Name: Isolement, expansion et différenciation des progéniteurs fibro-adipogènes à partir du modèle de souris épineuses (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T12:20:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Découvrez l'isolement des progéniteurs fibro-adipogènes par dissociation enzymatique et tri FACS chez la souris épineuse. Cette méthode permet d'étudier la régénération tissulaire et la médecine régénérative.

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<meta charset="utf8"></head><body>Digestion du cœur et des muscles squelettiques de souris pour la culture de progéniteurs fibro-adipogènes

<ol><li>Gaire, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiny+mouse+%28Acomys%29%3A+An+emerging+research+organism+for+regenerative+medicine+with+applications+beyond+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Spiny mouse (Acomys): An emerging research organism for regenerative medicine with applications beyond the skin.</a> NPJ Regen Med. 6, 1(2021).</li>
<li>Sandoval, A. G. W., Maden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+in+the+spiny+mouse%2C+Acomys%2C+a+new+mammalian+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Genet.+Dev%22%5BJournal%5D)">Regeneration in the spiny mouse, Acomys, a new mammalian model.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 64, 31-36 (2020).</li>
<li>Judson, R. N., Zhang, R. H., Rossi, F. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+mesenchymal+stem%2Fprogenitor+cells+in+skeletal+muscle%3A+Collaborators+or+saboteurs%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident mesenchymal stem/progenitor cells in skeletal muscle: Collaborators or saboteurs.</a> FEBS J. 280 (17), 4100-4108 (2013).</li>
<li>Uezumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+adipogenesis+originate+from+a+common+mesenchymal+progenitor+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and adipogenesis originate from a common mesenchymal progenitor in skeletal muscle.</a> J Cell Sci. 124, 3654-3664 (2011).</li>
<li>Joe, A. W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nat Cell Biol. 12, 153-163 (2010).</li>
<li>Uezumi, A., Fukada, S. I., Yamamoto, N., Takeda, S., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+progenitors+distinct+from+satellite+cells+contribute+to+ectopic+fat+cell+formation+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal progenitors distinct from satellite cells contribute to ectopic fat cell formation in skeletal muscle.</a> Nat Cell Biol. 122 (12), 143-152 (2010).</li>
<li>Soliman, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenic+Potential+of+Hic1-Expressing+Cardiac+Stromal+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Pathogenic Potential of Hic1-Expressing Cardiac Stromal Progenitors.</a> Cell Stem Cell. 26 (2), 205-220 (2020).</li>
<li>Hall, C., Gehmlich, K., Denning, C., Pavlovic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+relationship+between+cardiac+fibroblasts+and+cardiomyocytes+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Complex relationship between cardiac fibroblasts and cardiomyocytes in health and disease.</a> J Am Heart Assoc. 10, 1-15 (2021).</li>
<li>Gawriluk, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+ear-hole+closure+identifies+epimorphic+regeneration+as+a+discrete+trait+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of ear-hole closure identifies epimorphic regeneration as a discrete trait in mammals.</a> Nat Commun. 71 (7), 1-16 (2016).</li>
<li>Seifert, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+shedding+and+tissue+regeneration+in+African+spiny+mice+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Skin shedding and tissue regeneration in African spiny mice (Acomys).</a> Nature. 489, 561(2012).</li>
<li>Koopmans, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+tolerance+and+cardiac+repair+in+the+spiny+mouse+%28Acomys%29%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Ischemic tolerance and cardiac repair in the spiny mouse (Acomys).</a> NPJ Regen Med. 6, 78(2021).</li>
<li>Peng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+spiny+mice+%28Acomys%29+exhibit+endogenous+cardiac+recovery+in+response+to+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Adult spiny mice (Acomys) exhibit endogenous cardiac recovery in response to myocardial infarction.</a> NPJ Regen Med. 6, 74(2021).</li>
<li>Maden, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfect+chronic+skeletal+muscle+regeneration+in+adult+spiny+mice%2C+Acomys+cahirinus%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Perfect chronic skeletal muscle regeneration in adult spiny mice, Acomys cahirinus.</a> Sci Rep. 8, 8920(2018).</li>
<li>Riparini, G., Simone, J. M., Sartorelli, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-isolation+and+culture+of+fibro-adipogenic+progenitors+and+muscle+stem+cells+from+unperturbed+and+injured+mouse+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">FACS-isolation and culture of fibro-adipogenic progenitors and muscle stem cells from unperturbed and injured mouse skeletal muscle.</a> J Vis Exp. (184), e63983(2022).</li>
<li>Low, M., Eisner, C., Rossi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro%2Fadipogenic+progenitors+%28FAPs%29%3A+Isolation+by+FACS+and+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibro/adipogenic progenitors (FAPs): Isolation by FACS and culture.</a> Methods Mol Biol. 1556, 179-189 (2017).</li>
<li>Molina, T., Fabre, P., Dumont, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro-adipogenic+progenitors+in+skeletal+muscle+homeostasis%2C+regeneration+and+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibro-adipogenic progenitors in skeletal muscle homeostasis, regeneration and diseases.</a> Open Biol. 11 (12), 210110(2021).</li>
<li>Contreras, O., Rossi, F. M. V., Theret, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins%2C+potency%2C+and+heterogeneity+of+skeletal+muscle+fibro-adipogenic+progenitors-time+for+new+definitions%5BTitle%5D)+AND+%22Skelet+Muscle%22%5BJournal%5D)">Origins, potency, and heterogeneity of skeletal muscle fibro-adipogenic progenitors-time for new definitions.</a> Skelet Muscle. 111 (11), 1-25 (2021).</li>
<li>Fitzgerald, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MME%2B+fibro-adipogenic+progenitors+are+the+dominant+adipogenic+population+during+fatty+infiltration+in+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">MME+ fibro-adipogenic progenitors are the dominant adipogenic population during fatty infiltration in human skeletal muscle.</a> Commun Biol. 61 (6), 1-21 (2023).</li>
<li>Babaeijandaghi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DPPIV%2B+fibro-adipogenic+progenitors+form+the+niche+of+adult+skeletal+muscle+self-renewing+resident+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">DPPIV+ fibro-adipogenic progenitors form the niche of adult skeletal muscle self-renewing resident macrophages.</a> Nat Commun. 141 (14), 1-10 (2023).</li>
<li>Schutz, P. W., Cheung, S., Yi, L., Rossi, F. M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+activation+patterns+of+CD10%2B+fibro-adipogenic+progenitors+across+acquired+disease+states+in+human+skeletal+muscle+biopsies%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Cellular activation patterns of CD10+ fibro-adipogenic progenitors across acquired disease states in human skeletal muscle biopsies.</a> Free Neuropathol. 5, 3-3 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,5 M EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>15575&ndash ; 038</td><td></td></tr><tr><td>1,7 mL Microtubes à centrifuger</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>15&nbsp ; mL tube à centrifuger</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>1x Dulbecco' s Saline tamponnée au phosphate (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Seringue de 20 mL</td><td>BD</td><td>309661</td><td></td></tr><tr><td>4&prime ;,6-diamidino-2-phénylindole (DAPI)</td><td>Invitrogen</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>40&nbsp ; &mu ; Matrice</td> cellulaire <td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture tissulaire à fond plat 48 puits</td><td>Falcon</td><td>53078</td><td></td></tr><tr><td>5 mL en polypropylène</td><td>Falcon</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Tube à fond rond en polystyrène avec capuchon de passoire</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>seringue de 5 mL</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>50&nbsp ; mL tube centrifuge</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Boîte de Pétri</td><td>Falcon</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>96 puits Plaque de culture tissulaire à fond en V</td><td>Corning</td><td>3894</td><td></td></tr><tr><td>Acomys dimidiatus souris (souris épineuses)</td><td></td><td></td> <td>aimablement offerte par le Dr Ashley W. Seifert (Université du Kentucky).</td></tr><tr><td>Tampon de lyse au chlorure d’ammonium-potassium (ACK)</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>Anti-périlipine (1:100)</td><td>Sigma</td><td>P1873</td><td></td></tr><tr><td>Anti-SMA (1:100)</td><td>Invitrogen</td><td>14-9760-82</td><td></td></tr><tr><td>APC PDGFRa (1:800)</td><td>Abcam</td><td>ab270085</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide Needle 18 G</td><td>BD</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide Needle 23 g</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine</td><td>Sigma</td><td>A7906-100g</td><td></td></tr><tr><td>BV605 CD31 (1:500)</td><td>BD biosciences</td><td>744359</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-souris Alexa 555 (1:1000)</td><td>Invitrogen</td><td>A31570</td><td></td></tr><tr><td>Âne anti-lapin Alexa 647 (1:1000)</td><td>Invitrogen</td><td>A31573</td><td></td></tr><tr><td>Sérum d’âne</td><td>Sigma</td><td>S30-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Trieur FACS - MoFlo Astrios 5 lasers</td><td>Beckman soc</td><td>B52102</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>Gemini</td><td>100-500</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux fins</td><td>FST</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>FST</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>FST</td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>protéine recombinante de base FGF humaine (bFGF)</td><td>Gibco</td><td>13256029</td><td></td></tr><tr><td>Protéine recombinante humaine TGF bêta 1 (TGFb1)</td><td>eBiosciences</td><td>14-8348-62</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur - Heracell 160i CO2</td><td>ThermoFisher</td><td>51033557</td><td></td></tr><tr><td>Microscope inversé - Revolve</td><td>ECHO</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Liberase</td><td>Roche</td><td>5401127001</td><td></td></tr><tr><td>Souris MesenCult Adipogenic Differentiation 10x Supplement</td><td>STEMCELL</td><td>technologies 5507</td><td></td></tr><tr><td>Réactif bloquant souris sur souris (MOM)</td><td>Vector Laboratories</td><td>MKB-2213</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldéhyde</td><td>Sigma</td><td>P1648-500g</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140&ndash ; 122</td><td></td></tr><tr><td>PicoLab Mouse Diet 20</td><td>LabDiet</td><td>3005750-220</td><td></td></tr><tr><td>Iodure de propidium (PI)</td><td>Invitrogen</td><td>P3566</td><td></td></tr><tr><td>Flacon de transport Tube de 5mL</td><td>Caplugs Evergreen</td><td>222-3005-080</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement, expansion et différenciation des progéniteurs fibro-adipogènes à partir du modèle de souris épineuses

Fibro-Adipogenic Progenitor Isolation, Expansion, and Differentiation from the Spiny Mouse Model

Le schéma de ce protocole d’isolement et de culture des PAF musculaires squelettiques et cardiaques est résumé à la figure 1. Pour la collecte de tissus, le foie changeant de couleur du rouge foncé au jaune pâle est généralement indicatif d’une perfusion réussie. Avec les tranches d’âge spécifiées de la souris épineuse, le poids cardiaque est généralement d’environ 200 mg, tandis que le muscle quadriceps est d’environ 350 mg.
Lors de chaque changement de tampon de digestion aux étapes 3.5 à 3.7, le tampon de digestion dans les tubes de digestion apparaît opaque lorsque les cellules sont libérées du tissu. À la fin de la digestion, la solution doit être une bouillie relativement homogène avec quelques morceaux de tissu restants. Assurez-vous de terminer la digestion avant que tous les tissus ne soient complètement digérés pour éviter une digestion excessive, ce qui aura un impact négatif sur la viabilité des cellules et les résultats de la culture.
Les diagrammes d’écoulement attendus pour le FACS sont illustrés à la figure 2. Les FAP devraient représenter environ 2 % des cellules vivantes et des cellules LIN-. Le pourcentage d’événements PI+ est un indicateur de la qualité de la préparation de l’échantillon et doit être inférieur à 10 %. Dans cette étude, on obtient généralement 150 000 FAP par cœur (ventricules uniquement) et 100 000 FAP à partir de deux muscles quadriceps.
Une fois dans la plaque, les cellules se fixent généralement dans les 72 heures, atteignent une confluence de 80 % en 5 jours et présentent une morphologie typique des fibroblastes avec des projections (Figure 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig01.jpg"> Figure 1 : Représentation schématique du protocole et temps approximatif requis pour chaque étape. Prélèvement de tissus : 10 min par souris. Digestion des tissus : 1,5-2 h. Coloration cellulaire : 45 min-75 min. Tri cellulaire activé par fluorescence : 2 h. Expansion des progéniteurs fibro-adipogènes (PAF) : 4 jours. Différenciation des PAF : 48 h pour la différenciation fibrogène, 6 jours pour la différenciation adipogénique pour les PAF des muscles squelettiques et 14 jours pour les PAF cardiaques. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig02.jpg"> Figure 2 : Graphiques FACS représentatifs pour l’isolement des muscles squelettiques (en haut) et cardiaques (en bas) de la PAF. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig03.jpg"> Figure 3 : Différenciation de la FAP du muscle squelettique de souris épineuse. (A) Contrôle de la différenciation fibrogène. (B) Différenciation fibrogène. (C) Contrôle de la différenciation adipogénique. (D) Différenciation adipogénique. Perilipin (vert), SMA (magenta), DAPI (bleu), barre d’échelle = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig03large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig04.jpg"> Figure 4 : Différenciation cardiaque de la FAP chez la souris épineuse. (A) Contrôle de la différenciation fibrogène. (B) Différenciation fibrogène. (C) Contrôle de la différenciation adipogénique. (D) Différenciation adipogénique. Perilipin (vert), SMA (magenta), DAPI (bleu), barre d’échelle = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig04large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66717/66717fig05.jpg"> Figure 5 : Images en fond clair des PAF du muscle squelettique (A) et du cœur (B) de souris épineuses après 5 jours de culture, avant différenciation. Barre d’échelle = 360 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66717/66717fig05large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Contrôles</td>
			<td>CD31 SC</td>
			<td>PDGFRα SC</td>
			<td>CD31 FMO</td>
			<td>PDGFRα FMO</td>
			<td>Échantillon</td>
		</tr><tr><td>Anticorps CD31</td>
			<td>+</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
			<td>+</td>
		</tr><tr><td>Anticorps PDGFRα</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
			<td>+</td>
			<td>-</td>
			<td>+</td>
		</tr></tbody></table>Tableau 1 : Guide schématique pour la mise en place de cocktails de coloration d’anticorps pour les témoins et l’échantillon. SC = contrôle monocolore, FMO = fluorescence moins un contrôle, + = avec l’anticorps correspondant, - = sans l’anticorps correspondant.

Isolement, expansion et différenciation des progéniteurs fibro-adipogènes à partir du modèle de souris épineuses

Due to its exceptional repair program, the spiny mouse is an emerging research model for regenerative medicine. Fibro-adipogenic progenitors are ...

fibro-adipogenic-progenitor-isolation-expansion-differentiation-from

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JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

Nous rapportons ici une méthode pour l'isolement des populations de cellules progénitrices d'adipocytes (APC) à partir du tissu adipeux périvasculaire (PVAT) en utilisant le triage cellulaire activé par magnétisation (MCS). Cette méthode permet une augmentation de l'isolement de l'APC par gramme de tissu adipeux par rapport au tri de cellules activées par fluorescence (FACS).

Expansion et adipogénèse Induction de progéniteurs d&#39;adipocytes à partir de tissus adipeux périvasculaires isolés par tri magnétique de cellules activées

Ce protocole décrit l’approche technique permettant d’isoler des sous-populations de cellules stromales adipogènes et fibro-inflammatoires à partir de dépôts de tissu adipeux blanc (WAT) intra-abdominal murin par tri cellulaire activé par fluorescence ou séparation immunomagnétique des billes.

Isolement de sous-populations de cellules stromales adipogènes et fibro-inflammatoires à partir de dépôts adipeux intra-abdominaux murins

Nous présentons une méthode simple pour isoler les cellules progénitrices adipeuses hautement viables des tampons graisseux épididymaux de souris utilisant le tri cellulaire activé par fluorescence.

Préparation des cellules progénitrices adipeuses à partir de tissus adipeux épididymaux de souris

Ce rapport décrit un protocole pour l’isolement simultané des preadipocytes bruns et blancs primaires des souris nouveau-nées. Les cellules isolées peuvent être cultivées en culture et induites pour se différencier en adipocytes blancs et bruns complètement matures. La méthode permet la caractérisation génétique, moléculaire et fonctionnelle des cellules graisseuses primaires en culture.

Isolement et différenciation des préadipocytes primaires blancs et bruns de souris nouveau-nées

Ce protocole décrit l’isolement des préadipocytes de souris de la graisse sous-cutanée, leur différenciation en adipocytes matures et l’induction de la résistance à l’insuline. L’action de l’insuline est évaluée par la phosphorylation/activation des membres de la voie de signalisation de l’insuline par transfert Western. Cette méthode permet de déterminer directement la résistance/sensibilité à l’insuline dans les adipocytes primaires.

Adipocytes de souris différenciés en culture primaire: un modèle de résistance à l’insuline

L’identification précise des cellules progénitrices fibro-adipogènes (PAF) et des cellules souches musculaires (MuSC) est essentielle pour étudier leur fonction biologique dans des conditions physiologiques et pathologiques. Ce protocole fournit des lignes directrices pour l’isolement, la purification et la culture des PAF et des MuSC à partir de muscles de souris adultes.

FACS-isolement et culture de progéniteurs fibro-adipogènes et de cellules souches musculaires à partir de muscles squelettiques de souris non perturbés et blessés

Les préadipocytes sont isolés de la fraction vasculaire stromale du tissu adipeux brun interscapulaire de souris nouveau-nées et différenciés en cellules qui accumulent des gouttelettes lipidiques, expriment des marqueurs moléculaires et montrent la morphologie mitochondriale des adipocytes bruns matures. Ces cellules sont analysées par immunofluorescence et microscopie électronique à transmission.

Différenciation et imagerie des adipocytes bruns de la fraction vasculaire stromale du tissu adipeux interscapulaire de souris nouveau-nées

Ce protocole décrit l’isolement semi-automatisé de la fraction vasculaire stromale (SVF) du tissu adipeux murin pour obtenir des préadipocytes et obtenir une différenciation adipocytaire in vitro. L’utilisation d’un dissociateur tissulaire pour la digestion de la collagénase réduit la variation expérimentale et augmente la reproductibilité.

Isolement semi-automatisé de la fraction vasculaire stromale à partir de tissu adipeux blanc murin à l’aide d’un dissociateur tissulaire

Ici, nous décrivons l’isolement, la culture et l’induction adipogénique de préadipocytes dérivés de la fraction vasculaire stromale à partir de tissu adipeux périaortique de souris, permettant l’étude de la fonction du tissu adipeux périvasculaire et de sa relation avec les cellules vasculaires.

Isolement, culture et induction adipogénique de préadipocytes dérivés de la fraction vasculaire stromale à partir de tissu adipeux périaortique de souris

La taille et la fragilité des adipocytes matures ont limité les techniques et les outils disponibles pour leur étude et leur isolement. Ici, un protocole est décrit pour l’isolement des adipocytes murins matures, qui peuvent être facilement adaptés à différents dépôts adipeux et régimes alimentaires de souris.

Isolement et culture d’adipocytes murins primaires à partir de souris maigres et obèses

Découvrez l'isolement des progéniteurs fibro-adipogènes par dissociation enzymatique et tri FACS chez la souris épineuse. Cette méthode permet d'étudier la régénération tissulaire et la médecine régénérative.

Isolement, expansion et différenciation des progéniteurs fibro-adipogènes à partir du modèle de souris épineuses

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