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DOI: 10.3791/66580-v
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Ce protocole fournit une méthode d’isolement primaire des lymphocytes T murins et de microscopie à intervalle de la migration des lymphocytes T dans des conditions environnementales spécifiques avec une analyse quantitative.
L’objectif de notre recherche est de comprendre les modèles de migration des lymphocytes T dans des conditions environnementales hautement définies afin de permettre une expérimentation in vitro éclairée et de déchiffrer les interactions moléculaires ayant un impact sur la migration. L’imagerie en direct, telle que la microscopie multiphotonique intravitale, est utilisée pour la compréhension in vivo de la cinétique des cellules immunitaires. Mais les dispositifs microfluidiques sont un outil in vitro courant qui offre un contrôle précis du microenvironnement qui ne peut pas être offert dans un échantillon vivant.
Notre protocole nous permet d’analyser des voies de signalisation complexes et de mieux comprendre les expériences in vitro ciblées afin d’aborder davantage les rôles biologiques des signaux individuels d’une manière spécifique au type de cellule. Notre méthode est simple, reproductible et facile d’accès dans les laboratoires de recherche qui disposent d’un microscope à fond clair doté d’un appareil photo numérique connecté. Par conséquent, notre approche garantit un ensemble fiable de méthodes pour étudier les événements de migration cellulaire dynamique.
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