Name: Modélisation avancée de l’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par l’association de l’élastase topique et du ß-aminopropionitrile oral (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-26T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Découvrez la modélisation de l'anévrisme de l'aorte abdominale chez la souris par élastase topique et BAPN oral. Cette méthode reproduit fidèlement les caractéristiques humaines pour étudier la croissance et le risque de rupture.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Cette recherche a été soutenue par le National Heart Lung and Blood Institute (NHLBI) des National Institutes of Health (NIH) sous 1R01HL149404-01A1 (BL), et le Ruth L. Kirschstein National Research Service Award T32 HL 007936 au Centre de recherche cardiovasculaire (JB) de l’Université du Wisconsin-Madison. Les figures ont été créées ou modifiées avec Biorender.com. L’analyse statistique a été réalisée à l’aide du logiciel GraphPad Prism 10.

Évaluation du développement d’un anévrisme de l’aorte chez la souris après un traitement à l’élastase

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+practice.+Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Clinical practice. Abdominal aortic aneurysms.</a> New Engl J Med. 371 (22), 2101-2208 (2014).</li>
<li>Wanhainen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((European+Society+for+Vascular+Surgery+Guidelines+on+the+management+of+aorto-iliac+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Vasc+Endocasc+Surg%22%5BJournal%5D)">European Society for Vascular Surgery Guidelines on the management of aorto-iliac abdominal aortic aneurysms.</a> Eur J Vasc Endocasc Surg. 57 (1), 8-93 (2019).</li>
<li>Shimizu, K., Mitchell, R. N., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+cellular+immune+responses+in+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammation and cellular immune responses in abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 26 (5), 987-994 (2006).</li>
<li>Shen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aortic+aneurysms+and+dissections+series%5BTitle%5D)+AND+%22ArteriosclerThromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Aortic aneurysms and dissections series.</a> ArteriosclerThromb Vasc Biol. 40 (3), e37-e46 (2020).</li>
<li>Stanley, J. C., Veith, F., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+Therapy+in+Vascular+and+Endovascular+Surgery+E-Book%5BTitle%5D)+AND+%22Elsevier+Health+Sciences%22%5BJournal%5D)">Current Therapy in Vascular and Endovascular Surgery E-Book.</a> Elsevier Health Sciences. , (2014).</li>
<li>Morgan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+novel+mechanisms+of+abdominal+aortic+aneurysm+via+unbiased+proteomics+and+systems+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Identifying novel mechanisms of abdominal aortic aneurysm via unbiased proteomics and systems biology.</a> Front Cardiovasc Med. 9, 889994(2022).</li>
<li>Yin, L., Kent, E. W., Wang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+murine+models+of+ruptured+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Progress in murine models of ruptured abdominal aortic aneurysm.</a> Front Cardiovasc Med. 9, 950018(2022).</li>
<li>Lu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+chronic+advanced+stage+abdominal+aortic+aneurysm+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">A novel chronic advanced stage abdominal aortic aneurysm murine model.</a> J Vasc Surg. 66 (1), 232-242 (2017).</li>
<li>Berman, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+aortic+aneurysm+severity+and+growth+depend+on+topical+elastase+concentration+and+lysyl+oxidase+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Experimental aortic aneurysm severity and growth depend on topical elastase concentration and lysyl oxidase inhibition.</a> Sci Rep. 12 (1), 99(2022).</li>
<li>Deaths, percent of total deaths, and death rates for the 15 leading causes of death in 5-year age groups, by race, and sex. Centers for Disease Control and Prevention. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/nchs/nvss/mortality/lcwk1.htm">https://www.cdc.gov/nchs/nvss/mortality/lcwk1.htm</a> (2015).</li>
<li>Dansey, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+endovascular+and+open+repair+for+abdominal+aortic+aneurysms+in+the+United+States+from+2004+to+2015+and+implications+for+screening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of endovascular and open repair for abdominal aortic aneurysms in the United States from 2004 to 2015 and implications for screening.</a> J Vasc Surg. 74 (2), 414-424 (2021).</li>
<li>Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24 (3), 429-434 (2004).</li>
<li>Busch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+mouse+models+of+abdominal+aortic+aneurysm+to+the+translational+needs+of+vascular+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22JVS+Vasc+Sci%22%5BJournal%5D)">Translating mouse models of abdominal aortic aneurysm to the translational needs of vascular surgery.</a> JVS Vasc Sci. 2, 219-234 (2021).</li>
<li>Anidjar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastase-induced+experimental+aneurysms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Elastase-induced experimental aneurysms in rats.</a> Circulation. 82 (3), 973-981 (1990).</li>
<li>Bhamidipati, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+murine+model+of+aortic+aneurysms+using+peri-adventitial+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Development of a novel murine model of aortic aneurysms using peri-adventitial elastase.</a> Surgery. 152 (2), 238-246 (2012).</li>
<li>Xue, C., Zhao, G., Zhao, Y., Chen, Y. E., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+abdominal+aortic+aneurysm+model+induced+by+perivascular+application+of+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse abdominal aortic aneurysm model induced by perivascular application of elastase.</a> J Vis Exp. (180), e63608(2022).</li>
</ol>

Les auteurs de ce manuscrit n’ont aucun conflit d’intérêts à déclarer.

La compréhension de la physiopathologie complexe de l’AAA est essentielle pour améliorer la prise en charge de l’anévrisme de l’aorte. Bien que de nouvelles stratégies soient activement développées pour améliorer les résultats chirurgicaux, les AAA restent répandus dans notre société vieillissante et la rupture d’anévrisme reste l’une des principales causes de décès aux États-Unis10. Par conséquent, les besoins non satisfaits en matière de détection, de prévention et de traitement de l’AAA justifient la poursuite de la recherche fondamentale sur les anévrismes11.
Des modèles animaux qui récapitulent avec précision et efficacité les caractéristiques et les comportements des AAA humains sont essentiels pour les études mécanistes de la physiopathologie des anévrismes et l’identification de cibles thérapeutiques potentielles. Bien que les modèles animaux actuels puissent imiter les principaux aspects des changements anévrismaux qui se produisent dans les maladies humaines, aucun modèle ne représente pleinement la véritable complexité des AAA humains. Actuellement, les souris sont l’espèce la plus largement acceptée pour la modélisation de l’AAA animale. Les chercheurs devraient tenir compte des diverses forces et faiblesses de chaque modèle murin pour leur étude particulière sur l’anévrisme, telles que celles décrites par Daugherty et al. et Busch et al.12,13.
L’utilisation de l’élastase pour induire l’AAA chez les rongeurs a été décrite pour la première fois par Anidjar et al. en 199014. La perfusion de l’aorte avec de l’élastase pancréatique porcine à l’aide d’un pousse-seringue crée une dilatation initiale d’environ 50 % à 70 %, et les segments dilatés présentent favorablement des caractéristiques pathologiques similaires aux AAA humains, telles que la dégénérescence médiale et l’inflammation adventice. Le modèle de perfusion classique, cependant, est sans doute le modèle d’anévrisme le plus difficile sur le plan technique, et les anévrismes qui se forment généralement à la deuxième semaine commencent à se résorber progressivement par la suite. Bhamidipati et al. en 2012 ont ensuite démontré que l’application adventice d’élastase pouvait également induire avec succès des anévrismes similaires qui sont plus reproductibles en taille15. Un modèle beaucoup moins difficile, le modèle topique de l’élastase a été largement adopté dans la recherche sur les anévrismes. La méthodologie supplémentaire et les avantages du modèle topique de l’élastase sont discutés dans l’article sur les méthodes de Xue et ses collègues16.
Le modèle élastase/BAPN de l’AAA murin a été développé par Lu et ses collègues en 20178. L’introduction de 0,2 % d’eau potable BAPN a amélioré de nombreuses critiques du modèle classique de l’élastase topique, produisant maintenant des anévrismes qui s’étendent continuellement jusqu’au point de rupture de l’AAA. Dans leur étude de 2017, ils ont démontré que les souris du groupe traité par élastase/BAPN présentaient des taux de formation d’AAA significativement plus élevés que le groupe élastase (93% contre 65%, P < 0,01), qui étaient également des AAA à un stade plus avancé. Sur une période d’étude de 100 jours, les AAA dans le groupe élastase/BAPN ont continué à se dilater jusqu’à >800 % du diamètre de base et ont formé un thrombus intraluminal (53,8 %), et 46,2 % se sont rompus spontanément avant la fin de l’expérience. Ce modèle a permis aux chercheurs d’étudier les facteurs qui peuvent avoir un impact sur la progression et la stabilité de l’anévrisme au fil du temps.
Berman et al. ont exploré plus en détail le modèle élastase/BAPN en faisant varier la concentration d’élastase topique, la durée de l’étude, le moment de l’administration du BAPN et l’impact du sexe animal9. Le traitement avec 5 μL d’élastase plus concentrée (5 mg/mL ou 10 mg/mL) a produit des anévrismes plus gros que 2,5 mg/mL sur 56 jours. La prévalence de la formation de thrombus intraluminaux dépendait également de la concentration d’élastase, qui s’est produite chez 28,6 % des souris traitées à 5 mg/mL et chez 62,5 % des souris traitées à 10 mg/mL. Ils ont également démontré que le modèle élastase/BAPN pouvait induire des anévrismes chez les souris femelles. Bien que seules quelques souris femelles aient été étudiées (n = 5), ils ont constaté que les anévrismes chez les femelles étaient plus sujets à la rupture (2 souris sur 5) et étaient significativement plus gros que les AAA mâles à 56 jours.
Dans cet article, nous visons à fournir une méthode pour aborder l’une des plus grandes limites de la modélisation chirurgicale, à savoir la variation de la procédure chirurgicale. En l’absence d’un consensus clair sur le degré de dissection et la zone de l’aorte traitée à l’élastase, les résultats de ce modèle pourraient varier considérablement entre les animaux, les chercheurs et les institutions. Nous avons observé de nombreuses variations anatomiques entre les souris, y compris le nombre et la taille des artères et des veines lombaires, et l’emplacement de l’IMA, le décollage de la veine gonadique gauche, entre autres, qui peuvent être limitatives lorsque l’on tente de traiter seulement une partie ou un segment spécifique de l’aorte infrarénale. Ici, nous démontrons que la dissection circonférentielle de toute la longueur de l’aorte infrarénale, de l’artère rénale gauche en proximal à la bifurcation aortique distale, permet de fournir des degrés reproductibles d’exposition aortique malgré les différences anatomiques, tout en augmentant le succès de l’induction de l’anévrisme et en fournissant des limites claires à l’opérateur. De plus, la taille et la position plus antérieure de la VCI ont tendance à couvrir la majorité de l’aorte, ce qui peut affecter la quantité d’aorte traitée si elle n’est pas isolée de la VC. Bien qu’il soit nécessaire d’enlever le fascia rétropéritonéal pour exposer l’aorte, il est important de ne pas disséquer complètement le tissu conjonctif de l’adventice de l’aorte et d’exposer l’une des couches médiales, car cela entraîne généralement une rupture pendant la période d’incubation de 5 minutes de l’élastase. Cela pourrait servir de contrôle interne supplémentaire au degré de dissection avec ce modèle, mais peut être une courbe d’apprentissage frustrante lors de l’adoption de ce modèle. Les opérateurs apprendront également les zones à haut risque (figure 4) qui peuvent être facilement blessées pendant l’opération et entraîner une hémorragie incontrôlable.
Bien qu’il soit important que les étapes procédurales de ce modèle soient cohérentes, la durée de l’étude et le moment de l’échographie d’intervalle peuvent varier en fonction de l’objectif de la recherche. La dilatation de l’aorte commence immédiatement avec l’application d’élastase, mais les études utilisant ce modèle suivent généralement des souris pendant 28 jours après la chirurgie7, comme dans cet exemple d’expérience. La prolongation de la durée de l’étude doit être envisagée lors de l’étude des AAA avancés, de la croissance à long terme, de la formation de thrombus intraluminaux ou de la rupture.
Des mesures périopératoires supplémentaires, telles que le maintien de la température corporelle et de l’état d’hydratation de l’animal, peuvent aider à améliorer la survie des animaux à cette procédure invasive. L’utilisation d’un coussin chauffant pendant la chirurgie et le placement dans une cage de récupération chaude peuvent aider à éviter l’hypothermie. Une solution saline doit être réchauffée avant d’être utilisée pour irriguer la cavité abdominale. Un bolus de liquide sous-cutané directement après la chirurgie peut expliquer les pertes de liquide insensibles pendant l’opération et aider l’animal à maintenir une hydratation adéquate pendant la phase de récupération immédiate. Avec une manipulation minutieuse des tissus et une approche méthodique cohérente, le modèle élastase/BAPN peut être réalisé par un opérateur expérimenté entre 30 et 45 minutes par souris et produire de manière fiable une AAA avec de très faibles complications périopératoires.
Nos résultats démontrent que l’association de BAPN en plus de la dissection circonférentielle de l’aorte infrarénale avant l’application d’élastase produit de grands AAA en expansion continue, avec des diamètres plus grands et une incidence de rupture à des périodes plus courtes. Dans cette expérience, les AAA ont été induits avec succès chez toutes les souris mâles (6 sur 6) et femelles (6 sur 6) traitées avec de l’élastase active. L’exposition à l’élastase pendant 5 minutes a entraîné une augmentation immédiate du diamètre de l’aorte d’environ 30 à 40 %, ce qui est utile pour confirmer l’application réussie et cohérente de l’élastase dans les groupes de traitement. À l’instar de Berman et al., nous avons montré que ce modèle peut induire des AAA chez les souris femelles, qui ont également une réponse de rupture plus importante que les mâles. La moitié des souris femelles (3 sur 6) ont rompu dans les 28 jours, contre 0 sur 6 des mâles, cependant, les souris femelles pèsent moins que les mâles. Les souris mâles ont montré une augmentation du diamètre de l’AAA de 257 % contre -4 % des témoins mâles, tandis que les femelles survivantes ont montré une augmentation du diamètre de 417 %, contre -16 % des témoins femelles. Les diamètres aortiques n’étaient pas significativement différents entre les souris mâles et femelles survivantes traitées à 28 jours en raison du nombre plus élevé de ruptures dans le groupe femelle. Nous supposons que les souris factices présentent des diamètres aortiques plus petits à la fin de l’étude, car l’aorte a tendance à se dilater légèrement lors de la dissection initiale, puis à former du tissu cicatriciel à 28 jours.
Le modèle élastase/BAPN présente certaines limites. La dissection circonférentielle de l’aorte nécessite des compétences chirurgicales fines, mais contribue à améliorer la reproductibilité et le degré d’induction de l’anévrisme. Semblable au modèle de l’élastase topique, il existe également un effet de lot dans l’activité de l’enzyme élastase, ce qui, comme mentionné précédemment, est donc important d’utiliser la même bouteille d’élastase pour tous les animaux dans une expérience donnée. Bien que l’incidence du thrombus intraluminal AAA et de la rupture augmente avec le temps et la gravité de l’anévrisme, celles-ci ne sont ni garanties ni entièrement prévisibles dans ce modèle.
En résumé, le modèle élastase/BAPN produit de grands AAA infrarénaux véritables chez les souris mâles et femelles, qui se dilatent progressivement au fil du temps, forment un thrombus intraluminal et sont capables de se rompre. Ces points forts de ce modèle murin aident à mieux récapituler certains des comportements et caractéristiques des anévrismes chez l’homme. Bien que techniquement difficile, une dissection minutieuse et approfondie de l’aorte peut augmenter la réponse anévrysmale. Actuellement, la méthode élastase/BAPN est un modèle avancé pour l’étude des anévrismes de l’aorte abdominale infrarénale.

Un anévrisme est défini comme une dilatation pathologique d’un vaisseau sanguin supérieure à 50 %du diamètre 1 du vaisseau sain. Bien que les anévrismes de l’aorte abdominale (AAA) soient une affection fréquemment rencontrée dans la population vieillissante, avec une incidence d’environ >5 % des hommes > 65 ans, il n’existe pas de stratégies thérapeutiques dirigées pour traiter l’AAA1. La prise en charge actuelle de l’AAA se limite à la réduction des facteurs de risque et à la réparation chirurgicale par chirurgie ouverte ou endovasculaire basée sur le diamètre de l’aorte ou le taux de croissance2. Le plus grand danger de l’AAA est la rupture de l’anévrisme, qui est mortelle si elle n’est pas traitée, et la réparation dans ce contexte d’urgence peut entraîner des risques de mortalité supérieurs à 90 %1.
La physiopathologie de l’AAA est compliquée, multifactorielle et mal comprise3. Les caractéristiques de l’AAA humain comprennent une véritable dilatation anévrismale de la paroi aortique avec une infiltration de cellules inflammatoires, la présence de thrombus intraluminaux et une dilatation progressive qui conduit à une rupture éventuelle 3,4. De plus, les AAA sont associés à un âge avancé, ont une prédominance sexuelle masculine/féminine de 9:1 et se produisent le plus souvent dans l’aorte infrarénale5. Modéliser toutes les caractéristiques et tous les comportements des AAA humains chez les animaux reste un défi permanent6.
La modélisation actuelle de l’AAA est principalement réalisée chez la souris, et les anévrismes sont généralement induits à l’aide de l’une des trois méthodes suivantes : par perfusion d’angiotensine II (AngII) via une pompe osmotique implantée par voie sous-cutanée, et par application directe de chlorure de calcium (CaCl2) ou d’élastase sur l’aorte7. Dans cette dernière méthode, l’élastase pancréatique porcine (EPI) est appliquée sur un segment de l’aorte infrarénale et provoque la dégradation enzymatique des fibres d’élastine dans la lamelle élastique de la tunique média. Ces dommages structurels entraînent l’affaiblissement de la paroi aortique et la dilatation anévrismale vers l’extérieur. Cependant, l’utilisation de l’élastase topique seule produit des anévrismes infrarénaux relativement petits, qui ne s’élargissent pas progressivement ou ne se rompent pas au fil du temps. Plus récemment, Lu et al. ont amélioré ce modèle en administrant en plus du β-aminopropionitrile (BAPN), un inhibiteur irréversible de la lysyl oxydase, à leurs souris traitées à l’élastase8. En empêchant la réticulation des fibres d’élastine et de collagène, la supplémentation en BAPN provoque la dilatation progressive des aortes endommagées par l’élastase jusqu’au point de rupture. Le modèle élastase/BAPN a en outre un taux d’incidence d’AAA plus élevé que le modèle élastase topique, et les anévrismes produits sont également plus grands et contiennent un thrombus intraluminal8.
Dans le modèle élastase/BAPN, le degré de dissection chirurgicale et l’exposition de l’aorte à l’élastase peuvent avoir un impact sur le succès et la reproductibilité de ce modèle. Dans ce manuscrit, nous décrivons que l’administration concomitante d’eau potable BAPN et l’application topique d’élastase sur l’aorte après l’isolement circonférentiel de l’ensemble du segment aortique infrarénal améliorent la reproductibilité, tiennent compte des différences anatomiques entre les animaux et entraînent une augmentation du taux d’induction de l’AAA, de la taille des anévrismes et de l’incidence des ruptures. Dans cet article, nous décrirons une approche standardisée pour induire de manière fiable des anévrismes avancés de l’aorte abdominale chez la souris en utilisant une combinaison d’eau topique supplémentée en élastase et en BAPN.

<table><tbody><tr><td>Chambre d’induction de 0,5 L</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO-0530XXS Chambre d’induction d’anesthésie</td><td></td></tr><tr><td>injectée de chlorure de sodium à 0,9 %, USP, 20 mL</td><td>Hospira</td><td>NDC 0409-4888-03</td><td>seringue de solution saline normale</td></tr><tr><td>de 3 mL Luer-Lok Tip avec aiguille BD PrecisionGlide 22 G x 3/4</td><td>Seringue</td><td>de 309569 BD REF</td><td>, aiguille de 22 G</td></tr><tr><td>fumarate d’aminopropionitrile</td><td>TCI</td><td>A0796</td><td>BAPN</td></tr><tr><td>3-Aminopropionitrile Sel de fumarate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3134-25G</td><td>BAPN</td></tr><tr><td>Éponges de gaze Avant Delux, 2 » x 2 » 4 plis</td><td>Medline</td><td>NON26224</td><td>éponges de gaze</td></tr><tr><td>Tondeuse chauve Whal</td><td>Clipper Corporation</td><td>8110</td><td>tondeuses</td></tr><tr><td>à cheveux gommage chirurgical à la bétadine (povidone iodée, 7,5 %)</td><td>Avrio</td><td>NCD 67618-154-16</td><td>bétadine pince</td></tr><tr><td>émoussée</td> chirurgicale <td>ROBOZ</td><td>RS-5130</td><td>pince émoussée</td></tr><tr><td>Buprénorphine ER-lab</td><td>ZooPharm</td><td>BERLAB0.5</td><td>buprénorphine</td></tr><tr><td>carprofène</td><td>Norbrook</td><td>NDC 55529-131-11</td><td>carprofène</td></tr><tr><td>CASTROVIEJO 5.75 » droit avec serrure</td><td>ROBOZ</td><td>RS-6412</td><td>Castroviejo tournevis</td></tr><tr><td>applicateur en bois à pointe de coton, 6 »</td><td>Dynarex</td><td>n° 4302</td><td>applicateurs en bois à pointe de coton</td></tr><tr><td>DESMARRES 5.5' rectractor&nbsp ;</td><td>ROBOZ</td><td>RS-6672</td><td>rectracteur de peau&nbsp ;</td></tr><tr><td>pied à coulisse numérique, 0-150 mm</td><td>World Precision Instruments</td><td>501601</td><td>pied à coulisse numérique</td></tr><tr><td>DPBS (1x)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>DPBS</td></tr><tr><td>Élastase à partir du pancréase porcin Type I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1250-10MG</td><td>élastase >4,0 unités/mg de protéines</td></tr><tr><td>Éthanol 200 proof</td><td>Decon Labs, Inc</td><td>2701</td><td>éthanol dilué à 70 %</td></tr> <tr><td>lubrifiant pour les yeux</td><td>Optixcare</td><td>14716</td><td>lubrification oculaire</td></tr><tr><td>Germinator 500 stérilisateur sec</td><td>CellPoint Scientific, Inc</td><td>5-1450</td><td>stérilisateur à billes sèches</td></tr><tr><td>tapis de thérapie par la chaleur</td><td>Adroit Medical Systems</td><td>V016</td><td>tapis de thérapie par</td></tr><tr><td>la chaleur pompe de thérapie thermique</td><td>Adroit Medical Systems</td><td>HTP-1500</td><td>pompe de thérapie par la chaleur</td></tr><tr><td>isoflurane, USP</td><td>Akorn Santé animale</td><td>NCD 59399-106-01</td><td>isoflurane</td></tr><tr><td>Pipette L-10</td><td>Rainin</td><td>LTS 0,5-10 uL</td><td>pipette</td></tr><tr><td>Masque d’anesthésie à profil bas, petit</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SOMNO-0801</td><td>cône d’anesthésie cône de nez</td></tr><tr><td>micro dissecteur ciseaux</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5619</td><td>microscope à ciseaux micro dissecteur</td></tr><tr><td></td><td>Leica</td><td>S9i</td><td>microscope</td></tr><tr><td>Nii-LED illuminateur LED haute intensitéLumière extérieure</td> LED<td>Nikon Instruments, Inc</td><td>83359 NII-LED</td><td>dissection externe légère</td></tr><tr><td>nylon 5-0 monofilament, suture non résorbable noire</td><td>Oasis</td><td>MV-661-V</td><td>5-0 suture nylon</td></tr><tr><td>polyisoprène gants chirurgicaux, GAMMEX non-Latex PI Micro, taille 7,5</td><td>Ansell</td><td>20685975</td><td>gants chirurgicaux sans latex</td></tr><tr><td>Reflex 7 mm pinces pour plaie en acier inoxydable</td><td>CellPoint Scientific, Inc</td><td>203-1000</td><td>plaie clips</td></tr><tr><td>échelle</td><td>Ohaus</td><td>Compass CR2200</td><td>échelle</td></tr><tr><td>SomnofFlo Kit d’accessoires</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>10-8000-71</td><td>tube pour vaporisateur électronique&nbsp ;</td></tr><tr><td>Vaporisateur électronique SomnoFlo</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SF2992</td><td>vaporisateur électronique à faible débit</td></tr><tr><td>SomnoPath Flow Diverter</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SP1016</td><td>déviateur de flux pour vaporisateur électronique</td></tr><tr><td>SS/45 pince pointue ROBOZ</td><td></td><td>RS-4941</td><td>pince pointue</td></tr><tr><td>ciseaux chirurgicaux</td><td>ROBOZ</td><td>RS-6010SC</td><td>ciseaux</td></tr> <tr><td>chirurgicauxpince à cuve</td><td>Dumont</td><td>VES 0.35</td><td>pince à cuve</td></tr></tbody></table>

modélisation avancée de l’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par l’association de l’élastase topique et du ß-aminopropionitrile oral

Advanced Abdominal Aortic Aneurysm Modeling in Mice by Combination of Topical Elastase and Oral &#223;-aminopropionitrile

Le modèle murin topique d’élastase abdominale (AAA) est amélioré lorsqu’il est combiné avec de l’eau potable supplémentée en ß-aminopropionitrile (BAPN) pour produire de manière fiable de véritables anévrismes infrarénaux avec des comportements qui imitent les AAA humains. L’application topique d’élastase sur l’adventice de l’aorte infrarénale provoque des dommages structurels aux couches élastiques de la paroi aortique et initie la dilatation anévrismale. L’administration concomitante de BAPN, un inhibiteur de la lysyl oxydase, favorise la dégénérescence soutenue de la paroi en réduisant la réticulation du collagène et de l’élastine. Cette combinaison se traduit par de grands AAA qui se dilatent progressivement, forment un thrombus intraluminal et sont capables de se rompre. Des techniques chirurgicales raffinées, telles que l’isolement circonférentiel de l’ensemble du segment aortique infrarénal, peuvent aider à normaliser la procédure pour une application cohérente et approfondie de l’élastase pancréatique porcine malgré les différents opérateurs et les variations anatomiques entre les souris. Par conséquent, le modèle élastase/BAPN est une approche raffinée pour induire chirurgicalement l’AAA chez la souris, ce qui pourrait mieux récapituler les anévrismes humains et offrir des opportunités supplémentaires pour étudier la croissance et le risque de rupture de l’anévrisme.

Des souris C57BL/6J mâles et femelles âgées de 22 à 24 semaines ont été utilisées dans cette étude. Les aortes infrarénales ont été traitées avec 5 μL d’enzyme élastase (6,9 mg de protéines/mL, 6 unités/mg de protéines) ou de l’élastase dénaturée pendant 5 min. Les souris mâles traitées à l’élastase ont montré une augmentation de 43,4 % du diamètre de l’aorte après 5 minutes d’exposition à l’élastase par rapport aux diamètres aortiques de base non traités, tandis que les aortes féminines traitées ont augmenté de 33,6 % (P = 0,0342). Les diamètres aortiques des couvre-oreillers n’ont montré aucun changement après 5 minutes d’exposition à l’élastase dénaturée (mâles 0,5 % ; femelles -2,8 %). Il n’y a eu aucun décès lié à la chirurgie parmi les 12 souris traitées et les 6 souris fictives. Les données de l’étude de 28 jours sont présentées dans le tableau 1. Parmi les souris femelles traitées, 3 sur 6 sont mortes d’une rupture de l’AAA ; un au 20e jour postopératoire et deux au 25e jour (Figure 6). Il n’y a pas eu de ruptures de l’AAA chez les mâles traités. Les AAA (définis comme une augmentation de &gt;50 % du diamètre de base de l’aorte ou la mort par rupture de l’AAA) ont été induits avec succès chez toutes les souris traitées (12 sur 12). À 28 jours, le diamètre moyen de l’AAA des mâles traités était de 2,86 ± 0,31 mm, avec une variation moyenne en pourcentage de 257 ± 54 %, tandis que le diamètre de l’AAA des souris femelles traitées survivantes était de 3,60 ± 1,87 mm, avec une variation moyenne en pourcentage de 417 ± 286 % (figure 7). Les souris factices, qui n’ont montré aucun changement dans les diamètres aortiques.
<img alt="Graphique de probabilité de survie et résultats de dissection ; le cœur et l’aorte montrés dans l’étude de l’anatomie de la souris." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66812/66812fig06.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> Figure 6 : Survie de souris B6 mâles et femelles au cours d’un modèle élastase/BAPN de AAA pendant 28 jours. (A) Une rupture de l’AAA s’est produite chez 3 des 6 souris femelles traitées (une souris à 20 jours, puis deux souris à 25 jours) alors qu’il n’y a eu aucune rupture chez les 6 souris mâles traitées à 28 jours. (B) Images représentatives à l’autopsie d’une souris femelle morte d’une rupture de l’AAA. La rupture de l’AAA se manifeste par un gros hématome rétropéritonéal (à gauche) et la présence d’un AAA infrarénal avec une anomalie de la paroi (à droite). Abréviations : BAPN = ß-aminopropionitrile ; AAA = anévrisme de l’aorte abdominale. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66812/66812fig06large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Diamètre aortique maximal chez les souris SHAM par rapport aux souris traitées à l’ELASTASE/BAPN ; Comparaison d’un graphique à barres et d’un échantillon aortique." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66812/66812fig07.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> Figure 7 : Diamètres aortiques maximaux des souris élastase/BAPN et B6 mâles et femelles fictives à 28 jours. (A) Les souris traitées présentent des diamètres infrarénaux significativement plus grands à 28 jours par rapport aux souris placebos. (B) La combinaison de l’élastase et de la BAPN produit avec succès de grandes AAA infrarénales chez les souris B6 mâles et femelles. Abréviations : BAPN = ß-aminopropionitrile ; AAA = anévrisme de l’aorte abdominale. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66812/66812fig07large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="3"></td>
			<td>86 Sham masculin</td>
			<td>86 femme Sham</td>
			<td>86 mâle Elastase/8APN</td>
			<td>86 femelle Elastase/8APN</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Nombre de souris</td>
			<td>3</td>
			<td>3</td>
			<td>6</td>
			<td>6</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Âge (semaines)</td>
			<td>22,3 ± 0,0</td>
			<td>22,7 ± 0,7</td>
			<td>23,1 ± 0,2</td>
			<td>23,2 ± 0,2</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Poids (g ; à la chirurgie)</td>
			<td>36,3 ± 2,5</td>
			<td>23,7 ± 1,2</td>
			<td>32,8 ± 1,7*</td>
			<td>23,7 ± 0,8</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Diamètre aortique de prétraitement (mm)</td>
			<td>0,89 ± 0,02</td>
			<td>0,75 ± 0,04</td>
			<td>0,81 ± 0,07</td>
			<td>0,73 ± 0,09</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Diamètre de l’aorte post-traitement (mm)</td>
			<td>0,90 ± 0,03</td>
			<td>0,73 ± 0,01</td>
			<td>1,15 ± 0,03**</td>
			<td>0,98 ± 0,12**</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Variation en pourcentage après 5 min de traitement (%)</td>
			<td>0,5 ± 4,4</td>
			<td>-2,8 ± 5,3</td>
			<td>43,4 ± 10,2***</td>
			<td>33,6 ± 4,5***</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Incidence de l’AAA (%)</td>
			<td>0 / 3</td>
			<td>0 / 3</td>
			<td>6 / 6</td>
			<td>6 / 6</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Ruptures de l’AAA de 28 jours</td>
			<td>0 / 3</td>
			<td>0 / 3</td>
			<td>0 / 6</td>
			<td>3 / 6</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Survie jusqu’à 28 jours</td>
			<td>3 / 3</td>
			<td>3 / 3</td>
			<td>6 / 6</td>
			<td>3 / 6</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Diamètre maximal de l’aorte à 28 jours (mm)</td>
			<td>0,85 ± 0,01</td>
			<td>0,64 ± 0,01</td>
			<td>2,86 ± 0,31*</td>
			<td>3,60 ± 1,87**</td>
		</tr><tr><td colspan="3">Pourcentage de variation du diamètre de l’aorte à 28 jours (%)</td>
			<td>-4 ± 2</td>
			<td>-16 ± 2</td>
			<td>257 ± 54*</td>
			<td>417 ± 286**</td>
		</tr></tbody></table>Tableau 1 : Résultats d’un modèle à 28 jours du modèle murin d’AAA élastase/BAPN. Les données sont moyennes ± écart-type. *P&lt;0,05, **P&lt;0,005, ***P&lt;0,0001 par rapport au simulacre du même sexe via le test de Fischer ANOVA à un facteur. Abréviations : BAPN = ß-aminopropionitrile ; AAA = anévrisme de l’aorte abdominale.

Ce protocole décrit une approche chirurgicale méthodique pour modéliser les anévrismes avancés de l’aorte abdominale chez la souris en combinant l’application directe d’élastase sur l’aorte infrarénale et l’administration de ß-aminopropionitrile dans l’eau de boisson.

Modélisation avancée de l’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par l’association de l’élastase topique et du ß-aminopropionitrile oral

The topical elastase murine model of abdominal aortic aneurysm (AAA) is enhanced when combined with &#223;-aminopropionitrile (BAPN)-supplemented drinking ...

advanced-abdominal-aortic-aneurysm-modeling-mice-combination-topical

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Cette vidéo montre comment provoquer un anévrisme aortique abdominal (AAA) chez des souris par perfusion intraluminale transitoires de l'élastase pancréatique porcine dans le segment sous-rénal de l'aorte abdominale. Le modèle a la possibilité d'ajouter bon aperçu du pathobiologie de AAA en raison de l'émergence des cultures transgéniques et des souris knockout de nombreux gènes.

Création d&#39;expérimental murin anévrismes aortiques abdominaux avec l&#39;élastase

Nous décrivons un protocole chirurgical pour induire uniformément les aneurysms aortiques thoraciques descendants robustes chez les souris. La procédure implique la thoracotomie gauche, l'exposition à l'aorte thoracique, et le placement d'une éponge imbibée d'élastase pancréatique porcine sur la paroi aortique.

Modèle chirurgical murine de l'élastase topique induit descendant l'aneurysm aortique thoracique

Ce nouveau modèle crée des anévrismes aurifiques aurifiques abdominaux infrarérérés robustes chez les porcs à l'aide d'une combinaison d'angioplastie ballon, d'élastase/perfusion de collagène, d'application topique d'élastase et d'administration aminopropionitrile composée de composés oraux, qui interfère avec le collage.

Modèle porcin de l'anévrisme aortique abdominal infrarenal

Le présent protocole décrit une méthode chirurgicale normalisée pour le modèle AAA induit par l’élastase par l’application directe d’élastase à l’adventice de l’aorte abdominale infrarénale chez la souris.

Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par l’application périvasculaire d’élastase

Ce manuscrit présente un protocole permettant d’établir un modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris à l’aide de chlorure de calcium et d’élastase, combinant les avantages des méthodes de modélisation précédentes. Ce modèle peut être utilisé pour étudier les mécanismes physiopathologiques sous-jacents aux anévrismes de l’aorte abdominale.

Un modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par infiltration péri-adventice de chlorure de calcium et d’élastase

Ce protocole fournit une méthode reproductible et fiable pour induire des anévrismes de l’aorte abdominale (AAA) chez des souris C57BL/6 en utilisant la sensibilisation à l’elastine et l’application d’élastase périvasculaire, en tant que modèle AAA incorporant une composante immunosensibilisation.

Création fiable d’un modèle d’anévrisme aortique abdominal murien utilisant la sensibilisation à l’élastine et l’élastase périvasculaire

Constriction aortique transverse (TAC) chez la souris est un modèle couramment utilisé expérimental pour étudier les mécanismes qui sous-tendent l'hypertrophie cardiaque et le développement d'insuffisance cardiaque. Ici, nous décrivons les procédures de la constriction de l'aorte afin de créer un diplôme reproductible de l'hypertrophie cardiaque chez la souris.

Constriction aortique transverse chez la souris

Une échelle du génome unique efficace méthode de mutation du gène a été établie à...

La délétion de gènes dans le génome entier<em&gt; Streptococcus sanguinis</em&gt; Par PCR à haut débit

La nature des interactions entre les cellules souches hématopoïétiques et progénitrices (HSPCs) et les niches de la moelle osseuse est mal comprise. Mesure des modifications de matériel et un protocole d'acquisition en plusieurs étapes permettent l'utilisation de deux photons et la microscopie confocale à l'image ex vivo des HSPCs marqués hébergés dans les zones de la moelle osseuse, les interactions de suivi et mouvement.

In Vivo suivi 4-Dimensional de hématopoïétiques cellules souches et progénitrices adultes dans la voûte du crâne de souris de moelle osseuse

Une méthode pratique et puissante pour étudier l’autophagie chez Penicillium chrysogenum en utilisant des coussinets de famine (mélanges d’agarose et d’eau du robinet dans une lame de microscope contenant une cavité centrale) est présentée ici.

Analyse de l&#39;autophagie dans<em&gt; Penicillium chrysogenum</em&gt; À l&#39;aide de famine Pads en association avec microscopie de fluorescence

Découvrez la modélisation de l'anévrisme de l'aorte abdominale chez la souris par élastase topique et BAPN oral. Cette méthode reproduit fidèlement les caractéristiques humaines pour étudier la croissance et le risque de rupture.

Modélisation avancée de l’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par l’association de l’élastase topique et du ß-aminopropionitrile oral (Vidéo) | JoVE Journal

Modélisation avancée de l’anévrisme de l’aorte abdominale chez la souris par l’association de l’élastase topique et du ß-aminopropionitrile oral

Explorer plus de vidéos