Name: Collecte simultanée de cerveau et de sérum de souris fœtales pour évaluer les effets de l’alimentation maternelle sur la nutrition et le développement neurologique dans la neurofibromatose de type 1 (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Apprenez la collecte simultanée de cerveau et de sérum chez des embryons de souris pour étudier l'impact du régime maternel sur le neurodéveloppement fœtal dans la neurofibromatose de type 1. Cette méthode réduit l'utilisation animale.

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<meta charset="utf8"></head><body>Prélèvement simultané du cerveau et du sérum du fœtus murin

<ol><li>Listernick, R., Darling, C., Greenwald, M., Strauss, L., Charrow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+pathway+tumors+in+children%3A+the+effect+of+neurofibromatosis+type+1+on+clinical+manifestations+and+natural+history%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Optic pathway tumors in children: the effect of neurofibromatosis type 1 on clinical manifestations and natural history.</a> J Pediatr. 127 (5), 718-722 (1995).</li>
<li>Fisher, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+molecular+and+clinical+analysis+of+low-grade+gliomas+in+children+with+neurofibromatosis+type+1+%28NF1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Integrated molecular and clinical analysis of low-grade gliomas in children with neurofibromatosis type 1 (NF1).</a> Acta Neuropathol. 141 (4), 605-617 (2021).</li>
<li>Cimino, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+analysis+of+high-grade+astrocytoma+with+piloid+features+identifies+an+epigenetically+and+clinically+distinct+subtype+associated+with+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Expanded analysis of high-grade astrocytoma with piloid features identifies an epigenetically and clinically distinct subtype associated with neurofibromatosis type 1.</a> Acta Neuropathol. 145 (1), 71-82 (2023).</li>
<li>Lucas, C. -H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplatform+molecular+analyses+refine+classification+of+gliomas+arising+in+patients+with+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Multiplatform molecular analyses refine classification of gliomas arising in patients with neurofibromatosis type 1.</a> Acta Neuropathol. 144 (4), 747-765 (2022).</li>
<li>Fisher, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+neurofibromatosis+type+1-associated+plexiform+neurofibromas%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncol%22%5BJournal%5D)">Management of neurofibromatosis type 1-associated plexiform neurofibromas.</a> Neuro-Oncol. 24 (11), 1827-1844 (2022).</li>
<li>Packer, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plexiform+neurofibromas+in+NF1%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Plexiform neurofibromas in NF1.</a> Neurology. 58 (10), 1461-1470 (2002).</li>
<li>Evans, D. G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+peripheral+nerve+sheath+tumours+in+neurofibromatosis+1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Genet%22%5BJournal%5D)">Malignant peripheral nerve sheath tumours in neurofibromatosis 1.</a> J Med Genet. 39 (5), 311(2002).</li>
<li>Prudner, B. C., Ball, T., Rathore, R., Hirbe, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%3A+Current+practice+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of malignant peripheral nerve sheath tumors: Current practice and future perspectives.</a> Neurooncol Adv. 2, Suppl 1 i40-i49 (2020).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+basis+for+neurofibroma-associated+skeletal+manifestations+in+NF1%5BTitle%5D)+AND+%22Genet+Med%22%5BJournal%5D)">A molecular basis for neurofibroma-associated skeletal manifestations in NF1.</a> Genet Med. 22 (11), 1786-1793 (2020).</li>
<li>Ozarslan, B., Russo, T., Argenziano, G., Santoro, C., Piccolo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutaneous+findings+in+neurofibromatosis+Type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Cutaneous findings in neurofibromatosis Type 1.</a> Cancers. 13 (3), 463(2021).</li>
<li>Hyman, S. L., Shores, A., North, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature+and+frequency+of+cognitive+deficits+in+children+with+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">The nature and frequency of cognitive deficits in children with neurofibromatosis type 1.</a> Neurology. 65 (7), 1037-1044 (2005).</li>
<li>Morris, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disease+burden+and+symptom+structure+of+autism+in+neurofibromatosis+type+1%3A+a+study+of+the+International+NF1-ASD+Consortium+Team+%28INFACT%29%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Disease burden and symptom structure of autism in neurofibromatosis type 1: a study of the International NF1-ASD Consortium Team (INFACT).</a> JAMA Psychiatry. 73 (12), 1276-1284 (2016).</li>
<li>Geoffray, M. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+cognitive%2C+behavioural+and+academic+difficulties+in+NF1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Psychiatr+Res%22%5BJournal%5D)">Predictors of cognitive, behavioural and academic difficulties in NF1.</a> J Psychiatr Res. 140, 545-550 (2021).</li>
<li>Monroe, C. L., Dahiya, S., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+clinical+heterogeneity+in+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Pathol%22%5BJournal%5D)">Dissecting clinical heterogeneity in neurofibromatosis type 1.</a> Ann Rev Pathol. 12 (1), 53-74 (2017).</li>
<li>Kehrer-Sawatzki, H., Mautner, V. -F., Cooper, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+genotype-phenotype+relationships+in+patients+with+large+NF1+deletions%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Emerging genotype-phenotype relationships in patients with large NF1 deletions.</a> Hum Genet. 136 (4), 349-376 (2017).</li>
<li>Hou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+cognitive+development+in+children+with+neurofibromatosis+type+1+and+plexiform+neurofibromas%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Med+Child+Neurol%22%5BJournal%5D)">Predictors of cognitive development in children with neurofibromatosis type 1 and plexiform neurofibromas.</a> Dev Med Child Neurol. 62 (8), 977-984 (2020).</li>
<li>Biotteau, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sporadic+and+familial+variants+in+NF1%3A+an+explanation+of+the+wide+variability+in+neurocognitive+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">Sporadic and familial variants in NF1: an explanation of the wide variability in neurocognitive phenotype.</a> Front Neurol. 11, 368(2020).</li>
<li>Rodriguez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+adiposity+prior+to+pregnancy+is+associated+with+ADHD+symptoms+in+offspring%3A+evidence+from+three+prospective+pregnancy+cohorts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Maternal adiposity prior to pregnancy is associated with ADHD symptoms in offspring: evidence from three prospective pregnancy cohorts.</a> Int J Obes (Lond). 32 (3), 550-557 (2008).</li>
<li>Andersen, C. H., Thomsen, P. H., Nohr, E. A., Lemcke, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+body+mass+index+before+pregnancy+as+a+risk+factor+for+ADHD+and+autism+in+children%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Child+Adolesc+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Maternal body mass index before pregnancy as a risk factor for ADHD and autism in children).</a> Eur Child Adolesc Psychiatry. 27 (2), 139-148 (2018).</li>
<li>Pugh, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+weight+gain%2C+prepregnancy+body+mass+index+and+offspring+attention-deficit+hyperactivity+disorder+symptoms+and+behaviour+at+age+10%5BTitle%5D)+AND+%22Bjog%22%5BJournal%5D)">Gestational weight gain, prepregnancy body mass index and offspring attention-deficit hyperactivity disorder symptoms and behaviour at age 10.</a> Bjog. 123 (13), 2094-2103 (2016).</li>
<li>Mina, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prenatal+exposure+to+maternal+very+severe+obesity+is+associated+with+impaired+neurodevelopment+and+executive+functioning+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Prenatal exposure to maternal very severe obesity is associated with impaired neurodevelopment and executive functioning in children.</a> Pediatr Res. 82 (1), 47-54 (2017).</li>
<li>Oken, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+maternal+prenatal+weight+and+offspring+cognition+and+behavior%3A+Results+from+the+Promotion+of+Breastfeeding+Intervention+Trial+%28PROBIT%29+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Netw+Open%22%5BJournal%5D)">Analysis of maternal prenatal weight and offspring cognition and behavior: Results from the Promotion of Breastfeeding Intervention Trial (PROBIT) Cohort.</a> JAMA Netw Open. 4 (8), e2121429-e2121429 (2021).</li>
<li>Buss, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+executive+function+mediates+the+association+between+maternal+pre-pregnancy+body+mass+index+and+child+ADHD+symptoms%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Impaired executive function mediates the association between maternal pre-pregnancy body mass index and child ADHD symptoms.</a> PLOS ONE. 7 (6), e37758(2012).</li>
<li>Li, Y. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+maternal+obesity+and+autism+spectrum+disorder+in+offspring%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autism+Dev+Disord%22%5BJournal%5D)">Association between maternal obesity and autism spectrum disorder in offspring: a meta-analysis.</a> J Autism Dev Disord. 46 (1), 95-102 (2016).</li>
<li>Dow, C., Galera, C., Charles, M. -A., Heude, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+pre-pregnancy+BMI+and+offspring+hyperactivity-inattention+trajectories+from+3+to+8+years+in+the+EDEN+birth+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Child+Adolesc+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Maternal pre-pregnancy BMI and offspring hyperactivity-inattention trajectories from 3 to 8 years in the EDEN birth cohort study.</a> Eur Child Adolesc Psychiatry. 32 (10), 2057-2065 (2023).</li>
<li>Fast, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+attention-deficit%2Fhyperactivity+disorder+and+autism+in+12-year-old+children%3A+A+population-based+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Devl+Med+Child+Neurol%22%5BJournal%5D)">Prevalence of attention-deficit/hyperactivity disorder and autism in 12-year-old children: A population-based cohort.</a> Devl Med Child Neurol. 66 (4), 493-500 (2023).</li>
<li>Carter, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+obesity+and+diabetes+during+pregnancy+and+early+autism+screening+score+at+well-child+visits+in+standard+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Autism%22%5BJournal%5D)">Maternal obesity and diabetes during pregnancy and early autism screening score at well-child visits in standard clinical practice.</a> Autism. 28 (4), 975-984 (2023).</li>
<li>West, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+maternal+body+mass+index+and+child+cognitive+outcomes+at+3+years+of+age+are+buffered+by+specific+early+environments+in+a+prospective+Canadian+birth+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dev+Orig+Health+Dis%22%5BJournal%5D)">Relationships between maternal body mass index and child cognitive outcomes at 3 years of age are buffered by specific early environments in a prospective Canadian birth cohort.</a> J Dev Orig Health Dis. 14 (1), 42-52 (2023).</li>
<li>Gutmann, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis type 1.</a> Nat Rev Dis Primers. 3, 17004(2017).</li>
<li>Martins, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lower+fasting+blood+glucose+in+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Connect%22%5BJournal%5D)">Lower fasting blood glucose in neurofibromatosis type 1.</a> Endocr Connect. 5 (1), 28-33 (2016).</li>
<li>Martins, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+insulin+sensitivity+in+individuals+with+neurofibromatosis+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Increased insulin sensitivity in individuals with neurofibromatosis type 1.</a> Arch Endocrinol Metab. 62 (1), 41-46 (2018).</li>
<li>Brossier, N. M., Thondapu, S., Cobb, O. M., Dahiya, S., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal%2C+spatial%2C+and+genetic+constraints+contribute+to+the+patterning+and+penetrance+of+murine+Neurofibromatosis-1+optic+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Temporal, spatial, and genetic constraints contribute to the patterning and penetrance of murine Neurofibromatosis-1 optic glioma.</a> Neuro Oncol. 23 (4), 625-637 (2020).</li>
<li>de Lurdes Pinto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+Report%3A+Mouse+fetal+blood+collection+taking+the+best+out+of+the+old+needle-syringe+method%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Technical Report: Mouse fetal blood collection taking the best out of the old needle-syringe method.</a> Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 35 (1), 5(2008).</li>
<li>Musillo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bdnf-Nrf-2+crosstalk+and+emotional+behavior+are+disrupted+in+a+sex-dependent+fashion+in+adolescent+mice+exposed+to+maternal+stress+or+maternal+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Bdnf-Nrf-2 crosstalk and emotional behavior are disrupted in a sex-dependent fashion in adolescent mice exposed to maternal stress or maternal obesity.</a> Transl Psychiatry. 13 (1), 399(2023).</li>
<li>Encinas, J. M., Vaahtokari, A., Enikolopov, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluoxetine+targets+early+progenitor+cells+in+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fluoxetine targets early progenitor cells in the adult brain.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (21), 8233-8238 (2006).</li>
<li>Anastasaki, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+induced+pluripotent+stem+cell+engineering+establishes+a+humanized+mouse+platform+for+pediatric+low-grade+glioma+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Human induced pluripotent stem cell engineering establishes a humanized mouse platform for pediatric low-grade glioma modeling.</a> Acta Neuropathol Commun. 10 (1), 120(2022).</li>
<li>Cai, H. -J., Xie, C. -L., Chen, Q., Chen, X. -Y., Chen, Y. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+hepatic+low-density+lipoprotein+receptor+activity+and+serum+cholesterol+level+in+the+human+fetus%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The relationship between hepatic low-density lipoprotein receptor activity and serum cholesterol level in the human fetus.</a> Hepatology. 13 (5), 852-857 (1991).</li>
<li>Toonen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF1+germline+mutation+differentially+dictates+optic+glioma+formation+and+growth+in+neurofibromatosis-1%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">NF1 germline mutation differentially dictates optic glioma formation and growth in neurofibromatosis-1.</a> Hum Mol Genet. 25 (9), 1703-1713 (2016).</li>
<li>Guo, X., Pan, Y., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+genomic+alterations+differentially+dictate+low-grade+glioma+growth+through+cancer+stem+cell-specific+chemokine+recruitment+of+T+cells+and+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Genetic and genomic alterations differentially dictate low-grade glioma growth through cancer stem cell-specific chemokine recruitment of T cells and microglia.</a> Neuro Oncol. 21 (10), 1250-1262 (2019).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Meyer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+three+commonly+used+blood+sampling+techniques+on+the+welfare+of+laboratory+mice%3A+Taking+the+animal%27s+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Impact of three commonly used blood sampling techniques on the welfare of laboratory mice: Taking the animal's perspective.</a> PLOS ONE. 15 (9), e0238895(2020).</li>
<li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood%2C+including+routes+and+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li>
<li>Jung, J., Garnett, E., Rector, K., Jariwala, P., Devaraj, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+collection+tube+type+on+glucose+stability+in+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Clin+Lab+Sci%22%5BJournal%5D)">Effect of collection tube type on glucose stability in whole blood.</a> Ann Clin Lab Sci. 50 (4), 557-559 (2020).</li>
<li>Bonetti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Which+sample+tube+should+be+used+for+routine+glucose+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Prim+Care+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Which sample tube should be used for routine glucose determination.</a> Prim Care Diabetes. 10 (3), 227-232 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#5/45 Pince</td><td>Dumont&nbsp ;</td><td>11251-35 Forme de</td><td>la pointe : inclinée 45&deg ;</td></tr><tr><td>4200 Tapestation</td><td>Agilent</td><td>G2991BA</td><td>Vérifier l’intégrité et la qualité de l’ARN, mesure des valeurs RIN Récipient d’azote</td></tr><tr><td>liquide de paillasse</td><td>Thermo Fisher</td><td>2122</td><td>Ou un autre récipient cryo-safe</td></tr><tr><td>Contrôle Chow</td><td>PicoLab</td><td>5053</td><td>Les régimes de recherche D12328 (faible en gras, faible en sucre) peuvent également être utilisés.</td></tr><tr><td>Pince incurvée</td><td>Cole Parmer</td><td>UX-10818-25</td> Forme de la <td>pointe : incurvée 90&deg ;</td></tr><tr><td>Manche de lame de dissection</td><td>Cole-Parmer Essentials</td><td>10822-20</td><td>SS Siegel-Type, lames #10 à #15 EMS</td></tr><tr><td>SuperCut Dissection Ciseaux</td><td>Microscope électronique sciences</td><td>72996-01</td><td>5&frac12 ; " (139,7 mm), Anticorps GFAP droit</td></tr><tr><td></td><td>Abcam</td><td>ab7260</td><td>Dilué 1:350. Bloc avec 10 % de sérum contenant 0,3 M de glycine.</td></tr><tr><td>Lames chirurgicales en acier au carbone Glassvan, taille 11</td><td>Les lames MYCO medical</td><td>2001T-11</td><td>#11 permettent une coupe droite et plate</td></tr><tr><td>Micro cuillère de laboratoire</td><td>Az Scilab</td><td>A2Z-VL001</td><td>en acier inoxydable, autoclavable</td></tr><tr><td>Micro ciseaux</td><td>Rubis</td><td>78180-1C3</td><td>modèle 1C300</td></tr><tr><td>Minivette&nbsp ; POCT neutre</td><td>Sarstedt</td><td>17.2111.050</td><td>volume nominal : 50 & micro ; L, sans préparation</td></tr><tr><td>Nanorop</td><td>Thermo Fisher</td><td>13-400-519</td><td>Mesure de la concentration en ARN, rapports 260/280</td></tr><tr><td>Régime obésogène</td><td>Researchdiets.com</td><td>D12331</td> Réactif de cholestérol total <td>riche en graisses et riche en saccharose</td></tr><tr><td></td><td>Thermo Fisher</td><td>TR13421</td><td>Détection colorimétrique</td></tr> <tr><td>&bêta ;-actine</td><td>anticorps Signalisation cellulaire</td><td>8457</td><td>Diluer 1:1 000.</td></tr></tbody></table>

collecte simultanée de cerveau et de sérum de souris fœtales pour évaluer les effets de l’alimentation maternelle sur la nutrition et le développement neurologique dans la neurofibromatose de type 1

Concurrent Collection of Fetal Murine Brain and Serum to Assess Effects of Maternal Diet on Nutrition and Neurodevelopment in Neurofibromatosis Type 1

Pour illustrer la qualité du tissu cérébral obtenu par cette technique, nous montrons des échantillons de cerveaux fœtaux de souris Nestin-CFPnuc35, immunomarqués pour la GFAP selon une technique précédemment rapportée32. Des cellules Nestin+ tapissent le ventricule latéral (Figure 2A), avec des filaments GFAP+ s’étendant à partir de la surface. Nous n’avons pas observé de différences entre l’expression de Nestin ou de GFAP dans le ventricule latéral des souris MC par rapport aux souris exposées à l’Ob dans les souches hétérozygotes WT ou Nf1 (Figure 2A,B). Nous avons ensuite évalué la qualité des tissus microdisséqués. Nous avons d’abord effectué le western blot36 pour la protéine d’entretien β-actine sur le tissu microdisséqué isolé des ventricules latéraux de souris atteintes de la maladie de Crohn par rapport à des souris exposées à l’Ob. Tous les échantillons ont montré une forte expression de la β-actine (figure 2C), comme prévu. Nous avons ensuite isolé l’ARN du tissu microdisséqué selon la méthodologie précédemment rapportée32. L’ARN isolé présentait à la fois une pureté (260/280 ≥ 2) et une intégrité élevées (valeurs RIN ≥ 9), ce qui indique un ARN de haute pureté et non dégradé (Figure 2D).
Nous avons ensuite comparé les différentes méthodes d’isolement sérique. En utilisant notre méthode de minivette, nous avons régulièrement collecté de plus grands volumes de sérum non hémolysé, tandis que le drainage par gravité et la ponction thoracique ont entraîné une collecte de volume très variable et une hémolyse dans de nombreux échantillons (Figure 3A,B). Pour illustrer la qualité du sérum obtenu grâce à cette technique, nous avons mesuré le taux de cholestérol sérique total à l’aide du réactif de cholestérol total conformément aux instructions du fabricant. Le taux de cholestérol fœtal se situait dans la fourchette attendue chez les petits en fin de gestation, d’après des études antérieures chez des fœtus humains37. Les concentrations ont augmenté chez les souris exposées à l’Ob par rapport aux souris exposées à la CD chez les petits de type sauvage (figure 3C, à gauche) et hétérozygotes Nf1 (figure 3C, à droite). Notez que le panneau de droite représente les données combinées de deux souches hétérozygotes Nf1 différentes avec des mutations germinales identifiées par le patient (R681X, C383X)32,38,39 car des profils similaires ont été observés dans les deux souches.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66226/66226fig01.jpg"> Figure 1 : Résumé graphique du flux de travail. Les petits sont d’abord isolés des mères gestantes. Le sérum est ensuite récolté sur les chiots. Enfin, des cerveaux entiers sont isolés chez les petits et, si nécessaire, microdisséqués pour les régions d’intérêt. Graphique réalisé avec BioRender.com. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66226/66226fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66226/66226fig02.jpg"> Figure 2 : Résultats illustratifs, tissu cérébral. (A) Des cerveaux cryosectionnés de souris Nestin-CFPnuc, qui expriment une protéine fluorescente cyan localisée nucléairement sous le contrôle du promoteur Nestin, ont été récoltés avec cette méthode et immunomarqués pour la GFAP (rouge) selon la méthodologie précédemment rapportée32. Les cellules positives à la nestine sont visualisées via l’expression endogène de Nestin-CFPnuc (vert). Les noyaux ont été contre-colorés avec du bis-benzimide (bleu). Il n’y avait pas de différences significatives entre les cerveaux atteints de la maladie de Crohn et ceux exposés à l’Ob. Barre d’échelle = 100 μm. (B) Nestin-CFPnuc ; Les petitsNf1 mut/+ ont été évalués de la même manière. La distribution de la GFAP et de Nestin-CFP semblait similaire à celle de la WT et ne variait pas selon les conditions alimentaires. Barre d’échelle = 100 μm. (C) La protéine a été isolée à partir de tissus microdisséqués du VG. Le transfert Western a été effectué selon la méthodologie précédemment rapportée36 avec 20 μg de protéines chargées par voie. Une forte expression de β-actine était détectable dans tous les échantillons. (D) L’ARN a été isolé à partir de tissus microdisséqués conformément à la méthodologie précédemment rapportée32. La qualité de l’ARN a été évaluée à l’aide de rapports 260/280 et de valeurs RIN. Tous les échantillons ont montré d’excellents rapports 260/280 (≥2) et des valeurs RIN (≥9), indiquant une bonne isolation de l’ARN non dégradé. Abréviations : CFP = protéine fluorescente cyan ; GFAP = protéine acide fibrillaire gliale ; WT = de type sauvage ; VG = ventricule latéral ; RIN = Numéro d’intégrité de l’ARN. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66226/66226fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66226/66226fig03.jpg"> Figure 3 : Résultats illustratifs et sérum. (A) Le sérum a été prélevé à partir de chacune des méthodes décrites. Le prélèvement à l’aide de la minivette a permis le prélèvement régulier de sérum non hémolysé par rapport au drainage assisté par gravité et à la ponction thoracique. (B) Les volumes typiques de collection de sérum sont indiqués. La collection Minivette a permis une collection plus reproductible de plus grands volumes de sérum. Signification statistique déterminée par ANOVA à un facteur avec comparaisons multiples. (C) Le cholestérol sérique total a été mesuré à partir de la CD par rapport au WT (à gauche) et au sérum fœtal hétérozygote Nf1 (à droite) ; Les animaux exposés à l’obologie présentaient un taux de cholestérol sérique plus élevé dans les deux génotypes. Signification statistique déterminée par le test t. Barres d’erreur : SEM. Abréviations : WT = type wild ; CD = régime témoin ; Ob = régime obésogène. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66226/66226fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Tableau supplémentaire S1 : Compositions alimentaires. La composition des régimes témoins et obésogènes utilisés dans ce manuscrit est présentée. REMARQUE : Pour un régime faible en gras et sans saccharose qui contrôle mieux les composants alimentaires individuels de D12331, le régime D12328 (researchdiets.com) peut être préféré. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66226/66226_S_Table1Rev.zip" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>

Collecte simultanée de cerveau et de sérum de souris fœtales pour évaluer les effets de l’alimentation maternelle sur la nutrition et le développement neurologique dans la neurofibromatose de type 1

Maternal diet-induced obesity has been demonstrated to alter neurodevelopment in offspring, which may lead to reduced cognitive capacity, hyperactivity, ...

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Génétique

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Collecte simultanée de cerveau et de sérum de souris fœtales pour évaluer les effets de l’alimentation maternelle sur la nutrition et le développement neurologique dans la neurofibromatose de type 1 (Vidéo) | JoVE Journal

Collecte simultanée de cerveau et de sérum de souris fœtales pour évaluer les effets de l’alimentation maternelle sur la nutrition et le développement neurologique dans la neurofibromatose de type 1

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