Isolement et cryoconservation de cellules mononucléées du sang périphérique humain hautement viables à partir de sang total : un guide pour les débutants

Dans ce protocole, nous visons à fournir un tutoriel étape par étape facile à suivre sur la façon de collecter et de stocker du sang périphérique à haute viabilité et des cellules mononucléaires, ou PBMC, à partir de sang total. Les PBMC comprennent les lymphocytes, les cellules dendritiques et les monocytes. Les PBMC en vrac peuvent être traités pour isoler des types de cellules individuels et sont couramment utilisés dans une grande variété d’expériences et de tests, y compris le séquençage de l’ARN et la cytométrie en flux.

En plus des PBMC, nous montrons également comment collecter du plasma EDTA et une couche leucocytaire entière. Avant de commencer ce protocole, veuillez préparer les matériaux et les réactifs énumérés dans le tableau 2. Notez que ce protocole est conçu pour la collecte de PBMC à partir de six tubes de centrifugation à gradient de densité, chacun produisant environ 12 millions de cellules.