Name: Fabrication et marquage de microbulles à l’aide de traceurs fluorescents et radioactifs (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: Découvrez la fabrication de microbulles lipidiques et leur marquage radioactif en une étape avec une efficacité supérieure à 95% sans purification. Cette méthode préserve les propriétés physicochimiques pour l'imagerie multimodale.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Les microbulles sont des agents théranostiques supramoléculaires de la taille d’un micron avec un noyau gazeux stabilisé par une protéine, un polymère ou, dans la plupart des cas, une enveloppe lipidique (Figure 1A). Lorsqu’elles sont injectées dans la circulation sanguine, les microbulles maintiennent des interfaces gaz/liquide qui sont détectables par ultrasons pendant des périodes de quelques minutes avant la dissolution de leurs noyaux de gaz 1,2. Par conséquent, la première utilisation clinique des microbulles a été celle des agents de contraste d’imagerie par ultrasons en temps réel3. L’invention des ultrasons focalisés thérapeutiques (FUS) a élargi les possibilités cliniques des microbulles. Lorsqu’elles sont stimulées par des FUS à basse fréquence, les microbulles oscillent et génèrent des forces mécaniques ciblées et réglables allant de la perméabilisation vasculaire transitoire à l’ablation des tissus focaux 4,5. En conséquence, au cours des 20 dernières années, la microbulle-FUS a été explorée pour l’ouverture de la barrière hémato-encéphalique (BHE), l’administration de médicaments tumoraux (par exemple, le cancer métastatique du pancréas, du cerveau et du foie), la thérapie des maladies neurodégénératives et l’ablation du cancer 6,7,8,9,10,11.
L’arsenal théranostique de microbulles continue de progresser dans de nouvelles directions passionnantes. Les applications conventionnelles d’administration de microbulles FUS reposent sur la co-administration de cargaisons thérapeutiques ou d’imagerie avec des microbulles commerciales. On s’intéresse de plus en plus à l’amélioration des capacités d’administration de microbulles et de FUS en comprenant les interactions entre la coquille des microbulles et les interactions biologiques, en explorant des formulations de microbulles non commerciales sur mesure et en générant des microbulles théranostiques tout-en-un avec une cargaison chargée directement sur la coquille de microbulles 12,13,14. En fait, environ 40 % des études sur l’administration de médicaments à base de microbulles lipidiques utilisent de telles microbulles chargées en coquille15. Au-delà de l’imagerie et de l’administration de médicaments, la microbulle-FUS s’est également révélée prometteuse pour améliorer la radiothérapie du cancer16 et activer les effets antinéoplasiques d’agents chargés en coquille autrement bénins grâce à la thérapie sonodynamique17,18.
Ces directions conventionnelles et élargies dans les applications du cancer des microbulles peuvent être avancées de manière plus stratégique en marquant les coquilles de microbulles avec des traceurs radioactifs. Dans le domaine des microbulles chargées de fret tout-en-un, un tel radiomarquage 1) facilite l’évaluation quantitative de référence de la biodistribution sur et hors cible de ces coquilles de microbulles chargées, 2) déduit des relations structure-activité pharmacocinétiques qui permettent de sélectionner de manière optimale les compositions de microbulles afin de maximiser l’administration sur la cible, et 3) guide la planification stratégique et appropriée de l’application et du traitement guidée par l’image (par exemple, les types de cibles tissulaires, dosimétrie, sélection de médicaments pour atténuer les problèmes de sécurité hors cible, utilité par rapport aux paradigmes de co-traitement conventionnels) des systèmes tout-en-un chargés de marchandises15,19. À un stade préclinique, une telle compréhension du devenir de la coquille des microbulles peut également éclairer des mécanismes d’action plus larges entre les microbulles et le FUS. Par exemple, il a été démontré que le transfert de lipides des coquilles de microbulles vers les cellules cibles influence la sonoporation activée par FUS12,20. La compréhension et l’optimisation d’un tel transfert peuvent donc éclairer les thérapies précliniques et cliniques de microbulles FUS dans lesquelles la sonoporation est impliquée (transfection in vitro, administration de médicaments, ablation tumorale, sensibilisation aux radiations et thérapie sonodynamique 20,21,22,23,24,25). Des installations doubles d’échographie et de radioimagerie permettraient également de surveiller l’ouverture des vaisseaux FUS et le traitement (p. ex., cinétique d’ouverture de la BHE) à partir d’un seul agent plutôt que de conceptions conventionnelles à deux agents26. Dans le même ordre d’idées, le radiomarquage par microbulles lipidiques pourrait servir d’alternative tout-en-un à agent unique microbulles-FUS/radiothérapie aux plateformes de co-administration microbulles-FUS + radiopharmaceutiques27.
La fragilité des microbulles est un défi non négligeable à un tel étiquetage. Toutes les stratégies de radiomarquage existantes sont limitées par des méthodologies de purification connues pour perturber la stabilité et la taille des microbulles, tandis que certaines présentent également un radiomarquage inefficace et instable 28,29,30,31,32. Les exigences de purification entraînent également des protocoles plus longs. Combiné à l’utilisation de radio-isotopes à courte durée de vie (p. ex., 18F t1/2 1,8 h, 28,29 99mTc t1/2 6 h, 3268Ga t1/2 1 h31), cela crée des inefficacités liées à la désintégration des radio-isotopes et limite les délais de planification de la radioimagerie et du traitement. Collectivement, ces limitations risquent d’entraîner l’acquisition d’une radioimagerie raccourcie et non représentative, de données pharmacocinétiques inexactes et d’une administration inefficace de radio-isotopes tumoraux.  
Dans ce rapport, ces limites sont surmontées en exploitant les capacités de chélation des métaux solides et stables de la porphyrine. Les porphyrines sont des macromolécules organiques hétérocycliques avec un anneau planaire hautement conjugué et un site de coordination central qui peut accueillir une variété de métaux. Cela comprend des radio-isotopes à vie plus longue tels que le cuivre-64 (t1/2 12,7 h), un produit radiopharmaceutique avec tomographie par émission de positons (TEP) et les faisabilités de comptage de γ33. Lorsqu’elles sont conjuguées à un squelette lipidique, les porphyrines peuvent être facilement incorporées dans des structures supramoléculaires et ensuite marquées avec du cuivre-64 avec une vitesse, une efficacité de chélation élevée et une stabilité sérique, tout en conservant les propriétés des particules mères non marquées33,34. De plus, les porphyrines sont actives par fluorescence avec une auto-extinction modulaire dans les nanoparticules et les microparticules qui est restaurée lors de la rupture des particules ; une lecture complémentaire à la TEP et au comptage γ qui facilite l’analyse du destin de la coquille en vrac et microscopique (Figure 1A)15.
En utilisant la porphyrine-lipide comme chélateur, ces propriétés ont été exploitées pour générer une nouvelle méthodologie de radiomarquage des microbulles en un seul pot, sans purification (Figure 1B, C) qui surmonte les limites associées aux méthodes existantes de radiomarquage des microbulles. Ce protocole atteint une efficacité de chélation de &gt;95 % du cuivre 64, ne nécessite pas de purification post-marquage et préserve les propriétés physicochimiques des microbulles. Il peut être facilement intégré dans la fabrication « bée » de microbulles lipidiques avant leur activation (Figure 1B). Il est polyvalent et peut être appliqué avec succès dans des formulations de microbulles personnalisées et commerciales avec différentes longueurs de chaîne lipidique acyle (C16 à C22), charge (neutre et anionique) et compositions porphyrine-lipide (1 % mol, 10 % mol, 30 %), générant des microbulles avec une activité radio et de fluorescence. Sa capacité d’adaptation peut également s’étendre au-delà de la porphyrine. Le protocole à un seul pot peut être modifié pour utiliser d’autres chélateurs disponibles dans le commerce (p. ex., le pentaacétate de diéthylènetriamine [DTPA)-lipide]) et des fluorophores (p. ex., DiI). Il peut également être modifié pour étiqueter des formulations de microbulles préfabriquées grâce à une approche de « dopage ». En conséquence, cette méthode permet de produire des microbulles sur mesure et traçables (radio, fluorescentes ou double radio/fluorescente actives) utiles pour faire progresser les applications mécanistes, d’imagerie et thérapeutiques des microbulles-FUS. Le protocole ci-dessous décrit la fabrication de microbulles lipidiques, l’application du protocole de radiomarquage à un pot, le radiomarquage requis et la caractérisation des propriétés physicochimiques, ainsi que les modifications potentielles.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67431/67431fig01v4.jpg"> 
Figure 1 : Protocole de fabrication de microbulles et de radiomarquage. (A) La porphyrine-lipide, sous forme de pyrophéophorbide-a-lipide, sert de chélateur multimodal dans ce protocole. En tant que monomère chélaté en cuivre-64 (i), il a des capacités de TEP et d’imagerie. Sa fluorescence est éteinte sous forme de particules (microbulles (ii) et leur nanodescendance post-dissolution (iii)) et non éteinte avec perturbation des particules (iv). (B) Protocole d’hydratation/activation du film lipidique décrit dans le présent rapport pour générer des microbulles lipidiques à partir du sol et (C) intégration du radiomarquage à un seul pot entre la formation de suspension lipidique et l’activation des microbulles. Cette figure a été adaptée avec la permission de Rajora et al.15. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67431/67431fig1v2large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

<table><tbody><tr><td>64CuCl2</td><td>Washington University School of Medicine, Mallinckrodt Institute of Radiology</td><td>N/A</td><td>Commander en petit volume (< 10 et micro ; L) dissous dans 0,1 N HCl</td></tr><tr><td>Acide acétique&nbsp ;</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>&ge ; Pureté à 95 %</td></tr><tr><td>Feuille d’aluminium</td><td>Toute entreprise Acétate</td> d’ammonium Toute entreprise <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>Pureté : &ge ; 98</td></tr><tr><td> %Balance - analytique</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>Capable de mesurer jusqu’à 0,1 mg</td></tr><tr><td>Sonicateur à bain</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>Peut être chauffé à 69 oC</td></tr><tr><td>Ouverture CC - 30 microns</td><td>Beckman Coulter</td><td>A36391</td><td>Plage de diamètres des particules : 0,6-18 μm</td></tr><tr><td>Électrolyte CC</td><td>Beckman Coulter</td><td>8546719</td><td>diluant Isoton II</td></tr><tr><td>Logiciel CC</td><td>Beckman Coulter</td><td>Multisizer 4e</td><td></td></tr><tr><td>Unités de filtration centrifugeuses (0,5 mL 30 000 MWCO) avec microtubes à centrifuger compatibles</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC503096</td><td>Amicon Ultra - 0,5 mL</td></tr><tr><td>Tubes à centrifuger - 15 mL avec bouchons</td><td>Toute entreprise Chloroforme Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>Pureté : &ge ; 99,8 %&nbsp ;</td></tr><tr><td>Compteur de socs</td><td>Beckman Coulter</td><td>B43905</td><td>Multisizer 4e Compteur de socs</td></tr><tr><td>Cales de recouvrement</td><td>VWR</td><td>48393081</td><td>VWR micro cover glass</td></tr><tr><td>CuCl2</td><td>N’importe quelle entreprise S’assurer</td><td></td><td>qu’il n’est pas oxydé</td></tr><tr><td>CuCl2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cuvettes, longueur de trajet de 1 cm</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cuvettes - 10 mL en plastique pour les mesures CC</td><td>Beckman Coulter</td><td>A35471</td><td>Coulter Counter Accuvette ST</td></tr><tr><td>ddH2O</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>Peut être obtenue grâce à un système de purification d’eau ultra-pure</td></tr><tr><td>DiI (1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindocarbocyanine Perchlorate)</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td>Forme en poudre</td></tr><tr><td>Calibrateur de dose</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>Capable de lire le cuivre-64</td></tr><tr><td>DPPA (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphate (sel de sodium))</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>830855P</td><td>Forme en poudre</td></tr><tr><td>DPPC (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine)</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>850355P</td><td>Forme en poudre</td></tr><tr><td>DPPE-MPEG (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[méthoxy(polyéthylène glycol)-5000] (sel d’ammonium))Avanti</td> <td>Polar Lipids</td><td>880200P</td><td>Forme</td></tr> <tr><td>en poudreDTPA-lipide (1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-diéthylènetriamineacide pentaacétique (sel d’ammonium))</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>790106P</td><td>Forme de poudre</td></tr><tr><td>EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique)</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Compteur Gamma</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>Capable de lire le cuivre-64</td></tr><tr><td>Capuchons poussoirs de tube de comptage gamma</td><td>Globe Scientific</td><td>22-171-665</td><td>À bride bouchons pour tubes de 12 mm</td></tr><tr><td>Tubes de comptage gamma</td><td>Sarstedt</td><td>55.1579</td><td>5 mL, 75 x 12 mm, PS</td></tr><tr><td>Bécher en verre - 250 mL</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td>Capable de résister à des températures allant jusqu’à 100 oC</td></tr><tr><td>Four de séchage en verre</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td>Peut être chauffé à 80 oC</td></tr><tr><td>Seringues en verre de microlitre - 25, 50, 100, 1000 et micro ; L</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>Compatible avec les solvants organiques</td></tr><tr><td>Flacons à scintillation en verre - 20 mL</td><td>VWR</td><td>66022-081</td><td>VWR&reg ; Flacons à scintillation, verre borosilicaté, avec bouchons à vis, avec doublure en feuille de pulpe</td></tr><tr><td>Flacons en verre - 0,5 dram</td><td>VWR</td><td>66011-020</td><td>Flacon VWR 1/2 dram, avec bouchon à vis phénolique noir et doublure en pulpe à face polyvinyle</td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7757-1L</td><td>Pureté :&nbsp ; &ge ; 99.0 %&nbsp ;</td></tr><tr><td>Pipette/pistolet gradué</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plaque</td><td></td><td></td> chaude/agitatrice <td>Equipé d’un capteur de température pour le contrôle automatique de la température</td></tr><tr><td>Acide chlorhydrique - 0,1 N</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plaques iTLC</td><td>Agilent</td><td>A120B12</td><td>&nbsp ; Papier de chromatographie iTLC-SA</td></tr><tr><td>Tissus de laboratoire</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unité de filtration sous vide de médias</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td>Taille des pores de 0,22 micron, membrane PES, capacité d’entonnoir de 500 mL</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td>Pureté :&nbsp ; &ge ; 99,8 %, qualité HPLC, conforme aux spécifications ACS</td></tr><tr><td>Tubes de microcentrifugation non stériles - 1,5 mL</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubes de microcentrifugation stériles - 1,5 mL</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micropipetes - p1000, p200, p20, p10</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>Assurez-vous que sont calibrées</td></tr><tr><td>Lames de microscope</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15 Lames de</td><td>microscope Superfrost Plus Aiguilles prénettoyées</td></tr><tr><td>- 18 g</td><td></td><td></td><td>Parafilm stérile</td></tr><tr><td></td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8537-500ML</td><td>DPBS, modifié, sans chlorure de calcium ni chlorure de magnésium, liquide, stérile-filtré, adapté à la culture cellulaire</td></tr><tr><td>PFP</td><td>FluoroMed</td><td>APF-N40HP</td><td>Pureté :&nbsp ; &ge ; 99.8 %</td></tr><tr><td>Ligne PFP</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>Tuyau en plastique de 1/4 de pouce de diamètre coupé environ 50 cm de longueur</td></tr><tr><td>Régulateur PFP</td><td>Swagelok</td><td>SS-1RF4 et SS-4HC-1-4</td><td></td></tr><tr><td>pH-mètre</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normes de pH 4 et 7</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pointes de pipette pour p1000, p200, p10 - non stériles</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pointes de pipette pour p1000, p200, p10 - stériles</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seringue en plastique - 1 mL</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>Stérile</td></tr><tr><td>Propylène glycol</td><td>BioShop</td><td>PRO888.500</td><td>Pureté :&nbsp ; &ge ; 99.5 %</td></tr><tr><td>Pyro-lipide</td><td>N/A</td><td></td><td>Fabriqué en interne</td></tr><tr><td>Pince à pointe en caoutchouc</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td>Mélange de pointes fines et de bords plats/carrés recommandé</td></tr><tr><td>Ciseaux</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de sodium - 1 N</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de sodium - 10 N</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spectrofluorimètre</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td>Capable d’une excitation de 410 nm et d’une émission de 600 à 850 nm</td></tr><tr><td>Logiciel de spectrofluormétrie</td><td>Spectromètre Horiba</td><td>FluorEssence</td><td></td></tr><tr><td></td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seringue - 1 mL</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td>Filtres de seringue jetables, en plastique et stériles</td></tr><tr><td>- Taille des pores de 0,2 micron</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td>Matériau de la membrane : PES ou autre compatible avec l’acétate d’ammonium/acide acétique et le PBS</td></tr><tr><td>Tube à essai - 10 mL</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>N’importe quelle entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dessiccateur/vide</td><td>sous vide Toute entreprise</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vialmix</td><td>Lantheus Medical Imaging</td><td>515030-0508</td><td>Désigné dans le protocole comme un agitateur de flacon mécanique</td></tr><tr><td>Peser papier</td><td>Toute entreprise</td><td></td><td>Pour éviter de perdre du produit, il est recommandé de couper le papier de poids en carrés de 3 x 3 cm</td></tr></tbody></table>

fabrication et marquage de microbulles à l’aide de traceurs fluorescents et radioactifs

Fabricating and Labeling Microbubbles with Fluorescent and Radioactive Tracers

Les principaux résultats quantifiables lors de la fabrication de microbulles radiomarquées sont la pureté radiochimique et l’efficacité du radiomarquage. Ce protocole utilise respectivement l’iTLC et une procédure centrifuge validée pour caractériser chacun. La figure 2A montre que des puretés radiochimiques moyennes et des efficacités de ≥95 % ont été obtenues dans des formulations commerciales imitant les microbulles dans lesquelles le lipide de l’hôte a été substitué au pyrolipide à des c...

Fabrication et marquage de microbulles à l’aide de traceurs fluorescents et radioactifs

Microbubbles are lipid-shelled, gas-filled particles that have evolved from vascular ultrasound contrast agents into revolutionary cancer therapy ...

fabricating-labeling-microbubbles-with-fluorescent-radioactive

Research

Recherche

JoVE Journal

Cancer Research

Recherche sur le cancer

Une puce microfluidique a été fabriquée pour produire des paires de points d’or pour la génération de bulles en tandem et des îlots enrobés de fibronectine pour la structuration de cellules uniques à proximité. Le champ d’écoulement résultant a été caractérisé par vélocimétrie par image de particules et a été utilisé pour étudier divers effets biologiques, notamment la poration de la membrane cellulaire, la déformation de la membrane et la réponse intracellulaire du calcium.

Un système microfluidique avec Patterning de surface pour les enquêtes cavitation Bubble (s) Interaction -Cell et les effets biologiques résultantes au niveau d&#39;une seule cellule

Les protocoles présentés peuvent être utilisés pour caractériser la réponse des microbulles marquées par fluorescence conçues pour les applications d’administration de médicaments déclenchées par ultrasons, y compris leurs mécanismes d’activation ainsi que leurs bioeffets. Cet article couvre une gamme de techniques de microscopie in vitro et in vivo réalisées pour capturer la longueur et les échelles de temps pertinentes.

Méthodes de microscopie multi-temps pour la caractérisation de microbulles marquées par fluorescence pour la libération de médicaments déclenchée par ultrasons

Une procédure visant à implanter orthotopiquement des cellules cancéreuses du pancréas exprimant des protéines fluorescentes vertes (PANC-1 GFP) dans le pancréas de souris Balb-c Ola Hsd-Fox1nu afin d’évaluer la progression tumorale et les métastases est présentée ici.

Fluorescent modèle de souris orthotopique de cancer du pancréas

Nous décrivons une méthode pour l'étiquetage stable de xénogreffes dérivées de patients (PDXs) avec des particules lentiviraux exprimant la protéine et la luciférase reporters vert fluorescent. Cette méthode permet de suivre la croissance de PDXs au niveau du site primaire, ainsi que la détection des métastases spontanées et expérimentales en utilisant des systèmes d'imagerie in vivo.

Étiquetage des xénogreffes de patients dérivés cancer du sein avec traçables Reporters pour la croissance tumorale et la métastase études

Pancreatoduodenctomy laparoscopique (LPD) peut-être offrir d’avantages par rapport à pancreatoduodenectomy ouvert, y compris la premiere mobilisation post-opératoire, moins retarder la vidange gastrique et une hospitalisation plus courte. Cependant, LPD est techniquement complexe et pas bien standardisée, surtout en ce qui concerne l’anastomose pancréatique. Nous décrivons une technique normalisée pour l’anastomose pancréatique au cours de la LPD : modification Blumgart pancreaticojejunostomy.

Pancreatoduodenectomy laparoscopique avec mis à jour le Blumgart Pancreaticojejunostomy

Aneuploïdie entraîne l’instabilité du génome, qui finalement produit arrêté au cycle cellulaire des cellules avec des caryotypes complexes. Cet article fournit une méthode simple et pratique pour isoler les cellules aneuploïdes avec caryotypes complexes qui cessent de se diviser.

Génération et l’isolement des cellules Cycle cellulaire-arrêté avec caryotypes complexes

Le but du présent protocole est de démontrer l’injection intra prostatique de cellules de cancer de la prostate, avec castration ultérieure. Orthotopique des modèles précliniques de cancer de la prostate androgéno-dépendants et résistant à la castration sont essentielles pour étudier la maladie dans le contexte d’un micro-environnement tumeur cliniquement pertinents et un hôte immunocompétent.

Un modèle murin syngénique bioluminescentes et Fluorescent orthotopique du Cancer de la Prostate androgéno-dépendants et résistant à la Castration

Est présenté ici, un protocole d’analyse moyen - à haut-débit des événements de phosphorylation de la protéine au niveau cellulaire. Phospho cytométrie en flux est une approche puissante pour caractériser des aberrations signalisation, identifier et valider des biomarqueurs et évaluer pharmacodynamique.

Cytométrie en flux phospho avec cellule fluorescente code-barres pour seule cellule signalisation d’analyse et découverte de Biomarker

Nous présentons ici un protocole détaillé pour une technique mis à jour le zymographic dans lequel les peptides fluorescents sont utilisés comme substrat biodégradable en lieu et place des protéines natives. Électrophorèse d’échantillons biologiques dans zymogrammes de peptides fluorescents permet la détection d’un plus large éventail de protéases que les techniques de zymographic précédente.

Détection d’activité de la protéase par Zymographie peptides fluorescents

L'immunohistochimie fluorescente multiplex est une technologie émergente qui permet la visualisation de plusieurs types de cellules dans le tissu intact de formaline-fixe, incorporé de paraffine (FFPE). Présentés sont des lignes directrices pour assurer un multiplexe 7-couleur réussie avec des instructions pour optimiser les anticorps et les réactifs, la préparation des diapositives, la conception et des conseils pour éviter les problèmes communs.

Optimisation, conception et éviter les pièges dans l'immunohistochimie fluorescente du multiplex manuel

Découvrez la fabrication de microbulles lipidiques et leur marquage radioactif en une étape avec une efficacité supérieure à 95% sans purification. Cette méthode préserve les propriétés physicochimiques pour l'imagerie multimodale.

Fabrication et marquage de microbulles à l’aide de traceurs fluorescents et radioactifs

Explorer plus de vidéos