Name: Optimisation de la préparation des échantillons pour la microscopie électronique cryogénique (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Découvrez une méthode pratique pour optimiser la préparation des échantillons en cryo-microscopie électronique et résoudre la distribution inégale des particules. Ce protocole utilise Methanocaldococcus jannaschii comme modèle pour améliorer la résolution des structures macromoléculaires.

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<ol><li>Faruqi, A. R., Mcmullan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electronic+detectors+for+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Q+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Electronic detectors for electron microscopy.</a> Q Rev Biophys. 44 (3), 357-390 (2011).</li>
<li>Hamaguchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+cryo-EM+system+for+single+particle+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">A new cryo-EM system for single particle analysis.</a> J Struct Biol. 207 (1), 40-48 (2019).</li>
<li>Kimanius, D., Dong, L., Sharov, G., Nakane, T., Scheres, S. H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+tools+for+automated+cryo-Em+single-particle+analysis+in+relion-4.0%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">New tools for automated cryo-Em single-particle analysis in relion-4.0.</a> Biochem J. 478 (24), 4169-4185 (2021).</li>
<li>Punjani, A., Fleet, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3Dflex%3A+Determining+structure+and+motion+of+flexible+proteins+from+cryo-Em%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">3Dflex: Determining structure and motion of flexible proteins from cryo-Em.</a> Nat Methods. 20 (6), 860-870 (2023).</li>
<li>Chen, M., Schmid, M. F., Chiu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+resolution+and+resolvability+of+single-particle+cryo-EM+structures+using+gaussian+mixture+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Improving resolution and resolvability of single-particle cryo-EM structures using gaussian mixture models.</a> Nat Methods. 21 (1), 37-40 (2024).</li>
<li>Arnold, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miniaturizing+em+sample+preparation%3A+Opportunities%2C+challenges%2C+and+%26%2334%3Bvisual+proteomics%26%2334%3B%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Miniaturizing em sample preparation: Opportunities, challenges, and &#34;visual proteomics&#34;.</a> Proteomics. 18 (5-6), e1700176(2018).</li>
<li>Drulyte, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approaches+to+altering+particle+distributions+in+cryo-electron+microscopy+sample+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallogr+D+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Approaches to altering particle distributions in cryo-electron microscopy sample preparation.</a> Acta Crystallogr D Struct Biol. 74 (Pt 6), 560-571 (2018).</li>
<li>Han, B. G., Avila-Sakar, A., Remis, J., Glaeser, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+making+ideal+cryo-Em+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Challenges in making ideal cryo-Em samples.</a> Curr Opin Struct Biol. 81, 102646(2023).</li>
<li>Lyumkis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+and+opportunities+in+cryo-em+single-particle+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Challenges and opportunities in cryo-em single-particle analysis.</a> J Biol Chem. 294 (13), 5181-5197 (2019).</li>
<li>Naydenova, K., Russo, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+the+effects+of+particle+orientation+to+improve+the+efficiency+of+electron+cryomicroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Measuring the effects of particle orientation to improve the efficiency of electron cryomicroscopy.</a> Nat Commun. 8 (1), 629(2017).</li>
<li>Tan, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addressing+preferred+specimen+orientation+in+single-particle+cryo-em+through+tilting%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Addressing preferred specimen orientation in single-particle cryo-em through tilting.</a> Nat Methods. 14 (8), 793-796 (2017).</li>
<li>Liu, Y. T., Hu, J., Zhou, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolving+the+preferred+orientation+problem+in+cryo-EM+reconstruction+with+self-supervised+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">Resolving the preferred orientation problem in cryo-EM reconstruction with self-supervised deep learning.</a> Microsc Microanal. 29 (Supplement_1), 1918-1919 (2023).</li>
<li>Choy, B. C., Cater, R. J., Mancia, F., Pryor, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+10-year+meta-analysis+of+membrane+protein+structural+biology%3A+Detergents%2C+membrane+mimetics%2C+and+structure+determination+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Biomembr%22%5BJournal%5D)">A 10-year meta-analysis of membrane protein structural biology: Detergents, membrane mimetics, and structure determination techniques.</a> Biochim Biophys Acta Biomembr. 1863 (3), 183533(2021).</li>
<li>Li, B., Zhu, D., Shi, H., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+charge+on+protein+preferred+orientation+at+the+air-water+interface+in+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Effect of charge on protein preferred orientation at the air-water interface in cryo-electron microscopy.</a> J Struct Biol. 213 (4), 107783(2021).</li>
<li>Chen, J., Noble, A. J., Kang, J. Y., Darst, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eliminating+effects+of+particle+adsorption+to+the+air%2Fwater+interface+in+single-particle+cryo-electron+microscopy%3A+Bacterial+RNA+polymerase+and+CHAPSO%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol+X%22%5BJournal%5D)">Eliminating effects of particle adsorption to the air/water interface in single-particle cryo-electron microscopy: Bacterial RNA polymerase and CHAPSO.</a> J Struct Biol X. 1, 100005(2019).</li>
<li>Da Fonseca, P. C. A., Morris, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-EM+reveals+the+conformation+of+a+substrate+analogue+in+the+human+20s+proteasome+core%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Commun%22%5BJournal%5D)">Cryo-EM reveals the conformation of a substrate analogue in the human 20s proteasome core.</a> Nature Commun. 6 (1), 7575(2015).</li>
<li>Nguyen, T. H. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-EM+structure+of+the+yeast+u4%2Fu6.U5+tri-snrnp+at+3.7+%C3%A5+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cryo-EM structure of the yeast u4/u6.U5 tri-snrnp at 3.7 å resolution.</a> Nature. 530 (7590), 298-302 (2016).</li>
<li>Pantelic, R. S., Meyer, J. C., Kaiser, U., Baumeister, W., Plitzko, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graphene+oxide%3A+A+substrate+for+optimizing+preparations+of+frozen-hydrated+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Graphene oxide: A substrate for optimizing preparations of frozen-hydrated samples.</a> J Struct Biol. 170 (1), 152-156 (2010).</li>
<li>Palovcak, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+robust+procedure+for+preparing+graphene-oxide+cryo-em+grids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple and robust procedure for preparing graphene-oxide cryo-em grids.</a> J Struct Biol. 204 (1), 80-84 (2018).</li>
<li>Meyerson, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembled+monolayers+improve+protein+distribution+on+holey+carbon+cryo-EM+supports%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Self-assembled monolayers improve protein distribution on holey carbon cryo-EM supports.</a> Sci Rep. 4 (1), 7084(2014).</li>
<li>Patel, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+human+tfiid+and+mechanism+of+TBP+loading+onto+promoter+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Structure of human tfiid and mechanism of TBP loading onto promoter DNA.</a> Science. 362 (6421), eaau8872(2018).</li>
<li>Lander, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+subunit+architecture+of+the+proteasome+regulatory+particle%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Complete subunit architecture of the proteasome regulatory particle.</a> Nature. 482 (7384), 186-191 (2012).</li>
<li>Tan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addressing+preferred+specimen+orientation+in+single-particle+cryo-em+through+tilting%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Addressing preferred specimen orientation in single-particle cryo-em through tilting.</a> Nat Methods. 14 (8), 793-796 (2017).</li>
<li>Carragher, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+outcomes+when+optimizing+%27standard%27+sample+preparation+for+single-particle+cryo-em%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">Current outcomes when optimizing 'standard' sample preparation for single-particle cryo-em.</a> J Microsc. 276 (1), 39-45 (2019).</li>
<li>Xu, Y., Dang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+technical+advances+in+sample+preparation+for+single-particle+cryo-em%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Recent technical advances in sample preparation for single-particle cryo-em.</a> Front Mol Biosci. 9, 892459(2022).</li>
<li>Lee, J., Ryu, B., Kim, T., Kim, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-em+structure+of+a+16.5-kda+small+heat-shock+protein+from+Methanocaldococcus+jannaschii%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Macromol%22%5BJournal%5D)">Cryo-em structure of a 16.5-kda small heat-shock protein from Methanocaldococcus jannaschii.</a> Int J Biol Macromol. 258 (Pt 1), 128763(2024).</li>
<li>Kim, K. K., Kim, R., Kim, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+a+small+heat-shock+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of a small heat-shock protein.</a> Nature. 394 (6693), 595-599 (1998).</li>
<li>Chakavarti, B., Chakavarti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoretic+separation+of+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Electrophoretic separation of proteins.</a> J Vis Exp. (16), e758(2008).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).</li>
<li>Kim, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((crystallization%2C+and+preliminary+x-ray+crystallographic+data+analysis+of+small+heat+shock+protein+homolog+from+Methanococcus+jannaschii%2C+a+hyperthermophile%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">crystallization, and preliminary x-ray crystallographic data analysis of small heat shock protein homolog from Methanococcus jannaschii, a hyperthermophile.</a> J Struct Biol. 121 (1), 76-80 (1998).</li>
<li>Kim, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+chaperone+activity+of+the+small+heat-shock+protein+of+Methanococcus+jannaschii%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of chaperone activity of the small heat-shock protein of Methanococcus jannaschii.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 100 (14), 8151-8155 (2003).</li>
<li>Shi, J., Koteiche, H. A., Mchaourab, H. S., Stewart, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryoelectron+microscopy+and+EPR+analysis+of+engineered+symmetric+and+polydisperse+hsp16.5+assemblies+reveals+determinants+of+polydispersity+and+substrate+binding%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Cryoelectron microscopy and EPR analysis of engineered symmetric and polydisperse hsp16.5 assemblies reveals determinants of polydispersity and substrate binding.</a> J Biol Chem. 281 (52), 40420-40428 (2006).</li>
<li>Kim, R., Kim, K. K., Yokota, H., Kim, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+heat+shock+protein+of+Methanococcus+jannaschii%2C+a+hyperthermophile%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Small heat shock protein of Methanococcus jannaschii, a hyperthermophile.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 95 (16), 9129-9133 (1998).</li>
<li>Zbacnik, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+buffers+in+protein+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Role of buffers in protein formulations.</a> J Pharm Sci. 106 (3), 713-733 (2017).</li>
<li>Collins, B., Stevens, R. C., Page, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystallization+optimum+solubility+screening%3A+Using+crystallization+results+to+identify+the+optimal+buffer+for+protein+crystal+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallogr+Sect+F+Struct+Biol+Cryst+Commun%22%5BJournal%5D)">Crystallization optimum solubility screening: Using crystallization results to identify the optimal buffer for protein crystal formation.</a> Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun. 61 (Pt 12), 1035-1038 (2005).</li>
<li>D'arcy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystallizing+proteins+-+A+rational+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallogr+D+Biol+Crystallogr%22%5BJournal%5D)">Crystallizing proteins - A rational approach.</a> Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 50 (Pt 4), 469-471 (1994).</li>
<li>Jancarik, J., Pufan, R., Hong, C., Kim, S. H., Kim, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimum+solubility+%28os%29+screening%3A+An+efficient+method+to+optimize+buffer+conditions+for+homogeneity+and+crystallization+of+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallogr+D+Biol+Crystallogr%22%5BJournal%5D)">Optimum solubility (os) screening: An efficient method to optimize buffer conditions for homogeneity and crystallization of proteins.</a> Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 60 (Pt 9), 1670-1673 (2004).</li>
<li>Zhang, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+strategy+for+selecting+the+ph+of+protein+solutions+to+enhance+crystallization%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallogr+Sect+F+Struct+Biol+Cryst+Commun%22%5BJournal%5D)">A strategy for selecting the ph of protein solutions to enhance crystallization.</a> Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun. 69 (Pt 7), 821-826 (2013).</li>
<li>Basanta, B., Hirschi, M. M., Grotjahn, D. A., Lander, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+case+for+glycerol+as+an+acceptable+additive+for+single-particle+cryo-EM+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallogr+D+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">A case for glycerol as an acceptable additive for single-particle cryo-EM samples.</a> Acta Crystallogr D Struct Biol. 78 (Pt 1), 124-135 (2022).</li>
<li>Michon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+surfactants+in+electron+cryo-microscopy+film+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Role of surfactants in electron cryo-microscopy film preparation.</a> Biophys J. 122 (10), 1846-1857 (2023).</li>
<li>Chen, S., Li, J., Vinothkumar, K. R., Henderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+human+erythrocyte+catalase+with+air-water+interface+in+cryo-EM%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">Interaction of human erythrocyte catalase with air-water interface in cryo-EM.</a> Microscopy (Oxf). 71 (Supplement_1), i51-i59 (2022).</li>
<li>Vinothkumar, K. R., Henderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+particle+electron+cryomicroscopy%3A+Trends%2C+issues+and+future+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Q+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Single particle electron cryomicroscopy: Trends, issues and future perspective.</a> Q Rev Biophys. 49, e13(2016).</li>
<li>Kim, L. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Benchmarking+cryo-em+single+particle+analysis+workflow%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Benchmarking cryo-em single particle analysis workflow.</a> Front Mol Biosci. 5, 50(2018).</li>
<li>Bagby, S., Tong, K. I., Liu, D., Alattia, J. R., Ikura, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+button+test%3A+A+small+scale+method+using+microdialysis+cells+for+assessing+protein+solubility+at+concentrations+suitable+for+NMR%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+NMR%22%5BJournal%5D)">The button test: A small scale method using microdialysis cells for assessing protein solubility at concentrations suitable for NMR.</a> J Biomol NMR. 10 (3), 279-282 (1997).</li>
<li>Gewering, T., Januliene, D., Ries, A. B., Moeller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Know+your+detergents%3A+A+case+study+on+detergent+background+in+negative+stain+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Know your detergents: A case study on detergent background in negative stain electron microscopy.</a> J Struct Biol. 203 (3), 242-246 (2018).</li>
<li>Thompson, R. F., Walker, M., Siebert, C. A., Muench, S. P., Ranson, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+introduction+to+sample+preparation+and+imaging+by+cryo-electron+microscopy+for+structural+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">An introduction to sample preparation and imaging by cryo-electron microscopy for structural biology.</a> Methods. 100, 3-15 (2016).</li>
<li>Weissenberger, G., Henderikx, R. J. M., Peters, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+invisible+hands+of+sample+preparation+for+cryo-em%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Understanding the invisible hands of sample preparation for cryo-em.</a> Nat Methods. 18 (5), 463-471 (2021).</li>
<li>Earl, L. A., Falconieri, V., Milne, J. L., Subramaniam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-EM%3A+Beyond+the+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Cryo-EM: Beyond the microscope.</a> Curr Opin Struct Biol. 46, 71-78 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tube à fond rond de 14 mL</td><td>SPL Life Sciences</td><td>40114</td><td></td></tr><tr><td>250 & micro ; L Seringue étanche au gaz modèle 1725 LTN</td><td>Hamilton</td><td>81100</td><td>Aiguille cimentée, calibre 22s, 2 po, style de pointe 2</td></tr><tr><td>50 & micro ; L Bouton de dialyse</td><td>Hampton Research</td><td>HR3-326</td><td></td></tr><tr><td>50 mL BÉCHER EN VERRE</td><td>DIAMOND</td><td>HA.1010D.50</td><td></td></tr><tr><td>&Auml ; KTA pure 25 L</td><td>Cytiva</td><td>29018224</td><td>FPLC</td></tr><tr><td>Unité de filtration centrifuge Amicon Ultra-15</td><td>Millipore</td><td>UFC905024</td><td>50-KDa NMWL</td></tr><tr><td>Bradford Réactif</td><td>Supelco</td><td>B6916</td><td></td></tr><tr><td>Dumoxel Style N5</td><td>Dumont</td><td>0103-N5-PO</td><td></td></tr><tr><td>Glacios 2 Cryo-TEM</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>GLACIOSTEM</td><td></td></tr><tr><td>HiLoad 16/600 Superdex 200 pg</td><td>Cytiva</td><td>28989335</td><td></td></tr><tr><td>Micro Tube à centrifuger 1,5 mL</td><td>HD Micro</td><td>H23015</td><td></td></tr><tr><td>Tubes PCR 0,2 mL, bouchon plat</td><td>Axygen</td><td>PCR-02-C</td><td></td></tr><tr><td>PELCO easiGlow Unité de décharge</td><td>Ted Pella</td><td>91000</td><td></td></tr><tr><td>PELCO TEM Bloc porte-grille</td><td>Ted Pella</td><td>16820-25</td><td></td></tr><tr><td>Quantifoil R 1.2/1.3 200 Mesh, Cu</td><td>Microscopie électronique Sciences</td><td>Q2100CR1.3</td><td></td></tr><tr><td>Spectra/Por 3 RC Tube membranaire de dialyse&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>086705B</td><td>3500 Dalton MWCO</td></tr><tr><td>Superose 6 Increase 10/300 GL</td><td>Cytiva</td><td>29091596</td><td></td></tr><tr><td>Acétate d’uranyle</td><td>Merck</td><td>8473</td><td></td></tr><tr><td>Vitrobot Mark IV ThermoFisher</td><td>Scientific</td><td>VITROBOT</td><td></td></tr><tr><td>VitroEase Kit de dépistage de tampon et détergents</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A49856</td><td></td></tr></tbody></table>

optimisation de la préparation des échantillons pour la microscopie électronique cryogénique

Optimizing Sample Preparation for Cryogenic Electron Microscopy

Afin d’identifier les conditions de grille optimales pour MjsHSP16.5, un premier criblage cryo-EM a été effectué, se concentrant principalement sur l’examen de diverses conditions de tampon protéique : (1) le tampon de purification final, qui assure la stabilité et l’homogénéité de MjsHSP16.5 et est important pour sa cristallisation30 ; (2) tampons adaptés aux conditions nécessaires à la croissance de cristaux MjsHSP16.5 de haute qualité de diffraction30 ; et (3) les tampon...

Optimisation de la préparation des échantillons pour la microscopie électronique cryogénique

Cryogenic electron microscopy (cryo-EM) has revolutionized structural biology by enabling the study of macromolecular structures in near-native ...

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Cryo Electron Microscope, soit à balayage (MEB) ou de transmission (TEM), sont largement utilisés pour la caractérisation des échantillons biologiques ou d'autres matériaux avec une forte teneur en eau 1. Une SEM / Focused Ion Beam (FIB) est utilisé pour identifier les caractéristiques d'intérêt dans des échantillons et extraire une lame mince, électron-transparent pour le transfert à un cryo-MET.

Cryo-microscopie électronique à la préparation des échantillons au moyen d&#39;un faisceau d&#39;ions focalisés

Cet article décrit la méthodologie de cryo-microscopie électronique, qui est utilisée pour obtenir des images microscopiques de haute qualité de macromolécules dans leur état proche de leur natif. La méthode produit des images adaptées à un traitement informatisé ultérieur en utilisant l’approche de la particule unique, conçue pour générer la reconstruction 3D d’une macromolécule.

À faire et à ne pas faire de cryo-microscopie électronique: Notions sur la préparation de l&#39;échantillon et de collecte de données de haute qualité pour la reconstruction 3D macromoléculaire

Méthodes pour la préparation du volume des échantillons de taille nanolitres pour microscopie électronique à transmission et un instrument est présenté. Aucune étape de papier-buvard est requise, afin d’éviter les conséquences négatives que cela peut avoir pour les protéines, considérablement réduisant la perte de l’échantillon et permettant l’analyse de lysat pour la protéomique visuel unique cellule.

Préparation de l’échantillon miniaturisé pour la microscopie électronique à Transmission

Nous présentons ici un protocole permettant de combiner deux techniques traitement échantillon haute pression gel et traitement des échantillons assistée par micro-ondes, suivie de minime résine enrobage d’acquisition de données avec un microscope électronique à balayage faisceau ionique focalisé (FIB-SEM). Cela est démontré à l’aide d’un échantillon de nerf tibial de souris et le Caenorhabditis elegans.

Préparation de l’échantillon biologique par congélation à haute pression, amélioration du contraste assistée par micro-ondes et minime résine enrobage pour l’imagerie de Volume

Ce protocole présente une procédure détaillée pour préparer des cryoéchantillons biologiques pour des expériences de spectroscopie d’absorption de rayons X basées sur le synchrotron. Nous décrivons toutes les étapes nécessaires pour optimiser la préparation des échantillons et la cryoconservation avec des exemples du protocole avec les cellules cancéreuses et phytoplanctoniques. Cette méthode fournit une norme universelle de cryo-préparation des échantillons.

Préparation d’échantillons biologiques pour la spéciation à température cryogénique à l’aide de la spectroscopie d’absorption de rayons X à haute résolution

Les techniques de faisceau d’ions focalisés cryogéniques (FIB) et de microscopie électronique à balayage (MEB) peuvent fournir des informations clés sur la chimie et la morphologie des interfaces solide-liquide intactes. Les méthodes de préparation de cartes spectroscopiques à rayons X à dispersion d’énergie (EDX) de haute qualité de ces interfaces sont détaillées, en mettant l’accent sur les dispositifs de stockage d’énergie.

Caractérisation à l’échelle nanométrique des interfaces liquide-solide par couplage du fraisage par faisceau d’ions cryoconcentré avec la microscopie électronique à balayage et la spectroscopie

Le rapport signal/bruit des données est l’une des considérations les plus importantes lors de la réalisation de mesures de diffraction des rayons X à partir de microcristaux. La ligne de faisceau VMXm fournit un environnement à faible bruit et un microfaisme pour de telles expériences. Ici, nous décrivons les méthodes de préparation des échantillons pour le montage et le refroidissement des microcristaux pour VMXm et d’autres lignes de faisceau de cristallographie macromoléculaire microfocus.

Un pipeline de préparation d’échantillons pour les microcristaux à la ligne de faisceau VMXm

La détermination de la structure des complexes macromoléculaires à l’aide de cryoEM est devenue une routine pour certaines classes de protéines et de complexes. Ici, ce pipeline est résumé (préparation des échantillons, criblage, acquisition et traitement des données) et les lecteurs sont dirigés vers des ressources et des variables plus détaillées qui peuvent être modifiées dans le cas d’échantillons plus difficiles.

Cryo-microscopie électronique à particule unique : de l’échantillon à la structure

Ce manuscrit décrit la méthode de transfert et de plongée pour congeler manuellement des échantillons biologiques pour la microscopie électronique cryogénique à particule unique.

Congélation manuelle par transfert et par immersion d’échantillons biologiques pour la microscopie électronique cryogénique à particule unique

Nous présentons ici un pipeline pour le fraisage par faisceau d’ions focalisés corrélatifs 3D sur le guidage de la préparation d’échantillons cellulaires pour la cryo-tomographie électronique. La position 3D des protéines d’intérêt marquées par fluorescence est d’abord déterminée par cryo-microscopie à fluorescence, puis ciblée pour le broyage. Le protocole convient aux cellules de mammifères, de levures et de bactéries.

Préparation d’échantillons par fraisage par faisceau d’ions focalisé corrélatif 3D pour la cryotomographie électronique haute résolution

Cette méthode fournit un protocole accessible et flexible pour la préparation de grilles de microscopie électronique (EM) pour la cryotomographie cellulaire in situ et la microscopie optique et électronique corrélative (CLEM).

Préparation d’échantillons pour la cryotomographie in situ de cellules de mammifères

Découvrez une méthode pratique pour optimiser la préparation des échantillons en cryo-microscopie électronique et résoudre la distribution inégale des particules. Ce protocole utilise Methanocaldococcus jannaschii comme modèle pour améliorer la résolution des structures macromoléculaires.

Optimisation de la préparation des échantillons pour la microscopie électronique cryogénique

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