Name: Analyse des interactions ADN-protéines avec l’interférométrie de biocouche à base de streptavidine (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Découvrez l'interférométrie de biocouche pour analyser les interactions ADN-protéines en temps réel. Cette méthode permet d'étudier l'affinité de liaison de la protéine A de réplication et l'impact des modifications post-traductionnelles sur la fonction protéique.

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<meta charset="utf8"></head><body>Analyse quantitative de la cinétique de liaison RPA-ssDNA à l’aide de méthodes sans marquage

<table><tbody><tr><td>0,5 mL Micro Tubes à centrifuger</td><td>Globe Scientific</td><td>111554A</td><td></td></tr><tr><td>96 Well Standard Black Microplate</td><td>Dot Scientific</td><td>4ti-0223</td><td></td></tr><tr><td>Biotinylated poly dT Oligonucleotide</td><td>IDT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153-10G</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Dot Scientific</td><td>DSD11000-10</td><td></td></tr><tr><td>Acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA)</td><td>Dot Scientific</td><td>DSE57020-500</td><td></td></tr><tr><td>Acide chlorhydrique&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>A144-500</td><td></td></tr><tr><td>Kimtec Science Kimwipes&nbsp ;</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Octet N1 Logiciel</td><td>Sartorius&nbsp ;</td><td>1.4.0.13</td><td></td></tr><tr><td>Biocapteur Octet SA&nbsp ;</td><td>Sartorius&nbsp ;</td><td>18-5019</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7,2 (10x)</td><td>Gibco</td><td>1666711</td><td></td></tr><tr><td>Personal Assay Octet N1 System</td><td>Sartorius&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acide phosphorique&nbsp ;</td><td>Ward’s Science</td><td>470302-024</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium (NaCl)</td><td>Dot Scientific</td><td>DSS23020-5000</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Dot Scientific</td><td>DST60040-5000</td><td></td></tr><tr><td>Tween20&nbsp ;</td><td>Bio-Rad</td><td>170-6531</td><td></td></tr></tbody></table>

analyse des interactions adn-protéines avec l’interférométrie de biocouche à base de streptavidine

Analyzing DNA-Protein Interactions with Streptavidin-Based Biolayer Interferometry

Dans le BLI, la lumière blanche est réfléchie par l’interface de la biocouche/tampon et l’interface de référence interne vers le spectromètre. Le motif d’interférence qui en résulte est enregistré, et le décalage spectral est mesuré sur une période de temps et représenté sous forme de courbes de liaison en nm. La figure 1 montre une figure représentative montrant l’extrémité du biocapteur avec et sans liaison à l’analyte et le décalage de longueur d’onde spectrale (nm) correspondant. Les cou...

Analyse des interactions ADN-protéines avec l’interférométrie de biocouche à base de streptavidine

Protein-DNA interactions underpin essential cellular processes. Understanding these interactions is critical for elucidating the molecular mechanisms of ...

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Dans cette vidéo, nous faisons la démonstration de la technologie d’interférométrie de biocouche (BLI) pour détecter les interactions intermoléculaires entre les ligands et les analytes cibles en temps réel. BLI mesure les changements dans le modèle d’interférence de la lumière blanche réfléchie par une couche de ligands immobilisés à la surface d’un biocapteur lorsqu’ils interagissent avec des analytes en solution.

Technologie d’interférométrie de biocouche pour détecter les interactions entre le ligand et l’analyte

Les protocoles décrivent ici les essais cinétiques des interactions protéine-protéine avec Bio-couche interférométrie. Type F ATP synthase, qui est impliquée dans le métabolisme énergétique cellulaire, peut être inhibée par sa sous-unité ε dans des bactéries. Nous avons adapté Bio-couche interférométrie pour étudier les interactions du complexe catalytique avec le domaine C-terminal inhibiteur de ε.

Bio-couche interférométrie pour Cinétique des interactions protéine-protéine et allostériques Effets ligand mesure

Nous décrivons ici l'instrumentation et des méthodes pour la détection de molécules de protéine unique marqués par fluorescence qui interagissent avec une molécule d'ADN unique suspendu entre deux microsphères optiquement piégés.

La combinaison unique molécule manipulation et d&#39;imagerie pour l&#39;étude des interactions protéine-ADN

Nous présentons ici un protocole visant à contrôler le montage et le démontage de la toxine du charbon à l’aide de biolayer l’interférométrie (BLI). Suite de montage/démontage sur la surface du biocapteur, les complexes de protéine importante sont dispensés de la surface pour la visualisation et l’identification des composantes des complexes à l’aide de la microscopie électronique et microanalyse, respectivement.

Analyse des Complexes protéiques dynamique assemblés sur et libéré de Biolayer interférométrie biocapteur à l’aide de la spectrométrie de masse et de microscopie électronique

Les interactions des facteurs de transcription (TF) avec la polymérase d'ARN sont habituellement étudiées utilisant des essais de retrait. Nous appliquons une technologie d'interférométrie biocouche (BLI) pour caractériser l'interaction de GrgA avec la polymérase d'ARN chlamydial. Par rapport aux essais de retrait, BLI détecte l'association et la dissociation en temps réel, offre une sensibilité plus élevée et est très quantitatif.

Application de biocouches interferométrie (BLI) pour étudier les interactions protéines-protéines dans la transcription

flexibilité conformationnelle joue un rôle essentiel dans la fonction des protéines. Nous décrivons ici l'utilisation de la spectrométrie de masse à ionisation par électronébulisation couplée à l'échange hydrogène-deutérium résolue dans le temps pour sonder les changements structurels rapides qui favorisent la fonction des protéines ordonné et désordonné.

Résolue en temps d&#39;échange hydrogène Ionisation ElectroSpray-deuterium spectrométrie de masse pour l&#39;étude de la structure des protéines et dynamique

Ce protocole décrit la séparation des complexes fonctionnels de la chaîne de transport d'électrons mitochondriaux (Cx) IV et des supercomplexes de ceux-ci en utilisant une électrophorèse native pour révéler des informations sur leur assemblage et leur structure. Le gel natif peut être soumis à un immunoblot, des essais en gel et une purification par électroélution pour caractériser davantage les complexes individuels.

Analyse des supercomplexes de la chaîne de transport d&#39;électrons mitochondriaux avec électrophorèse native, essais en gel et électroélution

Nous présentons un protocole pour la caractérisation rapide des biomoléculaire pliage et contraignant les interactions avec les ligands thermolabiles utilisant la calorimétrie différentielle à balayage.

Mesurer les profils biomoléculaire DSC avec des Ligands Thermolabile de caractériser rapidement pliage et reliure Interactions

Le protocole ici décrit les interactions de protéine purifiée hEAG1 de canal ionique avec la petite molécule lipidique ligand phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate (PIP2). La mesure démontre que BLI pourrait être une méthode potentielle pour le dépistage de nouvelles petites molécules ion canal ligand.

Capturer la cinétique de l’Interaction d’une protéine canal ionique avec petites molécules par le dosage de l’interférométrie Bio-couche

Mutagenèse dirigée est une technique utilisée pour introduire des mutations spécifiques dans l’acide désoxyribonucléique (ADN). Ce protocole décrit comment faire mutagénèse dirigée avec un 2-step et approche, qui s’applique à n’importe quel fragment d’ADN d’intérêt basée sur les 3 étapes amplification génique (PCR).

Mutagenèse dirigée pour In Vitro et In Vivo des expériences illustrées avec Interactions ARN chez Escherichia Coli

Découvrez l'interférométrie de biocouche pour analyser les interactions ADN-protéines en temps réel. Cette méthode permet d'étudier l'affinité de liaison de la protéine A de réplication et l'impact des modifications post-traductionnelles sur la fonction protéique.

Analyse des interactions ADN-protéines avec l’interférométrie de biocouche à base de streptavidine

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