Name: Isolement, caractérisation et analyse protéomique de vésicules extracellulaires dérivées du plasma pour la découverte de biomarqueurs cardiovasculaires (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Découvrez l'isolement et la caractérisation des vésicules extracellulaires plasmatiques pour la découverte de biomarqueurs cardiovasculaires. Cette méthode LC-MS/MS améliore la fiabilité des analyses protéomiques cliniques.

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<meta charset="utf8"></head><body>Études de biomarqueurs cardiovasculaires à l’aide du protéome plasmatique de vésicule extracellulaire

<ol><li>Thery, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+2018+%28misev2018%29%3A+A+position+statement+of+the+international+society+for+extracellular+vesicles+and+update+of+the+misev2014+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (misev2018): A position statement of the international society for extracellular vesicles and update of the misev2014 guidelines.</a> J Extracell Vesicles. 7 (1), 1535750(2018).</li>
<li>Kalluri, R., Lebleu, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology%2C+function%2C+and+biomedical+applications+of+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The biology, function, and biomedical applications of exosomes.</a> Science. 367, 6478(2020).</li>
<li>Shah, R., Patel, T., Freedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+extracellular+vesicles+in+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Circulating extracellular vesicles in human disease.</a> N Engl J Med. 379 (22), 2180-2181 (2018).</li>
<li>Zara, M., Amadio, P., Campodonico, J., Sandrini, L., Barbieri, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+in+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostics+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Exosomes in cardiovascular diseases.</a> Diagnostics (Basel). 10 (11), 943(2020).</li>
<li>Ontoria-Oviedo, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+secreted+by+hypoxic+ac10+cardiomyocytes+modulate+fibroblast+cell+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles secreted by hypoxic ac10 cardiomyocytes modulate fibroblast cell motility.</a> Front Cardiovasc Med. 5, 152(2018).</li>
<li>Zara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+exosome+profile+in+st-elevation+myocardial+infarction+patients+with+and+without+out-of-hospital+cardiac+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Plasma exosome profile in st-elevation myocardial infarction patients with and without out-of-hospital cardiac arrest.</a> Int J Mol Sci. 22 (15), (2021).</li>
<li>Anselmo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+hypoxic+stress+mediates+functional+cardiac+extracellular+vesicle+release%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Myocardial hypoxic stress mediates functional cardiac extracellular vesicle release.</a> Eur Heart J. 42 (28), 2780-2792 (2021).</li>
<li>Navickas, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+circulating+microRNAs+as+biomarkers+of+cardiovascular+disease%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Identifying circulating microRNAs as biomarkers of cardiovascular disease: A systematic review.</a> Cardiovasc Res. 111 (4), 322-337 (2016).</li>
<li>Creemers, E. E., Tijsen, A. J., Pinto, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+microRNAs%3A+Novel+biomarkers+and+extracellular+communicators+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Circulating microRNAs: Novel biomarkers and extracellular communicators in cardiovascular disease.</a> Circ Res. 110 (3), 483-495 (2012).</li>
<li>Deddens, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+microRNAs+as+novel+biomarkers+for+the+early+diagnosis+of+acute+coronary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Circulating microRNAs as novel biomarkers for the early diagnosis of acute coronary syndrome.</a> J Cardiovasc Transl Res. 6 (6), 884-898 (2013).</li>
<li>Gidlof, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+profiling+of+extracellular+vesicles+reveals+additional+diagnostic+biomarkers+for+myocardial+infarction+compared+to+plasma+alone%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Proteomic profiling of extracellular vesicles reveals additional diagnostic biomarkers for myocardial infarction compared to plasma alone.</a> Sci Rep. 9 (1), 8991(2019).</li>
<li>Byrne, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ESC+guidelines+for+the+management+of+acute+coronary+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J+Acute+Cardiovasc+Care%22%5BJournal%5D)">ESC guidelines for the management of acute coronary syndromes.</a> Eur Heart J Acute Cardiovasc Care. 10, (2023).</li>
<li>Garcia-Castrillo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+blood+sampling+in+emergency+departments+from+the+European+Society+for+Emergency+Medicine+%28EUSEM%29%2C+European+Society+for+Emergency+Nursing+%28EUSEN%29%2C+and+European+Federation+of+Clinical+Chemistry+and+Laboratory+Medicine+%28EFLM%29+working+group+for+the+pre-analytical+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Recommendations for blood sampling in emergency departments from the European Society for Emergency Medicine (EUSEM), European Society for Emergency Nursing (EUSEN), and European Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (EFLM) working group for the pre-analytical phase.</a> Clin Chem Lab Med. 62 (8), 1538-1547 (2024).</li>
<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227 (5259), 680-685 (1970).</li>
<li>Cox, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Andromeda%3A+A+peptide+search+engine+integrated+into+the+maxquant+environment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Andromeda: A peptide search engine integrated into the maxquant environment.</a> J Proteome Res. 10 (4), 1794-1805 (2011).</li>
<li>Cox, J., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maxquant+enables+high+peptide+identification+rates%2C+individualized+p.p.b.-range+mass+accuracies+and+proteome-wide+protein+quantification%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Maxquant enables high peptide identification rates, individualized p.p.b.-range mass accuracies and proteome-wide protein quantification.</a> Nat Biotechnol. 26 (12), 1367-1372 (2008).</li>
<li>Blein-Nicolas, M., Zivy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thousand+and+one+ways+to+quantify+and+compare+protein+abundances+in+label-free+bottom-up+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Thousand and one ways to quantify and compare protein abundances in label-free bottom-up proteomics.</a> Biochim Biophys Acta. 1864 (8), 883-895 (2016).</li>
<li>Lacroix, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+pre-analytical+variables+in+plasma+microparticle+determination%3A+Results+of+the+international+society+on+thrombosis+and+haemostasis+SSC+collaborative+workshop%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Standardization of pre-analytical variables in plasma microparticle determination: Results of the international society on thrombosis and haemostasis SSC collaborative workshop.</a> J Thromb Haemost. 11 (6), 1190-1193 (2013).</li>
<li>Nieuwland, R., Siljander, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beginner%27s+guide+to+study+extracellular+vesicles+in+human+blood+plasma+and+serum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">A beginner's guide to study extracellular vesicles in human blood plasma and serum.</a> J Extracell Vesicles. 13 (1), e12400(2024).</li>
<li>Lacroix, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+pre-analytical+parameters+on+the+measurement+of+circulating+microparticles%3A+Towards+standardization+of+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Impact of pre-analytical parameters on the measurement of circulating microparticles: Towards standardization of protocol.</a> J Thromb Haemost. 10 (3), 437-446 (2012).</li>
<li>Coumans, F. aW., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodological+guidelines+to+study+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Methodological guidelines to study extracellular vesicles.</a> Circ Res. 120 (10), 1632-1648 (2017).</li>
<li>Clayton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+towards+a+roadmap+for+collection%2C+handling+and+storage+of+blood+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Considerations towards a roadmap for collection, handling and storage of blood extracellular vesicles.</a> J Extracell Vesicles. 8 (1), 1647027(2019).</li>
<li>Lucien, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miblood-EV%3A+Minimal+information+to+enhance+the+quality+and+reproducibility+of+blood+extracellular+vesicle+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Miblood-EV: Minimal information to enhance the quality and reproducibility of blood extracellular vesicle research.</a> J Extracell Vesicles. 12 (12), e12385(2023).</li>
<li>Zhang, X., Takeuchi, T., Takeda, A., Mochizuki, H., Nagai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+serum+and+plasma+as+a+source+of+blood+extracellular+vesicles%3A+Increased+levels+of+platelet-derived+particles+in+serum+extracellular+vesicle+fractions+alter+content+profiles+from+plasma+extracellular+vesicle+fractions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparison of serum and plasma as a source of blood extracellular vesicles: Increased levels of platelet-derived particles in serum extracellular vesicle fractions alter content profiles from plasma extracellular vesicle fractions.</a> PLoS One. 17 (6), e0270634(2022).</li>
<li>Gelibter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+storage+on+extracellular+vesicles%3A+A+systematic+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">The impact of storage on extracellular vesicles: A systematic study.</a> J Extracell Vesicles. 11 (2), e12162(2022).</li>
<li>Sluijter, J. P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+in+diagnostics+and+therapy+of+the+ischaemic+heart%3A+Position+paper+from+the+working+group+on+cellular+biology+of+the+heart+of+the+European+Society+of+Cardiology%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles in diagnostics and therapy of the ischaemic heart: Position paper from the working group on cellular biology of the heart of the European Society of Cardiology.</a> Cardiovasc Res. 114 (1), 19-34 (2018).</li>
<li>Davidson, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+identification+and+characterization+of+extracellular+vesicles+in+cardiovascular+studies%3A+From+exosomes+to+microvesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Methods for the identification and characterization of extracellular vesicles in cardiovascular studies: From exosomes to microvesicles.</a> Cardiovasc Res. 119 (1), 45-63 (2023).</li>
<li>Karimi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+analysis+of+the+plasma+extracellular+vesicle+proteome+after+separation+from+lipoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Detailed analysis of the plasma extracellular vesicle proteome after separation from lipoproteins.</a> Cell Mol Life Sci. 75 (15), 2873-2886 (2018).</li>
<li>Brennan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+methods+for+the+isolation+and+separation+of+extracellular+vesicles+from+protein+and+lipid+particles+in+human+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A comparison of methods for the isolation and separation of extracellular vesicles from protein and lipid particles in human serum.</a> Sci Rep. 10 (1), 1039(2020).</li>
<li>Palviainen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+from+human+plasma+and+serum+are+carriers+of+extravesicular+cargo-implications+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles from human plasma and serum are carriers of extravesicular cargo-implications for biomarker discovery.</a> PLoS One. 15 (8), e0236439(2020).</li>
<li>Lotvall, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+experimental+requirements+for+definition+of+extracellular+vesicles+and+their+functions%3A+A+position+statement+from+the+international+society+for+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Minimal experimental requirements for definition of extracellular vesicles and their functions: A position statement from the international society for extracellular vesicles.</a> J Extracell Vesicles. 3, 26913(2014).</li>
<li>Gemoll, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+profiling+of+serum+extracellular+vesicles+reveals+qualitative+and+quantitative+differences+after+differential+ultracentrifugation+and+ExoQuick+TM+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Protein profiling of serum extracellular vesicles reveals qualitative and quantitative differences after differential ultracentrifugation and ExoQuick TM isolation.</a> J Clin Med. 9 (5), 1429(2020).</li>
<li>Kreimer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass-spectrometry-based+molecular+characterization+of+extracellular+vesicles%3A+Lipidomics+and+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Mass-spectrometry-based molecular characterization of extracellular vesicles: Lipidomics and proteomics.</a> J Proteome Res. 14 (6), 2367-2384 (2015).</li>
<li>Shevchenko, A., Tomas, H., Havlis, J., Olsen, J. V., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-gel+digestion+for+mass+spectrometric+characterization+of+proteins+and+proteomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">In-gel digestion for mass spectrometric characterization of proteins and proteomes.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2856-2860 (2006).</li>
<li>Bateman, N. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximizing+peptide+identification+events+in+proteomic+workflows+using+data-dependent+acquisition+%28dda%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Maximizing peptide identification events in proteomic workflows using data-dependent acquisition (dda).</a> Mol Cell Proteomics. 13 (1), 329-338 (2014).</li>
<li>Pino, L. K., Just, S. C., Maccoss, M. J., Searle, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquiring+and+analyzing+data+independent+acquisition+proteomics+experiments+without+spectrum+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Acquiring and analyzing data independent acquisition proteomics experiments without spectrum libraries.</a> Mol Cell Proteomics. 19 (7), 1088-1103 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4x Polisseur d’échantillons Laemmli</td><td>Bio-rad</td><td>1610747</td><td></td></tr><tr><td>10x RIPA-Buffer</td><td>Abcam</td><td>ab156034</td><td></td></tr><tr><td>Bouteille en polycarbonate de 26,3 ml avec bouchon pour ultracentrifugation</td><td>Beckman Coulter</td><td>355654</td><td></td></tr><tr><td>5810R Centrifugeuse de paillasse</td><td>Eppendorf</td><td>5811000015</td><td></td></tr><tr><td>Acétonitrile (ACN)</td><td>Biosolve</td><td>0001204101BS</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43816-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Acide formique 99 % ULC/MS 100</td><td>Biosolve</td><td>0006914143BS</td><td></td></tr><tr><td>Histopaque - 1077</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10771</td><td></td></tr><tr><td>Iodoacétamide (IAA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6125-5G</td><td></td></tr><tr><td>Spectromètre de masse Orbitrap Q Exactive HF</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>IQLAAEGAAPFALGMBDK</td><td></td></tr><tr><td>MOPS SDS tampon de fonctionnement</td><td>Thermo Fisher</td><td>B0001</td><td></td></tr><tr><td>NanoSight NS300</td><td>Malvern Panalytical&nbsp ;</td><td>NS300</td><td></td></tr><tr><td>Nanosight NTA 3.2 Logiciel</td><td>Malvern Panalytical&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&nbsp ; bis 12&nbsp ;%, gels de protéines Bis-Tris</td><td>Invitrogen</td><td>NP0323</td><td></td></tr><tr><td>Optima XPN-80 ultracentrifugeuse au sol</td><td>Beckman Coulter</td><td>521-4180</td><td></td></tr><tr><td>PageRuler Plus Échelle de protéines précolorées</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26619</td><td></td></tr><tr><td>Cocktail inhibiteur de protéase/phosphatase (100X)</td><td>Technologie de signalisation cellulaire</td><td>5872S</td><td></td></tr><tr><td>Marqueur protéique</td><td>Thermo Fisher</td><td>26616</td><td></td></tr><tr><td>Proteome Discoverer 2.5</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Q Exactive Plus Spectromètre de masse hybride Quadrupole-Orbitrap</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>IQLAAEGAAPFALGMBDK</td><td></td></tr><tr><td>Coloration rapide coomasssie</td><td>Serva</td><td>35081.01</td><td></td></tr><tr><td>ReproSil-Pur 120 C18-AQ, 1.9 & micro ; m 1 g</td><td>Dr. Maisch</td><td>r119.aq.0001</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE gel commercial</td><td>Thermo Fisher</td><td>NW00100BOX</td><td></td></tr><tr><td>S-Monovette&nbsp ; Citrat 9NC 0.106 mol/l 3,2 %</td><td>Sarstedt</td><td>02.1067.001</td><td></td></tr><tr><td>Concentrateur d’aspiration rapide</td><td>Savant</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Swiss-Prot (Uniprot) Homo sapiens (UP000005640, juin 2020) base de données de protéines</td><td>UniProt</td><td>https://www.uniprot.org/proteomes/UP000005640</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de bicarbonate de triéthylammonium (TEAB)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7408</td><td></td></tr><tr><td>Acide trifluoroacétique (TFA) pour HPLC >99 %, 100 mL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>302031-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine MS-Grade</td><td>Thermo Fisher</td><td>90058</td><td></td></tr><tr><td>Type 50.2 Ti Rotor à angle fixe</td><td>Beckman Coulter</td><td>337901</td><td></td></tr><tr><td>UHPLC Dionex Ultimate 3000</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ULTIM3000RSLCNANO</td><td></td></tr><tr><td>Water</td><td>Biosolve</td><td>0023214102BS</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement, caractérisation et analyse protéomique de vésicules extracellulaires dérivées du plasma pour la découverte de biomarqueurs cardiovasculaires

Isolation, Characterization, and Proteomic Analysis of Plasma-Derived Extracellular Vesicles for Cardiovascular Biomarker Discovery

Les VE ont été isolées à partir d’échantillons de plasma (n = 3) de patients sans maladie cardiovasculaire manifeste, ainsi que de patients atteints d’un infarctus du myocarde sans élévation du segment ST (NSTEMI ; n = 2), en utilisant le protocole d’ultracentrifugation différentielle établi. La séparation adéquate des EV plasmatiques a été confirmée par immunotransfert des protéines TSG-101, de l’annexine 5 (Anx5) et de CD9 enrichies en EV dans les isolats de VE par rapport au plasma appauvri en EV provenant des mêmes p...

Isolement, caractérisation et analyse protéomique de vésicules extracellulaires dérivées du plasma pour la découverte de biomarqueurs cardiovasculaires

Extracellular vesicles (EV) are cell-derived, lipid bilayer-enclosed, non-replicable nanoparticles. EV currently gain attention in cardiovascular research ...

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Les vésicules extracellulaires présentes dans le sang ont été suggérées comme de nouveaux biomarqueurs pour diverses maladies. Ici, nous présentons un protocole pour l’isolement de grandes microvésicules dérivées de membranes plasmiques à partir d’échantillons de sang périphérique et leur analyse ultérieure par cytométrie en flux conventionnelle et Western Blot.

Isolement et caractérisation de microvésicules dans le sang périphérique

Nous présentons ici un protocole visant à purifier les exosomes de plasma et de sérum réduit co purification de protéines sanguines non-exosomal. Le protocole optimisé inclut l’ultrafiltration, le traitement de la protéase et chromatographie d’exclusion. Améliorée de purification des exosomes des analyses en aval avantages, y compris la quantification plus précise des vésicules et la caractérisation de la protéomique.

Digestion des protéines, Ultrafiltration et chromatographie d’Exclusion afin d’optimiser l’isolement des Exosomes de sérum et de Plasma sanguin humain

Le protocole décrit une méthode reproductible, conçue pour être utilisé avec les surnageants de culture de cellules pour détecter des épitopes de surface sur petites vésicules extracellulaires (EV). Il utilise l’immunoprécipitation de EV spécifique à l’aide de billes couplées avec des anticorps qui reconnaissent l’antigène de surface CD9, CD63 et CD81. La méthode est optimisée pour l’analyse en cytométrie en flux en aval.

Analyse par cytométrie en flux de vésicules extracellulaires de médias conditionné par cellule d’écoulement

Le présent rapport souligne les exigences chronologiques pour l’isolement extracellulaire de vésicule (EV) des microglies ou des macrophages de sang. Les véhicules électriques dérivés de microglies ont été évalués en tant que régulateurs de la excroissance neurite tandis que les véhicules électriques dérivés du macrophage sanguin ont été étudiés dans le contrôle de l’invasion de cellules de glioma C6 dans les essais in vitro. L’objectif est de mieux comprendre ces fonctions EV en tant que...

Caractérisation des vésicules extracellulaires dérivées d’une cellule immunitaire et étude de l’impact fonctionnel sur l’environnement cellulaire

Le présent protocole décrit une méthode pour extraire les vésicules extracellulaires du sang périphérique et des tissus solides avec profilage ultérieur des antigènes de surface et des cargaisons de protéines.

Isolement et analyse de vésicules extracellulaires traçables et fonctionnalisées à partir du plasma et des tissus solides

La dernière génération d’outils de caractérisation des véhicules électriques est capable d’analyser simultanément plusieurs paramètres uniques. La cytométrie en nanoflux mesure toutes les particules biologiques de plus de 45 nm sans marquage et identifie les caractéristiques spécifiques des sous-populations par diverses techniques de marquage fluorescent.

Caractérisation de la protéine transmembranaire d’une vésicule extracellulaire unique par cytométrie nano-flux

Le présent protocole fournit des descriptions détaillées pour l’isolement efficace des vésicules extracellulaires urinaires à l’aide de billes magnétiques fonctionnalisées. De plus, il englobe des analyses ultérieures, y compris le western blot, la protéomique et la phosphoprotéomique.

Isolement par affinité chimique de vésicules extracellulaires à partir de biofluides pour l’analyse protéomique et phosphoprotéomique

Un protocole détaillé est fourni pour le nettoyage et la réutilisation des tubes à ultracentrifuger en polycarbonate afin d’effectuer l’isolement des vésicules extracellulaires adapté aux expériences de protéomique.

Réutilisation du tube ultracentrifuge en polycarbonate dans les analyses protéomiques de vésicules extracellulaires

Ici, nous démontrons la méthode de caractérisation des vésicules extracellulaires (VE) collectées à partir de fluides biologiques, tels que les larmes et la salive, de sujets humains. Le scanner utilisé dans cette méthode est capable de détecter le phénotype, la taille et le nombre total de particules des VE à partir de 1 μL de l’échantillon.

Caractérisation des vésicules extracellulaires à partir de fluides biologiques

Cette vidéo montre une technique efficace pour différencier et disséquer les différentes structures de semi-transparente du corps humain vitreuse en post mortem yeux.

Dissection de l&#39;homme des éléments du corps vitré de l&#39;analyse protéomique

Découvrez l'isolement et la caractérisation des vésicules extracellulaires plasmatiques pour la découverte de biomarqueurs cardiovasculaires. Cette méthode LC-MS/MS améliore la fiabilité des analyses protéomiques cliniques.

Isolement, caractérisation et analyse protéomique de vésicules extracellulaires dérivées du plasma pour la découverte de biomarqueurs cardiovasculaires (Vidéo) | JoVE Journal

Isolement, caractérisation et analyse protéomique de vésicules extracellulaires dérivées du plasma pour la découverte de biomarqueurs cardiovasculaires

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