Isolement de vecteurs viraux adéno-associés au moyen d’un protocole de chromatographie d’affinité d’héparine en une seule étape et semi-automatisé

Ce manuscrit décrit un protocole détaillé pour la génération et la purification de vecteurs viraux adéno-associés à l’aide d’une méthode de chromatographie d’affinité optimisée basée sur l’héparine. Il s’agit d’une approche simple, évolutive et rentable, qui élimine le besoin d’ultracentrifugation. Les vecteurs résultants présentent une pureté et une activité biologique élevées, ce qui prouve leur valeur dans les études précliniques.

Dans ce travail, nous avons l’intention de développer un protocole amélioré pour la production, la purification et la caractérisation de vecteurs viraux adéno-associés en mosaïque qui pourrait prouver leur valeur dans les études précliniques. Malgré les efforts déployés pour établir des lignées cellulaires productrices stables, la transfection transitoire dans les cellules de mammifères reste le flux de travail prédominant pour la production d’AAV. Ensuite, les AAV sont purifiés par centrifugation à gradient de densité à ultra-haute vitesse, ou par des techniques de chromatographie qui reposent sur les propriétés biochimiques des particules virales.

Les méthodes couramment utilisées pour purifier les AAV utilisent le chlorure de césium ou l’ultracentrifugation à gradient de densité d’iodixanol. Malgré leurs avantages, ils ont certaines limites. Ils prennent du temps, ont une évolutivité limitée et donnent souvent des résultats à certains vecteurs de faible pureté.

Aujourd’hui, pour surmonter ces contraintes, plusieurs chercheurs se sont intéressés aux techniques de chromatographie. Nous décrivons un protocole étape par étape pour la génération de rAAV en mosaïque basé sur la capacité de liaison à l’héparine de l’AAV2. Cette méthode permet d’obtenir des rAAV hautement purs et biologiquement actifs prêts à l’emploi en six jours, se présentant comme une stratégie semi-automatisée, évolutive et rentable pour générer des rAAV pour les études précliniques.

Après avoir démontré l’applicabilité de cette méthode pour la génération de rAAV en mosaïque, le système de production peut maintenant être affiné pour obtenir une meilleure évolutivité et une meilleure rentabilité en établissant une lignée cellulaire de producteur. De plus, nous visons à éliminer les particules vides en incluant une deuxième étape de purification de polissage.