire dans le cancer du poumon et les métastases cérébrales.
Méthodes utilisées
- Incubation répétée antigène-anticorps.
- Numérisation et alignement des images.
- Détection des lymphocytes positifs pour CD3, CD8 et CD20.
- Analyse de l'expression protéique dans les tissus conservés.
Résultats principaux
- Identification réussie des substrats cellulaires immunitaires dans le cancer du poumon.
- Mise en évidence des niveaux d'infiltration lymphocytaire.
- Visualisation efficace de plusieurs marqueurs immunitaires.
- La standardisation améliore la reproductibilité et la spécificité.
Conclusions
- Le protocole améliore la compréhension des réponses immunitaires dans le cancer.
- L'immunohistochimie cyclique multiplexe est un outil précieux pour les chercheurs.
- Des études supplémentaires peuvent s'appuyer sur cette méthodologie pour la recherche sur le cancer.
Questions fréquemment posées
Pertinence professionnelle pour l'industrie
L'immunohistochimie fluorescente cyclique multiplexée permet un profilage spatial riche des sous-ensembles de cellules immunitaires et des cibles protéiques au sein du microenvironnement tumoral, soutenant ainsi la recherche en oncologie translationnelle et en immunothérapie. Cette approche augmente la confiance prédictive dans la validation des cibles et la réduction des risques mécanistiques en quantifiant l'infiltration lymphocytaire et les interactions intercellulaires dans des tissus cliniquement pertinents. Sa reproductibilité et sa capacité de multiplexage en font une compétence essentielle pour le tri des portefeuilles et la prise de décision guidée par des biomarqueurs dans les phases précoces de découverte et des voies translationnelles.
Applications stratégiques en recherche et développement en biopharmaceutique
Découverte précoce et validation de cibles
- Permet l'interrogation avec résolution spatiale des sous-ensembles de cellules immunitaires et des protéines cibles dans les tissus tumoraux.
- Facilite la réduction des risques mécanistiques en clarifiant les interactions entre cellules immunitaires et tumeur ainsi que les profils d'infiltration des lymphocytes.
- Renforce la confiance prédictive dans le choix des cibles pour les programmes d'immuno-oncologie.
Développement de tests et criblage
- Prépare des systèmes de tissus enrobés en paraffine formolée (FFPE) validés pour l'analyse multiplexe de marqueurs en aval.
- Standardise le choix et la dilution des anticorps afin de garantir la reproductibilité et des résultats quantitatifs.
- Permet des protocoles robustes et évolutifs pour le criblage des marqueurs immunitaires et les études comparatives.
Recherche translationnelle et préclinique
- Aligne le profilage immunitaire avec des modèles pertinents pour la maladie, tels que les tissus de cancer du poumon et de métastases cérébrales.
- Facilite le développement de biomarqueurs translationnels en quantifiant in situ les sous-ensembles de lymphocytes.
- Assure une continuité allant de la découverte à la validation préclinique des cibles immunitaires.
Intégration des pipelines et des flux de travail
Ce protocole d'immunohistochimie multiplexe relie la découverte précoce, la validation des cibles et la recherche translationnelle en permettant un profilage immunitaire quantitatif et résolu spatialement sur des tissus FFPE.
- Biologie de la découverte : Soutient la vérification d'hypothèses sur la distribution des cellules immunitaires et la reprogrammation du microenvironnement tumoral.
- Depistage : Permet une détection reproductible et quantitative des marqueurs pour l'aptitude des tests et l'analyse comparative.
- Analytique : Fournit des décomptes cellulaires et des données d'expression protéique afin d'informer les comparaisons entre différentes conditions.
- Recherche translationnelle : Corréle la quantification des marqueurs immunitaires avec des modèles de maladie pour assurer la continuité des biomarqueurs.
- Réutilisation en entreprise : Offre une plateforme standardisée et multiplexée, adaptable à divers types de tissus et questions de recherche.
Impact opérationnel et organisationnel
- Valeur scientifique : Accroît la confiance prédictive et réduit l'ambiguïté mécanistique dans la validation des cibles immunitaires.
- Valeur opérationnelle : Améliore la reproductibilité, la standardisation et l'évolutivité des flux de travail d'analyse immunologique.
- Valeur stratégique : Permet de mieux décider des poursuites ou non de projets et d'optimiser l'efficacité du capital en rendant possible un triage robuste fondé sur des biomarqueurs.
- Impact sur le portefeuille : Facilite la priorisation et la progression, ajustées au risque, des actifs en immuno-oncologie.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Nécessite une expertise en immunohistochimie, en validation d'anticorps et en imagerie de fluorescence.
- Exige un accès à des anticorps validés, à la préparation de tissus en inclusion paraffine (FFPE) et à une infrastructure d'imagerie multispectrale.
- Implique une standardisation inter-équipes du choix des anticorps, de leur dilution et des protocoles d'imagerie.
- Une adaptation peut être nécessaire selon les types de tissus ou les panels de marqueurs immunitaires.
- L'optimisation du rapport signal/bruit et l'évitement des réactions croisées sont essentiels pour obtenir des résultats fiables.
