Name: SYSTÈME DE SYNTHÈSE DE PROTÉINES ACELLULAIRES POUR LA CONSTRUCTION DE CELLULES SYNTHÉTIQUES (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Découvrez la synthèse de protéines acellulaires pour construire des cellules synthétiques en utilisant des microcompartiments et des vésicules GUV. Ce protocole robuste établit les meilleures pratiques pour la communauté scientifique.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Protocoles CFPS pour les cellules synthétiques micro-compartimentées

<table><tbody><tr><td>1,2-dioleoyl-sn-glycéro-3-phosphocholine(DOPC)</td><td>Avanti</td><td>850375P</td><td></td></tr><tr><td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-sérine (sel de sodium)(DOPS)</td><td>Avanti</td><td>840035P</td><td></td></tr><tr><td>1,4 dithiothreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.11474</td><td></td></tr><tr><td>1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (POPC)</td><td>Avanti</td><td>850457P</td><td></td></tr><tr><td>AMP 3,5-cyclique (cAMP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9501</td><td></td>Tubes</tr> de <tr><td>50 mL</td><td>Eppendorf Eppendorf</td><td>Tubes Biosourcés</td><td></td></tr><tr><td>50 % de peroxyde d’hydrogène</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>516813</td><td></td></tr><tr><td>Acétate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Poudre de gélose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>05040</td><td></td></tr><tr><td>Alanin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4349</td><td></td></tr><tr><td>Amicon Cellules agitées</td><td>MerckMillipore</td> UFSC05001 Acétate <td>d’ammonium</td><td></td></tr><tr><td>(NH4OAc)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7262</td><td></td></tr><tr><td>Arginine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4474</td><td></td></tr><tr><td>Asparagine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0884</td><td></td></tr><tr><td>Aspartat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5474</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>Roche</td><td>11140965001</td><td></td></tr><tr><td>Atto 488 DOPE</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>67335</td><td></td></tr><tr><td>Atto 647N DOPE</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>42247</td><td></td></tr><tr><td>Erlenmeyer à chicanes</td><td>Shuniu</td><td>250 mL, 1000mL</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine (BSA)</td><td>Roche</td><td>10711454001</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugetube</td><td>Eppendorf</td><td>Eppendorf Tubes 3810X</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugetube</td><td>rack Eppendorf</td><td>0030119819</td><td></td></tr><tr><td>Système d’imagerie par chimiluminescence et épifluorescence</td><td>Uvitec</td><td>Alliance Q9 Advanced</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>288306</td><td></td></tr><tr><td>Microscopie confocale à balayage laser (LSM)</td><td>ZEISS</td><td>LSM 780</td><td></td></tr><tr><td>Countess Lames de chambre de comptage cellulaire</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>Lamelle Thermo</td><td>Scientific</td><td>Menzel BB02400500A113MNZ0</td><td></td></tr><tr><td>créatine kinase (CK)</td><td>Roche</td><td>10127566001</td><td></td></tr><tr><td>Créatine phosphate (CP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10621714001</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de culture</td><td>Huanqiu</td><td>90 mm</td><td></td></tr><tr><td>Cystein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5360</td><td></td></tr><tr><td>Cytidine 5'-sel disodique triphosphate (CTP)</td><td>aladdin</td><td>C101487</td><td></td></tr><tr><td>Membrane de dialyse</td><td>Spectrum</td><td>Standard RC Tubing MWCO : 12-14 kD</td><td></td></tr><tr><td>E.Z.N.A. Cycle Pure Kit</td><td>Omega Bio-Tek</td><td>D6492-01</td><td></td></tr><tr><td>Électro-Chauffage Cultivateur à température debout</td><td>Yiheng instrument</td><td>DHP-9602</td><td></td></tr><tr><td>Acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA)</td><td>Biosharp</td><td></td><td></td>1100027</tr><tr><td>Lecteur de plaques fluorescentes</td><td>BioTek</td><td>Synergy 2</td><td></td></tr><tr><td>Huile fluorée</td><td>Suzhou CChip instrument scientifique</td><td>2 %HFE7500</td><td></td></tr><tr><td>Acide folinique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47612</td><td></td></tr><tr><td>French Press</td><td>G.Heinemann</td><td>HTU-DIGI-Press</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>Glutamat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5667</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5792</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7126</td><td></td></tr><tr><td>Guanosine 5'-triphosphate sodium salt hydrate(GTP)</td><td>Roche</td><td>10106399001</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>HiPrep Q FF 16/10</td><td>Cytiva</td><td>28936543</td><td></td></tr><tr><td>Histidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034</td><td></td></tr><tr><td>Isoleucin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5281</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl-&amp;beta ;-D-thiogalactopyranoside (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5502</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8281</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Leucin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6914</td><td></td></tr><tr><td>Lysin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L5501</td><td></td></tr><tr><td>Acétate de magnésium tétrahydraté (Mg(OAc)2 )</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5661</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium(MgCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2670</td><td></td></tr><tr><td>Methionin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8439</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifugeuse</td><td>Eppendorf</td><td>5424 R</td><td></td></tr><tr><td>Huile minérale</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell Systems</td><td>Bio-Rad</td><td>1645050</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse polyvalente</td><td>Eppendorf</td><td>5810 R</td><td></td></tr><tr><td>NaN3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Acide nucléique &amp; NanoPhotomètre</td><td>IMPLEN</td><td>N60</td><td></td></tr><tr><td>NucleoBond Xtra Maxi kit pour plasmide de qualité transfection DNA</td><td>MACHEREY-NAGEL</td><td>740414.5</td><td></td></tr><tr><td>Nunc-Immuno MicroWell Plaques de polystyrène à 96 puits</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8616</td><td></td></tr><tr><td>Thermocycleur PCR</td><td>Eppendorf</td><td>Mastercycler nexus</td><td></td></tr><tr><td>Peptone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>83059</td><td></td></tr><tr><td>Phénylalanine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8740</td><td></td></tr><tr><td>Phosphoénolpyruvat (PEP)</td><td>GLPBIO</td><td>GC44635</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PMSF-RO</td><td></td></tr><tr><td>Polyéthylène glycol 8000 (PEG 8000)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>89510</td><td></td></tr><tr><td>Acétate de potassium(KOAc)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5708</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de potassium( KCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Glutamate de potassium (K-glutamate)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1501</td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de potassium (KOH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221473</td><td></td></tr><tr><td>Prolin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8865</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate kinase (PK)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9136</td><td></td></tr><tr><td>Serin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4311</td><td></td></tr><tr><td>Shaker</td><td>Zhichushakers</td><td>ZQZY-AF8</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de sodium (NaOH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5881</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>aladdin</td><td>S112226</td><td></td></tr><tr><td>Acide sulfurique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>339741</td><td></td></tr><tr><td>Filtres à seringue</td><td>Jinteng</td><td>0.45 &amp;mu ; m</td><td></td></tr><tr><td>Tube à essai</td><td>Shuniu</td><td>20 mL</td><td></td></tr><tr><td>TGX FastCast Acrylamide Kit, 12 %</td><td>Bio-Rad</td><td>#1610175</td><td></td></tr><tr><td>ThermoMixer</td><td>Eppendorf</td><td>ThermoMixer C</td><td></td></tr><tr><td>Threonin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8441</td><td></td></tr><tr><td>Base Tris</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900483</td><td></td></tr><tr><td>ARNt</td><td>Roche</td><td>10109550001</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7293</td><td></td></tr><tr><td>Tryptophane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8941</td><td></td></tr><tr><td>Tyrosin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8566</td><td></td></tr><tr><td>UTP Sel trisodique (UTP)</td><td>Aladdin</td><td>U100365</td><td></td></tr><tr><td>Pompe à vide avec système d’eau circulée</td><td>Zhengzhou Greatwall Scientific Industrial and Trade Co.Ltd</td><td>SHB-<img alt="Équation 1 » src=" style="margin : auto ; "></td><td></td></tr><tr><td>Valin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V4638</td><td></td></tr><tr><td>Mélangeurs Vortex</td><td>Kylin-Bell</td><td>Vortex QL-861</td><td></td></tr><tr><td>Système de purification de l’eau</td><td>MerckMillipore</td><td>Eau ultrapure directe (Type 1)</td><td></td></tr><tr><td>Extrait de levure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70161</td><td></td></tr><tr><td>&amp;beta ;-mercaptoéthanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>444203</td><td></td></tr></tbody></table>

systÈme de synthÈse de protÉines acellulaires pour la construction de cellules synthÉtiques

Cell-Free Protein Synthesis System for Building Synthetic Cells

Pour chaque nouveau lot d’extrait cellulaire et d’ARN polymérase T7, il est recommandé d’effectuer un dépistage de base des concentrations de Mg2+ et de K+ afin d’assurer les performances optimales du système CFPS. La fluorescence de la GFP du superplieur peut servir d’indicateur du rendement global du système CFPS dans des conditions variables, comme illustré à la figure 1A,B. De plus, une comparaison parallèle du rendement du système CFPS à travers différents compartiments est présentée à la figure 1C, démontrant des performances constantes dans les systèmes CFPS encapsulés, bien qu’avec une légère diminution des GUV, potentiellement due à l’influence du saccharose46. De plus, les réactions CFPS ont été encapsulées avec succès dans des gouttelettes (figure 2), des GUV (figure 3) et au sommet de SLB (figure 4).
La figure 2A met en évidence la formation de gouttelettes d’émulsion, évidentes lorsque la solution d’huile est devenue turbulente. L’expression des protéines fluorescentes vertes/rouges (GFP et mCherry) a été capturée à l’aide d’une microscopie confocale à balayage laser. La figure 3 a montré le succès de l’encapsulation de la réaction CFPS dans les GUV par le simple processus de transfert d’émulsion. Le canal rouge indiquait les lipides marqués ; le canal vert a montré l’expression du superfolder GFP ; et le canal jaune représentait un colorant fluorescent inerte. La figure 4A montre la chambre SLB où la réaction CFPS a pu être déposée. À l’intérieur de cette chambre, une SLB a été formée sur la lamelle de verre, avec le mélange réactionnel CFPS placé sur la SLB préformée, permettant l’imagerie via une microscopie confocale à balayage laser. Comme l’indique la figure 4B, la SLB a été visualisée par des lipides marqués, représentés en vert, tandis que la petite GTPase Cdc42 exprimée fusionnée avec mCherry a été représentée en magenta. L’expression in situ de mCherry-Cdc42 a été observable, ainsi que le processus de ciblage membranaire réversible, au microscope. Cependant, le système CFPS utilisé a été complété par des machines de prénylation, comme détaillé dans une publication récente47.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig01.jpg"> Figure 1 : Optimisation et comparaison du système CFPS. Dépistage des concentrations (A) de Mg2+ et (B) de K+ pour le système CFPS en vrac. (C) Un graphique à barres montrant les rendements d’expression des protéines dans différents compartiments. La fluorescence de la superfolder GFP a été utilisée pour déterminer le rendement du système CFPS, mesuré par un lecteur de plaques ou un microscope confocal à balayage laser. Abréviations : CFPS = synthèse des protéines acellulaires ; GFP = protéine fluorescente verte ; sfGFP = superdossier GFP ; GUV = vésicule unilamellaire géante ; SLB = bicouche lipidique supportée. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig02.jpg"> Figure 2 : Synthèse des protéines acellulaires dans les gouttelettes. (A) Une photo des réactions CFPS encapsulées dans des gouttelettes d’eau dans l’huile stabilisées par un tensioactif. (B) Images en fond clair et en fluorescence (C,D) des CFPS de (C) mCherry et (D) superfolder GFP encapsulées dans des gouttelettes visualisées par microscopie confocale à balayage laser. Le superdossier GFP est indiqué en vert ; mCherry est indiqué en magenta. Barres d’échelle = 20 μm. Abréviations : CFPS = synthèse des protéines acellulaires ; GFP = protéine fluorescente verte. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig03.jpg"> Figure 3 : Synthèse des protéines acellulaires dans les GUV. (A) Une photo des réactions CFPS encapsulées dans les GUV. (B-D) Image de fluorescence de CFPS encapsulés dans des GUVs POPC, exprimant la GFP du superdossier. (B) La bicouche lipidique a été marquée avec 0,05 % de lipides Atto647N-DOPE, indiqués en rouge, (C) un colorant inerte indiqué en jaune, et (D) le superfolder GFP a été indiqué en vert. Barres d’échelle = 20 μm. Abréviations : CFPS = synthèse des protéines acellulaires ; GFP = protéine fluorescente verte ; GUV = vésicule unilamellaire géante ; POPC = 1-palmitoyl-2-oléoyl-glycérol-3-phosphocholine ; DOPE = 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66626/66626fig04.jpg"> Figure 4 : Synthèse protéique acellulaire de la petite protéine GTPase-Cdc42 au-dessus des SLB. (A) Illustration schématique de la reconstitution du ciblage membranaire de Cdc42 et de l’extraction membranaire dépendante de RhoGDI sur les SLB, telle que visualisée par microscopie confocale à balayage laser. La machinerie de prénylation a été mise en œuvre via un extrait enrichi en prénlytransférase, qui est décrit en détail ailleurs. 47. (B) Une vue orthogonale de la pré- et postprénylation du mélange réactionnel au-dessus de la SLB. (C, D) Séries chronologiques d’intensité mCherry-Cdc42 sur la membrane (rose) et en solution (noir) pendant le ciblage de la membrane (C) et l’extraction de la membrane (D). Les barres d’échelle = 10 μm (A-D) ont été adaptées de Kai et al.47. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Tableau 1 : Liste des tampons. REMARQUE : Ajoutez du β-mercaptoéthanol et du DTT juste avant utilisation. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%201_rev.xlsx" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.</a>
Tableau 2 : Schéma de pipetage pour le dépistage de la concentration en Mg2+ . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%202_rev.xlsx" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.</a>
Tableau 3 : Schéma de pipetage pour le dépistage de la concentration en K+ . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%203_rev.xlsx" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.</a>
Tableau 4 : Composition de la solution interne. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%204_rev.xlsx" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.</a>
Tableau 5 : Composition de la solution externe. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%205_rev.xlsx" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.</a>
Tableau 6 : Composition de la solution de pré-interne. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66626/66626_Table%206_rev.xlsx" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.</a>

SYSTÈME DE SYNTHÈSE DE PROTÉINES ACELLULAIRES POUR LA CONSTRUCTION DE CELLULES SYNTHÉTIQUES

The Cell-Free Protein Synthesis (CFPS) system has been widely employed to facilitate the bottom-up assembly of synthetic cells. It serves as the host for ...

cell-free-protein-synthesis-system-for-building-synthetic-cells

Research

Recherche

JoVE Journal

Biochemistry

Biochimie

Ce protocole de cinq jours décrit toutes les étapes, de l'équipement et des logiciels supplémentaires nécessaires pour la création et l'exécution d'une Escherichia coli endogène efficace basé TX-TL système d'expression acellulaire à partir de zéro. Avec des réactifs, le protocole prend 8 heures ou moins de configurer une réaction, collecter et traiter les données.

Protocoles pour la mise en œuvre d'un Escherichia coli Sur la base du système d'expression cellulaire gratuit TX-TL pour la biologie synthétique

Ici, nous décrivons des méthodes simples pour la préparation de vésicules, l'encapsulation de la transcription et de la machinerie de traduction, et le suivi de la production de protéines. Les systèmes sans cellules résultantes peuvent être utilisées comme point de départ pour construire imite cellulaires de plus en plus complexes.

L&#39;encapsulation de transcription cellulaire et sans traduction machines dans des vésicules pour la construction de Mimics cellulaires

Nous décrivons une procédure simple lithographique pour l’immobilisation des molécules d’ADN gène-longueur sur une surface, ce qui peut être utilisée pour réaliser des expériences d’expression de gène acellulaire sur biopuces.

Surface-immobilisation fonctionnelle des gènes à l’aide de la lithographie de déplacement multipas Strand

Ce protocole détaille les étapes, les coûts et équipements nécessaires pour générer des e. coli-extraits cellulaires de base et mettre en œuvre en vitro réactions de synthèse de protéines dans les 4 jours ou moins. Pour tirer parti de la souplesse de cette plate-forme pour les applications larges, nous discutons des conditions de réaction qui peuvent être adaptées et optimisées.

Escherichia coli-base de la synthèse protéique acellulaire : protocoles pour une technologie de plate-forme robuste, flexible et accessible

Ce protocole décrit la méthode, les matériaux, l’équipement et les étapes pour la préparation ascendante de l’ARN et des protéines produisant des cellules synthétiques. Le compartiment aqueux intérieur des cellules synthétiques contenait le lysate bactérien S30 encapsulé dans un bilayer lipidique (c.-à-d. liposomes stables), à l’aide d’une méthode de transfert d’émulsion d’émulsion de l’eau dans l’huile.

Préparation des cellules synthétiques produisant des protéines à l’aide d’extraits bactériens exempts de cellules, de liposomes et de transfert d’émulsion

Nous présentons une méthode rapide et rentable pour produire le système TX-TL recombinant PURE sans cellule à l’aide d’équipements de laboratoire standard.

Système onePot PURE sans cellule

L’étude décrit un protocole pour créer de grandes quantités (μg-mg) d’ADN pour des campagnes de dépistage de protéines à partir de fragments de gènes synthétiques sans clonage ni utilisation de cellules vivantes. Le gabarit minimal est digéré et circularisé de manière enzymatique, puis amplifié à l’aide d’une amplification de cercle roulant isotherme. Des réactions d’expression sans cellules pourraient être effectuées avec le produit non purifié.

Méthodes enzymatiques rapides pour l’amplification de modèles linéaires minimaux pour le prototypage de protéines à l’aide de systèmes sans cellules

Des parties génétiques bien caractérisées sont nécessaires à la conception de nouveaux circuits génétiques. Nous décrivons ici une méthode rentable et à haut débit pour caractériser rapidement des parties génétiques. Notre méthode réduit les coûts et le temps en combinant des lysats acellulaires, de l’ADN linéaire pour éviter le clonage et de la manipulation acoustique des liquides pour augmenter le débit et réduire les volumes de réaction.

Caractérisation rapide de parties génétiques avec des systèmes acellulaires

Ce travail décrit la préparation de l’extrait cellulaire d’Escherichia coli (E. coli) suivie de réactions de synthèse de protéines sans cellules (CFPS) en moins de 24 heures. L’explication du protocole d’auto-induction sans cellule (CFAI) détaille les améliorations apportées pour réduire la surveillance des chercheurs et augmenter les quantités d’extrait cellulaire obtenues.

Des cellules à la synthèse de protéines sans cellules en 24 heures à l’aide d’un flux de travail d’auto-induction sans cellules

Un protocole pour la préparation et l’étalonnage tampon d’extraits cellulaires de souches knockout d’exonucléase V d’Escherichia coli BL21 Rosetta2 (ΔrecBCD et ΔrecB) est présenté ici. Il s’agit d’une approche rapide, facile et directe pour l’expression dans les systèmes de synthèse de protéines acellulaires utilisant des modèles d’ADN linéaires.

Synthèse de protéines acellulaires à partir d’extraits cellulaires déficients en exonucléase utilisant des modèles d’ADN linéaires

Nous présentons un protocole mis à jour pour la production du système OnePot « Protein synthesis Using Recombinant Elements » (PURE) et des ribosomes bruts pour la synthèse des protéines acellulaires, en mettant l’accent sur le contrôle de la croissance cellulaire afin de minimiser les variations d’un lot à l’autre.

Perfectionnement de OnePot PURE et production brute de ribosomes pour une synthèse acellulaire reproductible des protéines

Découvrez la synthèse de protéines acellulaires pour construire des cellules synthétiques en utilisant des microcompartiments et des vésicules GUV. Ce protocole robuste établit les meilleures pratiques pour la communauté scientifique.

SYSTÈME DE SYNTHÈSE DE PROTÉINES ACELLULAIRES POUR LA CONSTRUCTION DE CELLULES SYNTHÉTIQUES

Explorer plus de vidéos