Name: Séparation et affichage rapides d’agents fibrinogénolytiques actifs chez Sipunculus nudus par électrophorèse sur gel fibrinogène-polyacrylamide (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T13:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: Découvrez une méthode d'électrophorèse fibrinogène-PAGE simplifiée pour cribler les agents fibrinogénolytiques actifs chez Sipunculus nudus. Cette technique rapide et économique accélère le développement de médicaments thrombolytiques.

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<meta charset="utf8"></head><body>Dévoilement des agents fibrinogénolytiques chez les vers d’arachide avec Fibrinogen-PAGE

<ol><li>Bikdeli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COVID-19+and+thrombotic+or+thromboembolic+disease%3A+Implications+for+prevention%2C+antithrombotic+therapy%2C+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).</li>
<li>Tsivgoulis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombolysis+for+acute+ischaemic+stroke%3A+current+status+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Thrombolysis for acute ischaemic stroke: current status and future perspectives.</a> Lancet Neurol. 22 (5), 418-429 (2023).</li>
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<li>Lu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification%2C+characterization%2C+and+chemical+modification+of+Bacillus+velezensis+SN-14+fibrinolytic+enzyme%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Macromol%22%5BJournal%5D)">Purification, characterization, and chemical modification of Bacillus velezensis SN-14 fibrinolytic enzyme.</a> Int J Biol Macromol. 177, 601-609 (2021).</li>
<li>Abu-Tahon, M. A., Abdel-Majeed, A. M., Ghareib, M., Housseiny, M. M., Abdallah, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombolytic+and+anticoagulant+efficiencies+of+purified+fibrinolytic+enzyme+produced+from+Cochliobolus+hawaiiensis+under+solid-state+fermentation%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Appl+Biochem%22%5BJournal%5D)">Thrombolytic and anticoagulant efficiencies of purified fibrinolytic enzyme produced from Cochliobolus hawaiiensis under solid-state fermentation.</a> Biotechnol Appl Biochem. 70 (6), 1954-1971 (2023).</li>
<li>Lin, W., Lin, H., Xin, P., Yan, H., Kang, B., Tang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+approach+to+analyze+the+cell+components+of+cerebral+blood+clots%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive approach to analyze the cell components of cerebral blood clots.</a> J Vis Exp. (197), e65791(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> J Vis Exp. (196), e65631(2023).</li>
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<li>Walton, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+fibrin+plate+method+for+the+assay+of+plasminogen+activators%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">An improved fibrin plate method for the assay of plasminogen activators.</a> Clinica Chimica Acta. 13 (5), 680-684 (1966).</li>
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<li>Kato, S., Takeuchi, K., Iwaki, M., Miyazaki, K., Honda, K., Hayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chitin-+and+streptavidin-mediated+affinity+purification+systems%3A+A+screening+platform+for+enzyme+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Ed+Engl%22%5BJournal%5D)">Chitin- and streptavidin-mediated affinity purification systems: A screening platform for enzyme discovery.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 62 (31), e202303764(2023).</li>
<li>Sharma, N., Sharma, R., Rajput, Y. S., Mann, B., Singh, R., Gandhi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+methods+for+milk+proteins+on+polyacrylamide+gel+electrophoresis%3A+Critical+analysis+and+options+for+better+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22International+Dairy+Journal%22%5BJournal%5D)">Separation methods for milk proteins on polyacrylamide gel electrophoresis: Critical analysis and options for better resolution.</a> International Dairy Journal. 114, 104920(2021).</li>
<li>Xu, R., Ma, G., Chen, L., Cui, X. Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , Available from: 
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1&nbsp ; M Tris-HCl (pH 6,8)</td><td>Solarbio</td><td>T1020</td><td></td></tr><tr><td>1,5 M Tris-HCl (pH 8,8)</td><td>Solarbio</td><td>T1010</td><td></td></tr><tr><td>30 % Acrylamide/Bis-acrylamide</td><td>Biosharp</td><td>BL513B</td><td></td></tr><tr><td>Persulfate d’ammonium</td><td>XiLONG SCIENTIFIC</td><td>7727-54-0</td><td></td></tr><tr><td>Bécher</td><td>PYREX</td><td>2-9425-02</td><td></td></tr><tr><td>Tube à centrifuger (1,5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur à température constante</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Coomas Brillant Blue Solution de coloration</td><td>Beyotime</td><td>P0017F</td><td></td></tr><tr><td>Balance analytique électronique</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinogen</td><td>Solarbio</td><td>F8051</td><td></td></tr><tr><td>Pointes de pipette de chargement de gel, Bulk</td><td>Biosharp</td><td>BS-200-GTB</td><td></td></tr><tr><td>Homogénéisateur</td><td>AHS</td><td>ATS-1500</td><td></td></tr><tr><td>Oscillateur à rotation horizontale</td><td>NuoMi</td><td>NMSP-600</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Référence</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell</td><td>BIO-RAD</td><td>165-8000~165-8007</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine</td><td>Sigma</td><td>T9281</td><td></td></tr><tr><td>Pointe de pipette (1 mL)</td><td>Pointe</td> de pipette <td>Axygene T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(10 &micro ; L)</td> <td>Axygene</td><td>T-10XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pointe de pipette (200 &micro ; L)</td><td>Pipette Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(1 mL)Pipette</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>(10&micro ; L)</td><td>Pipette Thermo Fisher Scientific</td><td>ZX98775</td><td></td></tr><tr><td>(200 & micro ; L)</td><td>Pipette Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>(50 &micro ; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY15331</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse réfrigérée</td><td>cence</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>Dodécylsulfate de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900859</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Solarbio</td><td>T8060</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Solarbio</td><td>T8230</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr></tbody></table>

séparation et affichage rapides d’agents fibrinogénolytiques actifs chez sipunculus nudus par électrophorèse sur gel fibrinogène-polyacrylamide

Rapid Separation and Display of Active Fibrinogenolytic Agents in Sipunculus nudus through Fibrinogen-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

Après électrophorèse, toutes les bandes du marqueur ont été clairement affichées. Les 1x voies de chargement SDS-PAGE n’affichaient que des bandes de 10 kDa (bleu de bromophénol). Les échantillons de sFE et de vers d’arachide n’ont montré aucune bande observable (figure 1). Bien que les bandes des échantillons ne soient pas visibles, les performances du marqueur et du bleu de bromophénol ont indiqué que l’électrophorèse a été réussie et les échantillons ont été séparés en fonction de leur poids moléculaire.
Bien que l’ensemble du gel soit devenu bleu en raison de la coloration, la décoloration a rendu transparente la zone où le fibrinogène a été dégradé par les agents fibrinogénolytiques. Par rapport au marqueur, le sFE a indiqué une bande fibrinogénolytique active proche de 25 kDa. L’homogénat du ver d’arachide présentait 25 kDa, 33 kDa, 43 kDa et une série de bandes supérieures à 70 kDa (Figure 2). Les résultats ont indiqué que le sFE ne contenait qu’un composant fibrinogénolytique de 25 kDa, mais que l’homogénat du ver de l’arachide contenait des composants sFE et d’autres agents fibrinogénolytiques. La figure supplémentaire 1 est un exemple d’image en gel montrant le marqueur en bleu profond et les échantillons cibles sous forme de bandes brillantes.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig01.jpg"> Figure 1 : Gel après électrophorèse. M : Marqueur ; Voie 1 : 1x tampon de chargement SDS-PAGE ; Couloir 2 : sFE ; Voie 3 : 1x tampon de chargement SDS-PAGE ; Voie 4 : homogénat de vers d’arachide ; Voie 5 : 1x tampon de chargement SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig02.jpg"> Figure 2 : Gel après décoloration. M : Marqueur ; Voie 1 : 1x tampon de chargement SDS-PAGE ; Couloir 2 : sFE ; Voie 3 : 1x tampon de chargement SDS-PAGE ; Voie 4 : homogénat de vers d’arachide ; Voie 5 : 1x tampon de chargement SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Figure supplémentaire 1 : Image gel montrant le marqueur en bleu profond et les échantillons cibles sous forme de bandes brillantes. M : Marqueur ; Voie 1 : 1x tampon de chargement SDS-PAGE ; Couloir 2 : sFE ; Voie 3 : 1x tampon de chargement SDS-PAGE ; Voie 4 : homogénat de vers d’arachide ; Voie 5 : 1x tampon de chargement SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce fichier.</a>

Séparation et affichage rapides d’agents fibrinogénolytiques actifs chez Sipunculus nudus par électrophorèse sur gel fibrinogène-polyacrylamide

Fibrinogenolytic agents that can dissolve fibrinogen directly have been widely used in anti-coagulation treatment. Generally, identifying new ...

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Optimisé fibrine billes de gel d&#39;analyse pour l&#39;étude de l&#39;angiogenèse

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Électrophorèse bidimensionnelle sur gel de polyacrylamide : technique de séparation pour l’analyse des protéines dans un mélange complexe de protéines basé sur la charge et la masse moléculaire

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Séparation des petites molécules bioactives, peptides des sources naturelles et des protéines des microbes par la méthode de mise au point isoélectrique préparative (IEF)

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Séparation et affichage rapides d’agents fibrinogénolytiques actifs chez Sipunculus nudus par électrophorèse sur gel fibrinogène-polyacrylamide (Vidéo) | JoVE Journal

Séparation et affichage rapides d’agents fibrinogénolytiques actifs chez Sipunculus nudus par électrophorèse sur gel fibrinogène-polyacrylamide

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