Name: Coloration vivante/morte pour quantifier les cellules viables mais non cultivables dans les bactéries causant des plaies traitées au miel de Manuka (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Découvrez la coloration vivante/morte pour quantifier les cellules viables mais non cultivables dans les bactéries causant des plaies traitées au miel de Manuka. Cette méthode révèle l'impact du miel sur la physiologie bactérienne.

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<ol><li>Spoering, A., Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms+and+planktonic+cells+of+Pseudomonas+aeruginosa+have+similar+resistance+to+killing+by+antimicrobials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Biofilms and planktonic cells of Pseudomonas aeruginosa have similar resistance to killing by antimicrobials.</a> J Bacteriol. 183 (23), 6746-6751 (2001).</li>
<li>Mulcahy, L. R., Burns, J. L., Lory, S., Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+Pseudomonas+aeruginosa+strains+producing+high+levels+of+persister+cells+in+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Emergence of Pseudomonas aeruginosa strains producing high levels of persister cells in patients with cystic fibrosis.</a> J Bacteriol. 192 (23), 6191-6199 (2010).</li>
<li>Li, L., Mendis, N., Trigui, H., Oliver, J. D., Faucher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+viable+but+non-culturable+state+in+human+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The importance of the viable but non-culturable state in human bacterial pathogens.</a> F Microbiol. 5, 00258(2014).</li>
<li>Reygaert, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+the+antimicrobial+resistance+mechanisms+of+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22AIMS+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An overview of the antimicrobial resistance mechanisms of bacteria.</a> AIMS Microbiol. 4 (3), 482-450 (2018).</li>
<li>Ayrapetyan, M., Williams, T. C., Baxter, R., Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+but+nonculturable+and+persister+cells+coexist+stochastically+and+are+induced+by+human+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Viable but nonculturable and persister cells coexist stochastically and are induced by human serum.</a> Infect Immun. 83 (11), 4194-4203 (2015).</li>
<li>Cabral, D. J., Wurster, J. I., Belenky, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+persistence+as+a+metabolic+adaptation%3A+Stress%2C+metabolism%2C+the+host%2C+and+new+directions%5BTitle%5D)+AND+%22PHARH2%22%5BJournal%5D)">Antibiotic persistence as a metabolic adaptation: Stress, metabolism, the host, and new directions.</a> PHARH2. 11 (1), 11010014(2018).</li>
<li>Heidelberg, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+aerosolization+on+culturability+and+viability+of+gram-negative+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Effect of aerosolization on culturability and viability of gram-negative bacteria.</a> Appl Environ Microbiol. 63 (9), 3585-3588 (1997).</li>
<li>Cook, K. L., Bolster, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+Campylobacter+jejuni+and+Escherichia+coli+in+groundwater+during+prolonged+starvation+at+low+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Survival of Campylobacter jejuni and Escherichia coli in groundwater during prolonged starvation at low temperatures.</a> J Appl Microbiol. 103 (3), 573-583 (2007).</li>
<li>Xu, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+and+viability+of+nonculturable+Escherichia+coli+and+Vibrio+cholerae+in+the+estuarine+and+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Microbl+Ecol%22%5BJournal%5D)">Survival and viability of nonculturable Escherichia coli and Vibrio cholerae in the estuarine and marine environment.</a> Microbl Ecol. 8 (4), 313-323 (1982).</li>
<li>Qi, Z., Huang, Z., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+differences+of+biofilm+and+planktonic+Pseudomonas+aeruginosa+in+viable+but+nonculturable+state+induced+by+chlorine+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Metabolism differences of biofilm and planktonic Pseudomonas aeruginosa in viable but nonculturable state induced by chlorine stress.</a> Sci Total Environ. 821, 153374(2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+Viable+but+Non-culturable+%28VBNC%29+state+formation+of+staphylococcus+aureus+and+its+control+in+food+system%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Study on the Viable but Non-culturable (VBNC) state formation of staphylococcus aureus and its control in food system.</a> F Microbiol. 11, 599739(2020).</li>
<li>Oryan, A., Alemzadeh, E., Moshiri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+and+therapeutic+activities+of+honey+in+wound+healing%3A+A+narrative+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Viability%22%5BJournal%5D)">Biological properties and therapeutic activities of honey in wound healing: A narrative review and meta-analysis.</a> J Tissue Viability. 25 (2), 98-118 (2016).</li>
<li>Lusby, P. E., Coombes, A. L., Wilkinson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bactericidal+Activity+of+different+honeys+against+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Bactericidal Activity of different honeys against pathogenic bacteria.</a> Arch Med Res. 36 (5), 464-467 (2005).</li>
<li>Mandal, M. D., Mandal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey%3A+Its+medicinal+property+and+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+Pac+J+Trop.+Biomed%22%5BJournal%5D)">Honey: Its medicinal property and antibacterial activity.</a> Asian Pac J Trop. Biomed. 1 (2), 154-160 (2011).</li>
<li>Carter, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+Manuka+Honey%3A+No+longer+so+alternative%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic Manuka Honey: No longer so alternative.</a> F Microbiol. 7, 00569(2016).</li>
<li>Cooper, R. A., Molan, P. C., Harding, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sensitivity+to+honey+of+Gram-positive+cocci+of+clinical+significance+isolated+from+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The sensitivity to honey of Gram-positive cocci of clinical significance isolated from wounds.</a> J Appl Microbiol. 93 (5), 857-863 (2002).</li>
<li>George Narelle May, C., Keith, F. Antibacterial Honey: In-vitro activity against clinical isolates of MRSA, VRE, and other multiresistant Gram-negative organisms. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGeorge+Narelle+May%2C+C+%22HMP+Global+Learning+Network%22">HMP Global Learning Network</a>. , https://www.hmpgloballearningnetwork.com/site/wounds/article/7751 (2007).</li>
<li>Blair, S. E., Cokcetin, N. N., Harry, E. J., Carter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unusual+antibacterial+activity+of+medical-grade+Leptospermum+honey%3A+Antibacterial+spectrum%2C+resistance+and+transcriptome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Soc+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The unusual antibacterial activity of medical-grade Leptospermum honey: Antibacterial spectrum, resistance and transcriptome analysis.</a> Eur Soc Clin Microbiol. 28 (10), 1199-1208 (2009).</li>
<li>Cooper, R. A., Jenkins, L., Henriques, A. F. M., Duggan, R. S., Burton, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+bacterial+resistance+to+medical-grade+manuka+honey%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Soc+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Absence of bacterial resistance to medical-grade manuka honey.</a> Eur Soc Clin Microbiol. 29 (10), 1237-1241 (2010).</li>
<li>Lu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+can+inhibit+and+eliminate+biofilms+produced+by+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Honey can inhibit and eliminate biofilms produced by Pseudomonas aeruginosa.</a> Sci Rep. 9 (1), 18160(2019).</li>
<li>Bischofberger, A. M., Pfrunder Cardozo, K. R., Baumgartner, M., Hall, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+honey+resistance+in+experimental+populations+of+bacteria+depends+on+the+type+of+honey+and+has+no+major+side+effects+for+antibiotic+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Evol+Appl%22%5BJournal%5D)">Evolution of honey resistance in experimental populations of bacteria depends on the type of honey and has no major side effects for antibiotic susceptibility.</a> Evol Appl. 14 (5), 1314-1327 (2021).</li>
<li>Cunningham, E., O'Byrne, C., Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+weak+acids+on+Listeria+monocytogenes+survival%3A+Evidence+for+a+viable+but+nonculturable+state+in+response+to+low+pH%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Effect of weak acids on Listeria monocytogenes survival: Evidence for a viable but nonculturable state in response to low pH.</a> Food Control. 20 (12), 1141-1144 (2009).</li>
<li>Kogure, K., Simidu, U., Taga, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tentative+direct+microscopic+method+for+counting+living+marine+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A tentative direct microscopic method for counting living marine bacteria.</a> Can J Microbiol. 25 (3), 415-420 (1979).</li>
<li>Albertini, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+multiparameter+analysis+for+Vibrio+alginolyticus+viable+but+nonculturable+state+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Cytom+J+Int+Soc+Anal+Cytol%22%5BJournal%5D)">Use of multiparameter analysis for Vibrio alginolyticus viable but nonculturable state determination.</a> Cytom J Int Soc Anal Cytol. 69 (4), 260-265 (2006).</li>
<li>Nocker, A., Camper, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approaches+toward+preferential+detection+of+viable+cells+using+nucleic+acid+amplification+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Lett%22%5BJournal%5D)">Novel approaches toward preferential detection of viable cells using nucleic acid amplification techniques.</a> FEMS Microbiol Lett. 291 (2), 137-142 (2009).</li>
<li>Trevors, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+but+non-culturable+%28VBNC%29+bacteria%3A+Gene+expression+in+planktonic+and+biofilm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Methods%22%5BJournal%5D)">Viable but non-culturable (VBNC) bacteria: Gene expression in planktonic and biofilm cells.</a> J Microbiol Methods. 86 (2), 266-273 (2011).</li>
<li>Ankley, L. M., Monteiro, M. P., Camp, K. M., O'Quinn, R., Castillo, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manuka+honey+chelates+iron+and+impacts+iron+regulation+in+key+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+App+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Manuka honey chelates iron and impacts iron regulation in key bacterial pathogens.</a> J App Microbiol. 128 (4), 1015-1024 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Bouillon Mueller Hinton</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>B12322</td><td></td></tr><tr><td>Bouillon Luria Bertani (LB)&nbsp ;</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP142602</td><td></td></tr><tr><td>BD Difco Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0812-07-1</td><td></td></tr><tr><td>chlorure de sodium</td><td>Sigma&nbsp ;</td><td>S3014-500g</td><td></td></tr><tr><td>méropénème</td><td>TargetMol</td><td>T0224</td><td></td></tr><tr><td>tobramycine</td><td>Selleck Chemicals</td><td>S2514</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus&nbsp ;</td><td>ATCC</td><td>ATCC29213</td><td></td></tr><tr><td> Pseudomonas aeruginosa</td><td>ATCC</td><td>ATCC9721</td><td></td></tr><tr><td>incubateur à secousses</td><td>Eppendorf</td><td>M13520000</td><td></td></tr><tr><td>incubateur</td><td>Benchmark Scientific</td><td>H2200-H&nbsp ;</td><td></td></tr> Microscope à fluorescence inversée <tr><td>Manukaguard Manuka Honey</td><td>Amazon</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>DMIL&nbsp ;</td><td>Leica Microsystems</td><td>11521265</td><td></td></tr><tr><td>Appareil photo numérique</td><td>Leica Microsystems</td><td>12730522</td><td></td></tr><tr><td>15 mL tubes de faucon</td><td>Genesee Scientific</td><td>28-103</td><td></td></tr><tr><td>pipettes sérologiques</td><td>Diagnocine</td><td>DP-LB0100005, DP-LB010010</td><td></td></tr><tr><td>Pipette d’aide à la pipette</td><td>Drummond Scientific Company</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>bec Bunsen</td><td>Fisher Scientific</td><td>S48108</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes Rainin</td><td>Pipette.com</td><td>L-20, L-200, L-1000</td><td></td></tr><tr><td>balance</td><td>Mettler Toledo</td><td>XS603S</td><td></td></tr><tr><td>Plaque à 96 puits</td><td>Falcon</td><td>351172</td><td></td></tr><tr><td>boucle d’inoculation</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-104-5</td><td></td></tr><tr><td>isopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2618-1</td><td></td></tr><tr><td>verre épandeur</td><td>fait maison</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Kit de coloration des morts vivants pour les bactéries</td><td>Invitrogen</td><td>L7012</td><td></td></tr><tr><td>tubes microfuge</td><td>Biologix Research Company</td><td>SKU 80-1500/P80-1500</td><td></td></tr><tr><td>feuille d’étain</td><td>Costco</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel de fabrication de figures</td><td>GraphPad</td><td>NA</td><td>GraphPad Prism a été utilisé pour la réalisation de figures et la réalisation d’analyses statistiques.</td></tr></tbody></table>

coloration vivante/morte pour quantifier les cellules viables mais non cultivables dans les bactéries causant des plaies traitées au miel de manuka

Live/Dead Staining for Quantifying Viable but Not Culturable Cells in Manuka Honey-Treated Wound-Causing Bacteria

Les formes de vie bactériennes viables mais non cultivables (VBNC) sont induites par des facteurs de stress, y compris le traitement antibiotique, et provoquent des infections récurrentes en raison de leur tolérance aux antibiotiques. Étant donné que l’HM est un antimicrobien à large spectre auquel la résistance a rarement été détectée, on a émis l’hypothèse qu’elle induisait moins d’AGVN que les antibiotiques conventionnels. La méthode décrite ici a été utilisée pour quantifier les VBNC formés par deux bactéries respons...

Coloration vivante/morte pour quantifier les cellules viables mais non cultivables dans les bactéries causant des plaies traitées au miel de Manuka

Antibiotic resistance and tolerance among bacteria pose a significant threat to global health. Mechanisms contributing to antibiotic resistance and ...

livedead-staining-for-quantifying-viable-but-not-culturable-cells

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Cette vidéo décrit un procédé de purification Wolbachia pipientis partir d'une ligne de cellules Anopheles gambiae et la culture de la endosymbiote dans la cellule sans moyen. Un test pour la viabilité de la bactérie est démontrée.

Le maintien de Wolbachia dans la cellule sans moyen

Source : Anderson, Q. L., et al. Un système pathologique de C. elegans à haut débit, à haute teneur et à base de liquide. J. Vis. Exp. (2018)La vidéo montre un essai en milieu liquide où des larves de C. elegans génétiquement modifiées sont exposées à des bactéries pathogènes dans une microplaque. Les toxines bactériennes sécrétées dans le milieu induisent le stress et la mort de l’hôte. Un colorant fluorescent colore les vers morts, ce qui permet de quantifier la mortalité par imagerie pour...

Évaluation de la mortalité induite par des bactéries pathogènes chez les larves de C. elegans

Source: Calatayud Arroyo, M., et al. Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface. J. Vis. Exp. (2018)The video demonstrates a method to evaluate the viability of anaerobic oral bacteria using fluorescent dyes and flow cytometry. It begins with culturing bacteria in oxygen-free broth, followed by resuspending a single colony from a blood agar plate. After incubation and dilution, the culture is stained with membrane-permeable and...

Fluorescence-Based Viability Assessment of Oral Anaerobic Bacteria

La vidéo montre un essai de destruction opsonophagocytaire in vitro utilisant une co-culture de neutrophiles humains avec Streptococcus pneumoniae. Les anticorps et les protéines du complément facilitent l’opsonisation des bactéries, permettant aux neutrophiles de reconnaître et de tuer les bactéries, montrant ainsi une activité opsonophagocytaire réussie des neutrophiles.

Évaluation de l’activité de destruction des opsonophagocytes contre les agents pathogènes bactériens

Cette vidéo présente un test permettant d’étudier l’effet de la rigidité de la matrice extracellulaire (MEC) sur l’infection bactérienne des cellules adhérentes. Des hydrogels de polyacrylamide de rigidité variable, recouverts de collagène, sont superposés dans une plaque multi-puits pour imiter la rigidité de l’ECM physiologique. Lors de la superposition de cellules endothéliales humaines sur les hydrogels et de l’infection des cellules avec des bactéries Listeria monocytogenes conçues pour...

Un test pour étudier l’impact de la rigidité de la matrice extracellulaire sur l’infection bactérienne

Au centre du champ de la pathogenèse bactérienne est la possibilité de définir si et comment les microbes survivent après une exposition à des cellules eucaryotes. Cet article décrit les protocoles pour l'utilisation de colorants fluorescents qui révèlent la viabilité des bactéries individuelles à l'intérieur et associés à des cellules hôtes.

Fluorescence méthodes de microscopie pour déterminer la viabilité des bactéries en association avec des cellules de mammifères

Les infections à biofilm montrent une tolérance élevée à la chimiothérapie. Aucun test unique ne permet de saisir la complexité des biofilms. Au lieu de cela, des tests complémentaires sont nécessaires. Nous présentons une plateforme de criblage (développée pour S. aureus) qui combine des tests de viabilité, de biomasse et de matrice de biofilm. Il permet la découverte de médicaments anti-biofilm, y compris l’évaluation des effets chimiothérapeutiques à long terme.

Une plate-forme de dosages anti-biofilm Adaptés à l&#39;exploration des bibliothèques de composés naturels

Un simple test ATP-instruments de mesure et vivre/morts méthode de coloration ont été utilisés pour quantifier et visualiser les Neisseria gonorrhoeae survie après traitement par ceftriaxone. Ce protocole peut être étendu pour examiner les effets antimicrobiens de n’importe quel antibiotique et peut être utilisé pour définir la concentration minimale inhibitrice d’antibiotiques dans les biofilms bactériens.

Examen quantitatif de la sensibilité aux antibiotiques d’essais commerciaux de Neisseria gonorrhoeae utilisation d’ATP à l’aide de granulats et de Live/Dead coloration

Décrite ici est une méthode permettant d’analyser l’expression des gènes bactériens dans les tissus animaux au niveau cellulaire. Cette méthode fournit une ressource pour étudier la diversité phénotypique survenant dans une population bactérienne en réponse à l’environnement tissulaire lors d’une infection.

Une méthode axée sur la Fluorescence pour étudier la régulation des gènes bactériens dans les tissus infectés

Le protocole décrit une méthode étape par étape pour mettre en place un modèle ex vivo de peau blessée ovine infectée par Staphylococcus aureus. Ce modèle à haut débit simule mieux les infections in vivo par rapport aux techniques de microbiologie conventionnelles et offre aux chercheurs une plateforme physiologiquement pertinente pour tester l’efficacité des antimicrobiens émergents.

Un nouveau modèle ex vivo de plaies cutanées ovines à haut débit pour tester les antibiotiques émergents

Nous présentons ici un protocole permettant de quantifier la survie post-stress dans des échantillons de levures. Le test utilise deux colorants fluorescents, SYTO 9 et l’iodure de propidium (PI), pour quantifier l’intégrité de la membrane plasmique. Il utilise la cytométrie en flux pour fournir des estimations quantitatives et reproductibles des fractions cellulaires vivantes, mortes et endommagées pour les échantillons de stress post-oxydatif.

Un test LIVE/DEAD optimisé couplé à la cytométrie en flux pour quantifier la survie post-stress dans les cellules de levure

Découvrez la coloration vivante/morte pour quantifier les cellules viables mais non cultivables dans les bactéries causant des plaies traitées au miel de Manuka. Cette méthode révèle l'impact du miel sur la physiologie bactérienne.

Coloration vivante/morte pour quantifier les cellules viables mais non cultivables dans les bactéries causant des plaies traitées au miel de Manuka (Vidéo) | JoVE Journal

Coloration vivante/morte pour quantifier les cellules viables mais non cultivables dans les bactéries causant des plaies traitées au miel de Manuka

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